miR-132在食管癌细胞系KYSE150中对靶基因FOXA1的调控作用

目的构建miR-132真核表达载体和融合靶基因FOXA1表达载体,在食管癌细胞KYSE150中验证miR-132对靶基因FOXA1的调控作用。方法根据miR-132序列在基因组中的位置及其上下游序列,以EC9706细胞基因组DNA为模板,扩增包含miR-132前体序列,克隆到pMD18-T Simple中,经BamHⅠ和EcoRⅠ酶切后亚克隆到质粒pcDNA3.1(+)上;通过Real-time PCR检测转染重组表达载体pcDNA3.1-miR-132的KYSE150成熟miR-132的表达水平。用生物信息学软件对miR-132的靶基因进行预测,将候选靶基因FOXA1的3′UTR区融合到pMIR荧光素酶基因下游,通过双荧光素酶报告基因检测分析miR-132对靶基因FOXA1的调控作用。将pCDNA3.1-miR-132表达质粒转染人食管癌细胞KYSE150,通过Western blot检测miR-132对FOXA1蛋白表达的影响。结果成功构建了miR-132真核表达载体,Real-time PCR验证表明pCDNA3.1-miR-132在KYSE150细胞中能够显著地过表达成熟miR-132。生物信息学预测FOXA1可能是miR-132的靶基因。双荧光素酶报告基因分析表明miR-132能够作用于FOXA1的3′UTR。Western blot进一步证实miR-132能够抑制内源性FOXA1蛋白的表达。结论FOXA1是miR-132直接调控的靶基因。

固本汤联合放射治疗食管癌术后患者疗效观察

目的观察固本汤联合放射治疗对食管癌术后患者疗效的影响。方法选择2002年4月～2006年9月64例食管癌术后患者,随机分为A组(单纯放疗)和B组(固本汤+放疗),观察消化道反应、骨髓抑制、放射性反应和生存期、放疗前后Karnofsky评分,对比两组肿瘤患者的毒副反应和疗效。结果放疗结束按Karnofsky评分,B组明显高于A组,差别显著;B组1、2、3年生存率明显优于A组,差异显著;毒副反应两组对比,消化道反应、骨髓抑制及放射性食管炎(残胃炎)差异有显著性,B组明显低于A组,主要表现为恶心呕吐、白细胞下降,吞咽疼痛及反酸,一般经对症处理均能缓解。结论固本汤联合放射治疗能明显降低毒副反应,提高食管癌术后患者的生存质量,延长生存期。

FOLFOX4方案治疗晚期胃癌疗效观察

目的观察L-OHP联合CF和5-Fu治疗晚期胃癌的临床疗效和毒副反应。方法32例晚期胃癌患者,L-OHP130mg/m2,静脉滴注2h,d1;CF200mg/m2,静脉滴注2h,d1～5;5-Fu500mg/m2,静脉滴注>6h,d1～5;21d为1周期。进行3周期后评价疗效。结果32例患者中CR3例,PR13例,SD9例,PD7例,CR+PR48.4%,毒副反应以骨髓抑制、感觉神经毒性为主,白细胞下降发生率为62.5%,神经毒性发生率为40.6%,无Ⅳ度毒副反应。结论L-OHP、CF、5-Fu联合应用治疗晚期胃癌疗效肯定,毒副反应轻,耐受性好。

LncRNA AFAP1-AS1对食管鳞癌细胞株EC9706转移潜能影响机制探讨

目的食管癌是常见的消化道肿瘤,其细胞侵袭与迁移机制尚不清楚。本研究旨在探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)AFAP1-AS1对食管鳞癌细胞株EC9706侵袭及迁移能力的影响及可能的作用机制。方法构建AFAP1-AS1真核表达载体,用脂质体2000将pcDNA3.1-AFAP1-AS1表达载体及pcDNA3.1空载体转染食管癌细胞EC9706。通过G418筛选,建立稳定表达AFAP1-AS1RNA的EC9706-AFAP1-AS1细胞系。Millicell小室检测2株细胞侵袭及迁移能力的变化,Real-time PCR法检测2株细胞中血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor C,VEGF-C)及Artemin的mRNA表达情况,蛋白质印迹法检测2株细胞中VEGF-C及Artemin蛋白表达的变化。结果成功构建稳定表达AFAP1-AS1的EC9706细胞系,过表达AFAP1-AS1后,EC9706细胞的迁移(数据分布符合正态分布,SW1=0.912,SW2=0.878,均P>0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.002,P<0.001)及侵袭(数据分布符合正态分布,SW1=0.945,SW2=0.972,均P>0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.02,P<0.001)能力均增加,VEGF-C(数据分布符合正态分布,SW1=0.931,SW2=0.922,均P>0.05;两组间均值差异无统计学意义,t=0.14,P>0.05)和Artemin(数据分布符合正态分布,SW1=0.964,SW2=0.981,均P>0.05;两组间均值差异无统计学意义,t=0.29,P>0.05)的mRNA表达差异无统计学意义,但VEGF-C(数据分布符合正态分布,SW1=0.762,SW2=0.82,均P>0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.005,P<0.001)及Artemin(数据分布符合正态分布,SW1=0.892,SW2=0.853,均P>0.05;两组间均值差异有统计学意义,t=0.004,P<0.001)的蛋白表达明显增加。结论 AFAP1-AS1可能通过增加EC9706细胞中VEGF-C及Artemin的蛋白表达来增强其侵袭及迁移能力,在食管癌侵袭及进展中发挥作用。