超声波辐射下双螺环化合物的一步合成

以芳香醛、海因为原料,水为溶剂,经Knoevenagel缩合反应制得5-芳亚甲基海因后,再在室温超声波辐射下与靛红和L-脯氨酸发生1,3-二极环加成一锅反应,得到一系列双螺环化合物,收率为78%～94%.对产物结构进行红外、核磁及质谱表征.

治疗阿尔茨海默症的中药有效成分研究进展

阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)是以进行性认知功能障碍和行为损害为特征的中枢神经系统退行性病变,是最常见的老年痴呆病类型.现有治疗阿尔茨海默症的临床常用药物有多奈哌齐、利斯的明、他克林、加兰他敏等,但患者服药后会产生较强的毒副作用.目前已发现多种中药有效成分(如苷类、黄酮类、生物碱类等)对AD有较好的治疗作用且毒副作用小.结合国内外已有的对AD有治疗作用的中药有效成分的相关报道,综述了不同类型中药有效成分对AD的治疗作用,以期为治疗AD的中药类药物开发提供一定的参考.

利奈唑胺合成新进展

利奈唑胺是第一个人工合成的噁唑烷酮类抗生素,主要用于治疗革兰氏阳性球菌引起的感染.利奈唑胺独特的作用部位和作用方式使其不易与其他抗菌药发生交叉耐药,具有良好的治疗效果,在临床上得到广泛应用.综述了近5年利奈唑胺的合成方法,并对各种方法进行了分析比较.

利用CpG DNA甲基化酶M.SssⅠ共表达载体制备限制性内切酶NotⅠ

限制性核酸内切酶是DNA重组的重要分子生物学工具。由于其本身对DNA有切割作用导致其重组表达在技术上十分困难,产率低、提纯程序复杂。而商业化生产所采用的利用专一型甲基化酶保护宿主DNA的限制酶表达技术流程繁琐、实用性有限。为表达NotⅠ限制酶,采用来源于Spiroplasma sp.MQ1的DNA甲基化酶M.SssⅠ特异性甲基化CpG序列,甲基化后的DNA会免受识别位点中包含CpG序列的限制酶NotⅠ的切割。将甲基化酶M.SssⅠ导入大肠杆菌表达宿主ER2566后,M.SssⅠ基因在宿主中持续表达并甲基化宿主DNA成CpG甲基化样式;利用此表达体系制备限制性内切酶NotⅠ获得成功。并借助引入纯化标签经过简便的Ni亲和层析和阴离子交换层析2步层析洗脱纯化,制备了高活力高纯度的重组限制酶NotⅠ。此表达体系可应用于一系列识别位点中包含CpG序列的限制酶的表达。

利用GpC DNA甲基化酶M.CviPI高效表达限制性内切酶Pst Ⅰ

源自原核生物"限制-修饰"系统的限制性内切酶是生命科学研究的重要工具酶.将小球藻Chlorella病毒NYs-1的GpC DNA甲基化酶M.CviPI导入大肠杆菌表达宿主ER2566,高效表达限制酶PstⅠ的基因,再通过简便的Ni亲和、阴离子交换两步层析纯化获得重组限制酶PstⅠ.结果表明,该重组限制酶的蛋白纯度达到90%以上,比活力达到640 000U·mg^(-1),并具有快速酶切性能,能够在15min内完成1μg底物λDNA的消化,达到商业化限制酶PstⅠ的质量标准.

利用短短芽孢杆菌进行酮还原酶CgKR2的高效表达与纯化

酮还原酶CgKR2能够一步还原前手性羰基化合物生成高附加值的手性醇,有望解决手性醇传统制备方法的步骤烦琐和高成本问题,具有很高的经济效益。研究表明,CgKR2催化底物2-氧代-4-苯基丁酸乙酯(OPBE)生成普利类降压药的重要中间体(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯[(R)-HPBE]具有良好效果。但CgKR2的生产成本高昂、过程烦琐。利用短短芽孢杆菌胞外分泌表达酮还原酶CgKR2,获得该酶的高效表达,并经简便的一步镍亲和层析纯化,即获得高纯度酮还原酶CgKR2,产率高达每升发酵7. 8mg纯酶。以酶标板法测定其比活力、温度稳定性以及动力学参数等基本酶学性质,结果显示,CgKR2的比活力为(78. 32±7. 62) U/mg、Km为(0. 2±0. 02) mmol/L、Vmax为(117. 64±3. 6)μmol/(min·mg)、Kcat为73s^-1,与以往报道的数据一致,并且获得的CgKR2纯酶在30℃下孵育72h依然保持80%的活性,酶活的稳定性远好于以往的制备方法。开发出的一套简便高效的酮还原酶CgKR2表达纯化工艺,降低了生产成本、简化了生产工艺,可推进手性醇生物催化制备的普及,对其他生物催化工程酶的制备方法研究也有借鉴作用。