六神曲发酵过程中5种消化酶的动态分析

该文主要通过对六神曲发酵过程中产生的5种消化酶进行了系统而全面的分析,确定了六神曲的最佳成熟时间。研究发现,发酵过程中产生的5种消化酶存在规律性变化:糖化酶活力在发酵第3d时达到高峰,淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶的活力在发酵4d时达到高峰,之后4种酶活力均有所下降并逐渐趋于平稳;蛋白酶活力在发酵前4d变化不大,之后随发酵时间的延长活力显著增加。最终确定六神曲发酵的成熟时间为4d～6d,为六神曲的工艺及质量控制提供依据。消化酶的活力变化可以作为控制六神曲发酵工艺及质量评价的指标。

小体系高通量比色测定糖化酶活力新方法

本研究建立了一种小体系结合96孔板比色测定糖化酶活力的新方法。经实验证明,在96孔板内,波长540nm处,葡萄糖浓度与光密度（OD）值有很好的线性关系,其线性相关系数r值达到0.9996;通过加样回收实验发现,其回收率为98.5%~103.2%,相对标准差为1.8%;通过精密度分析实验发现该方法测量样品的精密度优于国标法及普通DNS法,其测定的结果与现行国家标准测定糖化酶方法所得到的结果差异率小于0.5%。本研究建立的方法不仅准确、可靠,而且实现了小体系、高通量快速比色测定,为糖化酶工业检测及糖化酶生产菌株的高通量筛选奠定了重要方法基础。

一株酸性淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质研究

用含有淀粉的选择培养基,通过透明圈法筛选到一株产酸性淀粉酶的菌株,其发酵液酶活力达到123U/mL。通过形态观察。生理生化实验和16S rDNA序列分析等方法初步鉴定该菌株为地衣芽孢杆菌,命名为Bacillus lincheniformis BW-2。对其产生的淀粉酶的酶学性质进行分析发现,该菌株产生的淀粉酶最适反应温度为70℃;最适反应pH为4.5,同时具有较好的热稳定性和pH稳定性;Ca2+和Mg2+对该酶有激活作用,Mn2+和Cu2+对该酶有抑制作用,抑制剂PMSF(苯甲基磺酰氟)及DTT(二硫苏糖醇)对该酶活力影响较小。通过PAGE分析发现BW-2产生的淀粉酶与已知热稳定淀粉酶分子量或结构可能存在差异。Bacillus lincheniformis BW-2是一株具有研究开发潜力的产酸性淀粉酶的菌株。