3-甲基腺嘌呤对EPCs超微结构和LC3-Ⅱ蛋白表达的影响研究

目的探索3-甲基腺嘌呤(3-MA)对大鼠骨髓源性内皮祖细胞(EPCs)超微结构和自噬体膜型(LC3-Ⅱ)蛋白表达的影响。方法采用密度梯度法取大鼠骨髓EPCs,体外诱导分化并鉴定;分成对照组和4个3-MA浓度组(分别加入1.25、2.5、5、10mmol/L 3-MA)。采用单丹(磺)酰戊二胺(MDC)荧光染色和透射电镜观察3-MA给药后EPCs自噬的发生。Western blot检测3-MA给药后EPCs内LC3-Ⅱ蛋白表达的变化。结果 MDC荧光染色和透射电镜均观察到5、10 mmol/L组EPCs超微结构明显区别于正常及死亡细胞,是典型的凋亡形态图。Western blot检测3-MA给药24h后EPCs LC3-Ⅱ蛋白表达降低;与对照组比较,5、10 mmol/L组LC3-Ⅱ蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论 5、10mmol/L的3-MA对EPCs超微结构和LC3-Ⅱ蛋白表达均有影响,推测浓度≥5mmol/L的3-MA能抑制EPCs的自噬。

3-甲基腺嘌呤对大鼠内皮祖细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的观察3-甲基腺嘌呤（3-methlyadenine，3-MA）对大鼠骨髓源性内皮祖细胞（endothelial progenitor cells，EPCs）增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法密度梯度法取夫鼠骨髓EPCs，体外诱导分化并鉴定。实验分对照及不同浓度（1．25、2．5、5、10mmol／L）3-MA绀。四氮唑龄（methyl thiazolyl tetrazolium，M．rr）法测细胞增殖，流式细胞仪测凋亡率及细胞J吉J期。结果（1）5mmol／L组促EPCs增殖；10mmol／L组抑制EPCs增殖，差异有统计学意义（P〈0．05）。其余两组对EPCs增殖无明显影响，差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）10mmol／L组促EPCs凋亡，差异有统计学意义（P〈0．05）。其余各组对EPCs凋亡率无明显影响，与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）5、10mmol／L组影响细胞周期，5mmol／L组G0／G1期细胞减少、S和G2／M期增加；10mmol／L组发生S期阻滞，G，／M细胞减少；差异有统计学意义（P〈0．05）。结论3-MA对EPCs增殖及凋亡的影响与其浓度有关，当浓度为10mmol／L时抑制增殖并促进凋亡。