多肋藻(Costaria costata)多糖的提取分离及理化性质分析

目的从多肋藻(Costaria costata)中提取分离多糖并对其进行理化性质分析。方法采用水和2%碳酸钠水溶液于85℃提取多糖,采用高效凝胶渗透色谱法(HPGPC)分析多糖相对分子质量,用核磁共振氢谱(1H-NMR)法分析褐藻胶中M/G比,用高效液相色谱法(HPLC)分析褐藻糖胶单糖组成。结果从多肋藻中得到1种褐藻胶(ALG)和2种褐藻糖胶(CWF,CAF),其得率分别为42.4%、3.32%和3.52%;相对分子质量分别为212、335和195kD;ALG中M/G比为1.55;CWF和CAF中均含有岩藻糖、半乳糖、甘露糖、葡萄糖醛酸、鼠李糖、木糖和葡萄糖胺等7种单糖,其摩尔比分别为50.54、20.53、10.90、8.87、2.67、4.30、2.20及47.52、32.10、7.90、4.28、3.70、1.20、3.30;FTIR显示CWF和CAF中含有硫酸酯基,经分析表明其含量分别为23%和9%。结论多肋藻中多糖主要含有褐藻胶以及2种结构复杂的褐藻糖胶。

一种紫贻贝水提多糖的理化性质和结构分析

目的从紫贻贝中提取和分离纯化多糖,并对其基本理化性质和结构进行分析,为紫贻贝多糖活性研究提供基础。方法将紫贻贝鲜肉制成丙酮粉后,经60℃热水提取,去核酸和采用Sepharcryl S-300凝胶层析分离得到了一种水溶性多糖组分(HWS)。采用硫酸-苯酚法、Folin-酚法、柱前衍生高效液相色谱法和高效凝胶渗透色谱法分别对HWS的总糖含量、蛋白含量、单糖组成、相对分子质量进行了测定,并通过甲基化和气质联用(GC/MS)分析、红外光谱(FT-IR)、核磁共振(NMR)技术对HWS的结构进行了分析。结果 HWS是以(1→4)-α-D-Glcp为主链,含有少量的→2,4)-Glcp-(1→和→6)-β-Glc-(1→分支的葡聚糖,平均每6个主链糖残基含有1个分支。结论采用60℃热水提取和凝胶柱层析分离得到紫贻贝多糖,通过多种化学分析及现代仪器分析技术确定了HWS的结构,为紫贻贝多糖活性的深入研究提供了参考和借鉴。

碱提灵芝多糖的分离纯化、结构表征及免疫活性评价

目的从赤芝Ganoderma lucidum中提取、分离和纯化获得碱提多糖组分,在表征其基本理化性质和精细结构的基础上,对其体外免疫调节活性进行研究。方法赤芝子实体干燥粉碎后,利用碱提醇沉法提取粗多糖,经Q-Sepharose Fast Flow离子交换色谱柱纯化得到灵芝多糖组分(LZJ-0.15)。采用PMP柱前衍生-高效液相色谱法(HPLC)及高效凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射联用法(HPGPC-MALLS)测定LZJ-0.15的单糖组成及相对分子质量特征,并通过核磁共振氢谱(1H-NMR)、碳谱(13C-NMR)及二维谱(1H-1H COSY和1H-13C HSQC)对LZJ-0.15的精细结构进行表征。采用小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红实验对灵芝多糖LZJ-0.15进行免疫活性评价。结果 LZJ-0.15的相对分子质量、分子半径及Mw/Mn分别为24 700、46.6 nm和1.019,其单糖组成分析显示以葡萄糖为主(92.3%),核磁谱图显示LZJ-0.15为→3)Glc(β1→及→6)Glc(β1→连接为主的葡聚糖。RAW264.7细胞吞噬中性红实验显示LZJ-0.15具有较好的免疫调节活性。结论赤芝碱提灵芝多糖相较于水提多糖组分具有较优的免疫活性,有望开发成重要的免疫调节剂。

何首乌多糖的结构表征及其免疫调节活性研究

目的从何首乌Polygonum multiflorum中提取分离多糖,对其结构进行表征,并评价其免疫调节活性。方法采用水提、醇沉法从何首乌中提取粗多糖,经Q-Sepharose Fast Flow强阴离子交换色谱柱分离纯化得到何首乌多糖(PMT)。利用高效凝胶渗透色谱-十八角度激光光散射联用法(HPGPC-MALLS)测定PMT的绝对分子质量,采用PMP柱前衍生-高效液相色谱法(HPLC)测定单糖组成。采用二维核磁共振波谱(2D-NMR)对PMT的结构进行表征。采用四甲偶氮唑盐(MTT)法、中性红比色法和Griess法分别检测PMT对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7的生长、吞噬活性和释放一氧化氮(NO)能力的影响。结果 PMT是一种α-1,4-葡聚糖,其绝对分子质量为3.96×105。PMT可显著促进RAW264.7细胞的增殖,促进细胞的吞噬能力,增加NO的释放量。结论何首乌来源的α-1,4-葡聚糖具有显著的免疫调节活性,具有药物开发潜力。

κ-卡拉胶酶CgkX催化区的重组表达菌株筛选和发酵优化

目的:CgkX是来自Pseudoalteromonas sp.QY203的一种高活性、高稳定性的κ-卡拉胶酶,本文旨在构建CgkX催化结构域(CgkX-CM)重组表达菌株,并对发酵条件进行优化,提高CgkX-CM的产量。方法:在分析κ-卡拉胶酶CgkX-CM基因序列的基础上,构建多种CgkX-CM表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行重组表达,通过酶活测定筛选其中产量最高的表达菌株,并优化发酵起始pH、诱导温度、IPTG浓度、装液量以及甘氨酸浓度等因素。结果:构建了5种重组表达菌株,其中E.coli BL21(DE3)/p ET22b-CgkX-CM酶产量是其他重组菌株的7.4-11.6倍。确定了该菌株最佳发酵条件为:培养基含1 g·L^(-1)甘氨酸(起始pH 7.5),装液量为75 m L,0.1 mmol·L^(-1) IPTG 20℃诱导28 h,酶产量是优化前的7.3倍。结论:经过重组表达载体筛选和发酵优化,CgkX-CM产量大幅度提高,为今后比较CgkX全长及其催化区域的酶学性质,确定C端Big_2结构域对CgkX的作用奠定了基础。