基于PCR和TOF-MS海洋源产脂肽芽孢杆菌筛选

【目的】准确高效分离红树林等海洋环境中产脂肽芽孢杆菌。【方法】将前期从红树林环境筛出具有抗菌活性的12株芽孢菌株作为研究菌株,采用溶血活性及排油作用对其中的可能产脂肽菌株进行初步筛选,并基于脂肽合成酶基因PCR扩增法对脂肽合成酶基因携带菌复筛,采用飞行时间质谱(TOF-MS)对所产脂肽进行鉴定。【结果】初步发现6株芽孢杆菌具有溶血活性,其中HY-5、HY-4和HN-9这3株具有排油能力,油层透明圈的直径分别为45、32和3 mm。PCR扩增检测到HY-5含有iturin、surfactin和bacillomycin D合成酶基因,HY-4含有iturin、surfactin合成酶基因,HN-9含有iturin合成酶基因。TOF-MS检测到HY-5和HY-4的发酵液含surfactin、iturin和bacillomycin 3种脂肽,HN-9的发酵液只含iturin。【结论】基于PCR与TOF-MS为核心的级联技术,建立一种海洋源脂肽产生菌快速筛选以及脂肽谱快速鉴定的方法,解决海洋源芽孢杆菌在常规培养基难合成脂肽造成的漏筛情况。

选择性脂肪酶水解金枪鱼油制备改性水解甘油酯工艺优化

【目的】优化选择性脂肪酶水解金枪鱼油制备改性水解甘油酯的工艺参数,分析脂质改性前后甘油酯的脂质组分差异。【方法】综合考虑水解度、水解速度和水解甘油酯中ω-3 PUFAs含量,筛选出能选择性富集ω-3 PUFAs的两种脂肪酶,并分别由单因素试验和正交试验优化两种脂肪酶水解鱼油的工艺参数。【结果与结论】筛选出能富集ω-3 PUFAs、改善脂肪酸组成的脂肪酶Lipozyme®TL 100L(TL 100)和NovoCoADL(ADL),其中TL 100的适宜水解条件为缓冲液pH值7.0,温度40℃,水油质量比2∶1;ADL的适宜水解条件为缓冲液pH值7.0,温度45℃,水油质量比2∶1。脂肪酶TL 100和ADL在该适宜条件下水解金枪鱼油,在30 h的水解度分别为(54.37±3.20)%和(45.94±1.50)%,所得水解甘油酯中EPA和DHA总比例分别为(54.89±0.64)%和(51.01±2.40)%,ADL催化水解能显著降低水解甘油酯中的棕榈酸含量,增加油酸含量。选择性脂肪酶水解金枪鱼油能显著提高ω-3 PUFAs含量,改善脂质的脂肪酸分布,制备脂质改性水解甘油酯,但所得甘油酯氧化稳定性显著降低(P<0.05)。