依托咪酯对缺氧复氧诱导心肌细胞炎性损伤及HMGB1/RAGE/NF-κB通路的影响

目的:探讨麻醉诱导剂依托咪酯(Eto)在缺氧/复氧(H/R)后心肌细胞炎性损伤中的作用及其对高迁移率族蛋白B1/晚期糖基化终末产物受体/核因子κB(HMGB1/RAGE/NF-κB)通路的影响和机制。方法:随机将大鼠H9C2心肌细胞分成对照组、H/R组、Eto-L组(2 mg/L Eto预处理)、Eto-H组(4 mg/L Eto预处理)、正丁酸钠组(10 mmol/L HMGB1抑制剂正丁酸钠100μL)、Eto-H+正丁酸钠组;通过缺氧7 h后复氧2 h建立H/R心肌细胞模型,于造模前在Eto-L组、Eto-H组、正丁酸钠组及Eto-H+正丁酸钠组中分别添加相应药物处理48 h,而对照组、H/R组细胞常规培养;检测细胞上清液白介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)水平及乳酸脱氢酶(LDH)漏出率;分别通过苏木精-伊红(HE)染色、MTT法、流式细胞仪、比色法观察H9C2细胞形态、活力、凋亡、半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)活性;Western blotting检测caspase-3及HMGB1/RAGE/NF-κB通路蛋白表达。结果:与对照组比较,H/R组细胞上清液中IL-1β、TNF-α及IL-6水平、LDH漏出率、细胞病理程度、凋亡率、caspase-3活性及其蛋白表达、p-NF-κB p65/NF-κB p65、RAGE、HMGB1表达水平增加,而细胞存活率降低(P<0.05);与H/R组比较,Eto-L组、Eto-H组、正丁酸钠组细胞上清液IL-1β、TNF-α及IL-6水平、LDH漏出率、细胞病理程度、凋亡率、caspase-3活性及其蛋白表达、p-NF-κB p65/NF-κB p65、RAGE、HMGB1表达水平减少,而细胞存活率增加(P<0.05),且Eto-L组、Eto-H组间上述指标比较,差异有统计学意义(P<0.05);与Eto-H组比较,Eto-H+正丁酸钠组细胞上清液IL-1β、TNF-α及IL-6水平、LDH漏出率、细胞病理程度、凋亡率、caspase-3活性及其蛋白表达、p-NF-κB p65/NF-κB p65、RAGE、HMGB1表达水平减少,而细胞存活率增加(P<0.05)。结论:Eto可以抑制H/R心肌细胞损伤,其机制可能是通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB通路和下调促炎性细胞因子的表达来实现。

lncRNA MIAT调控miR-539-5p对过氧化氢诱导的心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制

目的探究长链非编码RNA(lncRNA)心肌梗死相关转录本(MIAT)调控微小RNA(miR)-539-5p对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法将大鼠心肌细胞H9c2分为Con组(空白培养细胞)、H_(2)O_(2)组(100μmol/L H_(2)O_(2)处理细胞)、H_(2)O_(2)+si-NC组(转染si-NC后加H_(2)O_(2)处理)、H_(2)O_(2)+si-MIAT组(转染si-MIAT后加H_(2)O_(2)处理)、H_(2)O_(2)+miR-NC组(转染miR-NC后加H_(2)O_(2)处理)、H_(2)O_(2)+miR-539-5p组(转染miR-539-5p后加H_(2)O_(2)处理)、H_(2)O_(2)+si-MIAT+anti-miR-NC组(共转染si-MIAT和anti-miR-NC后加H_(2)O_(2)处理)、H_(2)O_(2)+si-MIAT+anti-miR-539-5p组(共转染si-MIAT和anti-miR-539-5p后加H_(2)O_(2)处理)。实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测MIAT和miR-539-5p相对表达量;流式细胞术实验检测细胞凋亡;Western印迹实验检测切割型胱天蛋白酶(Cleaved-caspase)3蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量;双荧光素酶报告实验测定MIAT和miR-539-5p相互作用。结果与Con组比较,H_(2)O_(2)组心肌细胞中MIAT相对表达量明显增加,凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达、MDA含量明显增加,miR-539-5p相对表达量、SOD活性、GSH-Px活性明显降低(P<0.05)。干扰MIAT或过表达miR-539-5p明显降低H_(2)O_(2)诱导的心肌细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达、MDA含量,明显增加SOD活性、GSH-Px活性。MIAT调控miR-539-5p表达,下调miR-539-5p能够逆转敲低MIAT对以上指标的作用。结论敲低MIAT可抑制H_(2)O_(2)刺激的H9c2氧化损伤和凋亡,其机制可能与miR-539-5p上调有关。