环状RNA PRKCH通过微小RNA-142-3p/肿瘤坏死因子受体相关因子6轴调控炎症刺激软骨细胞生物学特征

目的探究环状RNA(circRNA)-PRKCH通过微小RNA(miRNA, miR)-142-3p/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)轴调控炎症刺激软骨细胞生物学特征的作用及分子机制。方法比较30例骨关节炎患者与30例正常人外周血血清中circ-PRKCH的表达差异, 并在ATDC5细胞中探究circ-PRKCH对细胞增殖、凋亡以及炎性因子分泌等生物学特性的影响。预测并验证circ-PRKCH的下游miRNA、靶基因以及分子间的调控关系。两组间比较应用Student’st检验。结果 circ-PRKCH在骨关节炎患者外周血血清中的表达水平(7.130±1.489)显著高于正常人(2.354±0.982, t=14.670, P<0.01), 并且在脂多糖(LPS)刺激的ATDC5细胞中, circ-PRKCH的表达水平升高(7.890±0.354比1.000±0.757, t=-14.289, P<0.01)。干扰circ-PRKCH同时抑制miR-142-3p或过表达TRAF6可恢复炎症对ATDC5细胞增殖活性的抑制作用(1.541±0.050比0.571±0.051, t=27.161, P<0.01;1.541±0.050比0.555±0.043, t=30.015, P<0.01)、对细胞凋亡的诱导作用(3.963±0.305比15.557±1.146, t=-16.927, P<0.01;3.963±0.305比15.257±0.370, t=-40.763, P<0.01)、对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)分泌的促进作用(297.464±17.862比591.626±40.527, t=-11.504, P<0.01;297.464±17.862比594.953±20.252, t=-19.081, P<0.01)以及对白细胞介素-8(IL-8)分泌的促进作用(234.309±11.755比661.416±33.197, t=-21.006, P<0.01;234.309±11.755比658.751±21.369, t=-30.143, P<0.01)。结论 circ-PRKCH可通过miR-142-3p/TRAF6轴调控炎症刺激软骨细胞的生物学特征。

长链非编码RNA HOX转录反义RNA对微小RNA-519c-3p/骨形成蛋白Ⅱ型受体调控骨关节炎进展作用及分子机制

目的探究长链非编码RNA(LncRNA)HOX转录反义RNA(HOTAIR)通过miR-519c-3p/骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPR2)调控骨关节炎进展的作用及分子机制。方法利用生物信息学网站ENCORI、TargetScanHuman 8.0工具分析预测LncRNA HOTAIR的下游miR-519c-3p以及靶基因BMPR2,并通过双荧光素酶报告及RIP实验验证分子间的相互结合。通过慢病毒转染将miR-519c-3p在细胞中过表达后,将构建好的软骨细胞分为NC组和miR-519c-3p过表达组(miR-519c-3p组)。两组细胞分别应用CCK-8检测、蛋白质印迹、实时荧光定量聚合酶链反应、酶联免疫吸附试验等检测探究LncRNA HOTAIR/miR-519c-3p/BMPR2轴对人软骨细胞骨关节炎的进展的影响。结果与NC组比较,miR-519c-3p组细胞生长变慢,降解酶[降基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、含Ⅰ型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)4和ADAMTS5]和促炎因子(白细胞介素1β、白细胞介素6和肿瘤坏死因子α)水平显著降低,而COL2A1和SOX9水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。此外,LncRNA HOTAIR可结合miR-519c-3p,并且BMPR2是miR-519c-3p的下游靶基因,回补实验证实LncRNA HOTAIR可通过miR-519c-3p/BMPR2轴调控人软骨细胞生长、降解酶以及促炎因子的分泌。结论LncRNA HOTAIR可通过miR-519c-3p/BMPR2轴调控骨关节炎的进展。