辅助生殖女患者心理症状与压力量表的编制与初步检验

目的立足中国文化背景,编制针对辅助生殖女性患者心理症状与压力的评估工具。方法基于文献研究并访谈65例患者,确定预期的量表结构,编制量表初始条目74个,在104例患者中施测并检验其信效度。结果通过条目初筛、探索性与验证性因子分析得出保留条目52个,分为2个症状因子、6个压力因子;症状总分、压力总分及各因子分与抑郁量表、焦虑量表总分的相关系数0.38~0.85(P<0.01),表明量表效标效度良好;症状与压力分量表Cronbachα系数分别为0.93、0.96;ROC分析显示,症状分量表、压力分量表对临床焦虑/抑郁有较高的筛查价值,曲线下面积分别为0.93、0.92,临界分分别为30、74分。结论所编量表有良好的信度、效度,可以作为辅助生殖女患者心理症状与压力的科学实用的评估工具。

精浆和血清生殖激素与精液质量的关系

目的为了评估精液质量不同的男性精浆和血清生殖激素的浓度与精子浓度及活动力的关系,探索精浆与血清生殖激素的关系。方法对301名男性进行精液检查,按照精液的质量参数将受试对象分成4组:精液正常组(n=176),弱精子症组(n=66),少精子症组(n=40)和非梗阻性无精子症组(n=19)。采用电化学发光免疫法测定各组受试对象血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、泌乳素(PRL)、孕酮(P)、睾酮(T)和雌二醇(E2)六项生殖激素和精浆PRL、T、P和E2四项生殖激素的浓度,比较组间差异并进行相关性分析。结果精液正常组和弱精子症组血清FSH和E2的浓度显著低于少精子症组和非梗阻性无精子症组(P<0.05),精液正常组血清LH和P的浓度显著低于弱精子症、少精子症和非梗阻性无精子症的人群(P<0.05);而精液正常、弱精子症和少精子症三组精浆PRL的浓度则高于非梗阻性无精子症组(P<0.05)。除了非梗阻性无精子症组,受试者血清FSH的浓度与其精子浓度呈负相关(r分别为-0.350、-0.273和-0.448,P<0.05)。精液正常组精浆PRL的浓度和精子的浓度之间呈正相关(r=0.269,P<0.05);在少精子症组中,亦有相同趋势的相关性(r=0.432,P<0.05)。结论精浆PRL及血清FSH的浓度能够反映精子浓度或活动力,在男性不育的病因分析中具有一定的指导价值。

行辅助生殖技术患者流产胎儿人白细胞抗原-G基因14bp插入/缺失多态性分析

目的探讨行辅助生殖技术后流产但染色体数目正常的胎儿人白细胞抗原-G(HLA-G)基因第8外显子14bp插入/缺失多态性情况,以期揭示其与流产发生的相关性。方法应用聚合酶链反应(PCR)及片段分析方法对符合入选条件的47例体外受精(IVF)流产胎儿(IVF流产组)、35例卵胞浆内单精子注射(ICSI)流产胎儿(ICSI流产组)及49例自然妊娠但选择行人工流产的胎儿(染色体数目正常;对照组)的HLA-G基因14bp插入/缺失多态性进行分析。结果 14bp插入/缺失等位基因频率在各组间相近,无统计学差异(P>0.05);各组的HLA-G基因+14/+14、+14/-14和-14/-14基因型频率相似,无统计学差异(P>0.05)。结论结果提示HLA-G基因14bp插入/缺失多态性不是引起通过辅助生殖技术方式妊娠的染色体数目正常胎儿流产发生的原因。

反复妊娠失败患者种植窗期子宫内膜调节性T细胞功能相关因子的表达

目的分析反复妊娠失败患者种植窗期子宫内膜调节性T细胞相关生物标记物的表达情况。方法利用免疫组织化学技术分析反复种植失败(repeated implantation failure,RIF)(n=23)、复发性流产(recurrent miscarriage,RM)(n=33)与对照组(n=15)女性FOXP3、CTLA-4和TGF-β3水平。通过Vectra~自动病理成像定量分析系统计算其阳性细胞率。结果 RIF组、RM组患者子宫内膜CTLA-4阳性细胞率显著高于对照组(P<0.01),而TGF-β3阳性细胞率显著低于对照组(P<0.01)。FOXP3阳性细胞率与CTLA-4阳性细胞率显著正相关(r=0.68,P<0.01)。结论 RIF、RM患者子宫内膜种植窗期TGF-β3、CTLA-4表达异常,表明TGF-β3、CTLA-4可能参与RIF、RM种植窗期子宫内膜免疫耐受调节,影响其子宫内膜容受性。

G6PD缺乏症单细胞SNaPshot基因诊断方法的建立

目的建立有效可行的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)缺乏症单细胞基因诊断技术。方法获取正常人及G6PD基因突变杂合子的单个淋巴细胞,采用多重巢式PCR结合多重SNaPshot技术对G6PD基因突变高发的四个外显子上的12个突变位点进行基因诊断。结果共检测了58个正常和108个杂合子单淋巴细胞,扩增效率为90.97%,等位基因脱扣率为8.08%。结论所建立的多重巢式PCR结合SNaPshot技术可在单细胞水平上快速、准确地检测12个G6PD基因突变位点,可望在临床上实现G6PD缺乏症的植入前遗传学诊断。

ICSI中不同来源精子对临床结局的影响

目的:分析不同来源精子在卵细胞胞质内单精子注射(ICSI)后的临床结局。方法:将682个ICSI治疗周期分为:射出精子组(598例)、经皮附睾精子抽吸术(PESA)得到精子组(58例)、睾丸精子获取术(TSE)得到精子组(26例),比较三组的受精率、临床妊娠率、种植率、流产率、异位妊娠率以及分娩率之间的差别。结果:TSE组受精率明显低于射出精子组和PESA组(81.06%vs87.95%,87.82%,P<0.05);射出精子组、PESA组和TSE组的妊娠率(39.46%,48.28%,34.62%)、种植率(19.80%,23.80%,18.34%)、流产率(13.13%,17.86%,11.11%)、异位妊娠率(5.51%,7.14%,11.11%)、分娩率(32.11%,36.21%,26.92%),均没有显著差异(P>0.05)。结论:虽然TSE来源精子对ICSI受精率有所影响,但射出精子和手术(TSE和PESA)来源精子对妊娠结局没有影响。

不明原因复发性流产与HLA-DQ相关性的初步研究

目的:探讨夫妇双方人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)-DQ等位基因多态性与不明原因复发性流产之间的关系。方法:对25例不明原因复发性流产夫妇和16例正常妊娠的夫妇,采用序列特异性引物PCR和基因测序分型的方法分别检测夫妇双方HLA-DQA1和HLA-DQB1基因型,并对双方HLA-DQ的基因频率和相容性进行统计学分析。结果:女方不明原因复发性流产患者中HLA-DQA1和HLA-DQB1等位基因频率与对照组相比无统计学差异(P>0.05);在男方患者中,HLA-DQB1*03:01频率显著升高(χ2=4.02,OR=3.29,P=0.045),HLA-DQB1*05:02频率显著降低(χ2=6.38,OR=0.15,P=0.025)。两组夫妇间HLA-DQ位点的匹配个数之间无统计学差异(P>0.05)。结论:男方HLA-DQB1基因位点在不明原因复发性流产发生中起重要作用,HLA-DQB1*03∶01可能是易感基因,而HLA-DQB1*05:02可能是保护性基因。

3种精子计数池在计算机辅助精液分析系统中的质量评价

目的:应用计算机辅助精液分析(CASA)系统对3种常用精子计数池进行比较,评价其在精子密度及活力分析方面的差异。方法:用浓度为(20±5)×106/ml乳胶珠溶液模拟精液样本,以Makler计数池、Leja计数池、Microcell计数池3种精子计数池作为精液分析工具,每组测定30次,以CASA系统对其密度进行分析并统计均值(x±s)和变异系数(CV);同时收集54例门诊患者精液标本用3种精子计数池分别进行活力分析,计算各组计数池前向运动精子百分率及活动精子百分率。结果:Makler计数池、Leja计数池、Microcell计数池等3种精子计数池的密度均值和变异系数分别为(25.90±3.97)、(18.74±1.62)、(20.35±2.55)×106/ml和15.31%、8.64%、12.54%。3种精子计数池密度均值间均存在明显的差异(P<0.05);Makler计数池、Leja计数池、Microcell计数池3种精子计数池的前向运动精子百分率和活动精子百分率分别为(46.54±17.09)%、(30.65±14.88)%、(30.49±13.21)%和(59.75±16.12)%、(46.76±14.11)%、(43.11±14.02)%。Makler计数池的分析结果均明显高于Leja计数池、Microcell计数池(P<0.05),而Leja计数池与Microcell计数池比较则无明显差异(P>0.05)。结论:不同类型的精子计数池得到的密度结果会存在明显的差异,在进行精子活力分析时,Makler计数池获得的结果会较Leja计数池与Microcell计数池的结果偏高。

精浆中锌、果糖和肉碱含量与精液参数的关系

精子在睾丸中生成，经过附睾的成熟和储存，在射精时与精囊腺、前列腺和附睾的分泌物一起排出。因此，附睾及附属性腺的分泌功能可以影响精子的质量，对精子的生育力起到重要的作用。精浆中的锌、果糖和肉碱的含量分别作为前列腺、精囊腺和附睾的功能标志，对男性不育症的诊断和治疗有一定的参考价值。本实验对512例男性不育患者的精液常规和精浆生化结果进行回顾性分析，探讨精浆生化指标与精子浓度、活力、形态等精液参数的关系，为男性不育的诊断和治疗提供一些依据。

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症基因诊断方法的建立

目的建立有效可行的高通量葡萄糖．6一磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphatedehydrogenase，G6PD）基因诊断新技术。方法建立单管三重PCR扩增G6PD基因外显子2—13目的片段，构建双管25重SNaPshot反应体系检测25个已报道的中国人群的G6PD基因突变位点。用20份已知基因型的样品进行重复性试验。对60例未知样品同时用多重SNaPshot基因分型技术和DNA测序法进行双盲试验。结果建立的多重SNaPshot技术可同时检测25个G6PD基因突变位点，且可区分正常、女性杂合子与男性半合子／女性纯合子，有效检出复合突变。批内及批间的重复性均达到100％。60例未知样本检出23例突变，SNaPshot基因分型结果与测序结果完全一致，特异性和准确性均为100％。结论建立的单管三重PCR结合双管25重SNaP—shot技术是一种有效可行的G6PD缺乏症基因诊断的新方法。

不明原因不孕患者血清中抗核抗体、抗心磷脂抗体和抗β_2糖蛋白I抗体的检测价值

目的 探讨抗核抗体（ANA）谱、抗心磷脂抗体（aCL）和抗β2糖蛋白I抗体（aβ_2-GPI）是否可作为不明原因不孕（UI）患者行体外IVF-ET前病因筛查的检测指标。方法 收集2015年1月～4月在本院生殖医学中心接受IVF-ET标准方案的UI患者（UI组,108例）和正常已孕妇女（对照组,24例）为研究对象,收集血清,采用多重微珠免疫法检测ANA谱,酶联免疫吸附法检测aCL和aβ_2-GPI抗体。结果 UI组ANA总阳性率为14.8%（16/108）,而对照组无一例阳性,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;UI组aCL总阳性率为38.0%（41/108）,显著高于对照组[8.3%（2/24）],差异有统计学意义（P〈0.05）;UI组aβ2-GPI总阳性率为9.3%（10/108）,高于对照组[8.3%（2/24）],但差异无统计学意义（P〉0.05）。结论ANA和aCL阳性可能是引起不明原因不孕的重要因素,检测两者水平将有助于分析其病因并给予恰当的治疗。

淋巴细胞免疫治疗对不明原因复发性流产患者外周血T细胞的影响

目的探讨淋巴细胞免疫治疗(LIT)对不明原因复发性流产(uRM)患者外周血T淋巴细胞比例和功能的影响。方法对94例uRM患者进行3次LIT治疗,治疗前后均在其黄体中期采集外周血,并采用流式细胞术检测其外周血T淋巴细胞亚群比例和Th1/Th2型细胞因子。结果 94例患者中26例失访,7例生化妊娠,2例异位妊娠,48例成功分娩,11例再次自然流产。所有患者3次LIT治疗后与治疗前比较,外周血CD3+T淋巴细胞占淋巴细胞的比例、CD3+CD4+CD8-T细胞和CD3+CD4-CD8+T细胞分别占CD3+T细胞的比例,以及产生γ干扰素(IFN-γ)的Th1细胞占Th细胞比例均无显著性差异(P>0.05);而产生肿瘤坏死因子α(TNF-α)的Th1细胞占Th细胞的比例、IFN-γ/白细胞介素-10(IL-10)比值和TNF-α/IL-10比值在治疗后均显著性降低(P<0.05)。进一步研究显示,LIT治疗前后成功妊娠患者和再次流产患者的T细胞亚群均无显著性变化(P>0.05);Th1/Th2比值在成功妊娠患者中显著下降(P<0.001),而再次流产患者中并无显著性变化(P>0.05)。结论 LIT改变uRM患者外周血T细胞的功能,降低Th1/Th2比值,使患者趋于以Th2为主的免疫状态而有利于成功妊娠。

低等级胚胎继续培养的价值与其临床结局

目的观察体外受精-胚胎移植治疗周期中形态学低等级胚胎培养形成囊胚情况及其临床结局。方法采用序贯培养法培养D3移植和冷冻后废弃的形态学低等级胚胎,观察不同年龄组(年龄≤30岁组、>30且≤35岁组和>35岁组)囊胚形成情况,并利用低等级胚胎囊胚形成情况对体外受精妊娠结局进行预测;将形成的囊胚利用玻璃化法冷冻保存,观察囊胚解冻后的临床结局,并与直接冷冻低等级胚胎的解冻效果比较。结果共收集745例治疗周期的3249个低等级胚胎继续培养,有312例(41.88%)周期形成444个(13.67%)囊胚,其中>35岁组的周期培养成功率和囊胚形成率最低(P<0.05);低等级胚胎中有囊胚形成者的临床妊娠率高于无囊胚形成者(P<0.05);有130例囊胚解冻周期,共解冻196个囊胚,有184个(93.90%)囊胚复苏存活,共进行了120例移植周期,有43例(35.83%)临床妊娠;比较胚胎复苏存活率、移植周期取消率以及临床妊娠率,继续培养形成囊胚解冻组均明显优于低等级胚胎直接冷冻组(P<0.05)。结论 D3低等级胚胎具有不同程度的发育潜能,通过继续培养冷冻囊胚可以提高患者的累积妊娠率。

不育男性血清和精浆抑制素B水平与生精功能的关系

目的探讨血清和精浆抑制素B(INH-B)与睾丸生精功能的关系。方法回顾性分析2015年1~6月来深圳中山泌尿外科医院生殖医学中心就诊的141例男性不育症患者资料。根据精液参数分为5组:精子浓度正常组(A组,43例)、轻中度少精子症组(B组,40例)、重度少精子症组(C组,27例)、梗阻性无精子症组(OA组,9例)和非梗阻性无精子症组(NOA组,22例);NOA组中有17例患者接受睾丸细针精子抽吸术(TESA)取精,根据TESA结果分为成功组(13例)和失败组(4例)。比较各组的精液参数(精子总数、浓度及活动力),测定其血清和精浆INH-B水平及血清FSH、LH、T、E_2、泌乳素(PRL)、孕酮(P)的水平,分析血清性激素、INH-B与精液质量之间的关系。结果 A、B组的睾丸总体积显著高于OA和NOA组(P<0.05)。C组和NOA组的血清INH-B显著低于A组和OA组,A组的精浆INH-B浓度显著高于C组、OA组和NOA组(P均<0.05)。不同生精功能男性的血清INH-B与血清FSH、LH及PRL呈负相关,与血清T和精浆INH-B呈正相关(P均<0.05);精浆INH-B与血清FSH和LH呈负相关(P<0.05)。A、B、C组中血清和精浆INH-B与总精子数呈低度正相关(P<0.01)。NOA组中血清INH-B与睾丸总体积呈高度正相关,与血清FSH和LH呈负相关(P均<0.01);精浆INH-B与血清FSH呈极弱负相关(P<0.05)。TESA取精成功组的睾丸总体积和血清INH-B显著高于TESA失败组,血清FSH和LH则显著低于TESA失败组(P均<0.01)。结论血清和精浆INH-B与血清性激素、总精子数具有一定相关性,可作为评估男性生精功能的参考。无精子症中尤其是NOA患者,血清INH-B可以评估睾丸生精状态、鉴别诊断无精子症、预测取精结局。

染色体平衡易位患者精子染色体荧光原位杂交分析

目的:探讨外周血染色体平衡易位患者在精子发生过程中染色体分离模式,了解各分离模式产生精子所占比例,预测染色体平衡易位携带者在胚胎移植前遗传学诊断(PGD)中得到正常表型胚胎的概率,评估其进行PGD的风险。方法:应用三色荧光原位杂交(FISH)对4例染色体平衡易位患者46,XY,t(9;11)(q22;q21)、46,XY,t(11;22)(q23;q11)、45,XY,t(13q;15q)、45,XY,t(13q;14q)进行精子相关染色体分析,计算出各染色体分离模式产生精子所占比例,同时以染色体正常男性的正常精液作为对照。结果:上述4例异常精子所占比例分别为50.86%、58.33%、13.00%和22.82%,均明显高于对照组(0.85%、1.63%、1.60%和1.37%)。结论:通过FISH检测染色体平衡易位患者精子染色体,有助于预测染色体平衡易位携带者在PGD过程中的风险,从而选择应用PGD。

外周血单个核细胞宫腔内灌注治疗对反复种植失败患者妊娠结局的影响

目的探讨自体外周血单个核细胞(PBMCs)宫腔内灌注治疗对反复种植失败(RIF)患者胚胎种植率和临床妊娠率的影响。方法按随机数字表法将纳入的39例拟行冷冻胚胎移植的RIF患者随机分为治疗组(20例)和对照组(19例),治疗组在移植前3 d抽取外周血20 ml,应用淋巴细胞分离液分离PBMC后行宫腔灌注。对照组移植前未行自体PBMC宫腔灌注。结果两组患者年龄、血清卵泡刺激激素(FSH)、取卵周期数、移植周期数、移植胚胎数和单周期移植优质胚胎数均无统计学差异(P>0.05)。两组胚胎种植率(22.8%vs.6.4%)和临床妊娠率(50.0%vs.17.6%)比较,治疗组均显著高于对照组(P<0.05)。两组单周期活婴出生率(45.0%vs.17.6%)比较无统计学差异(P>0.05)。结论自体PBMC宫腔内灌注治疗可以提高RIF患者胚胎种植率和临床妊娠率,故可作为RIF患者胚胎移植前提供可选择的处理方案。

HLA-DQ等位基因多态性与反复种植失败的关系

目的探讨反复种植失败与夫妇双方HLA-DQ等位基因多态性之间的关系。方法选取44例反复种植失败(RIF组)的患者和16例(对照组)同期接受体外受精-胚胎移植且在第1周期成功妊娠的患者,采用序列特异性引物PCR和基因测序分型的方法分别检测夫妇双方HLA-DQA1和HLA-DQB1的基因位点,采用χ2检验和Fisher’s精确检验比较2组等位基因频率和相容性的差异。结果等位基因HLA-DQB1*03:01、HLA-DQB1*03:02、HLA-DQB1*03:03在RIF组中的出现频率高于对照组,但差异均无统计学意义(P>0.05);将以上3个位点合并为HLA-DQB1*03后,在女方RIF组中出现频率显著高于对照组(52.28%vs31.26%,P<0.05);而HLA-DQB1*05:02等位基因频率在RIF组中低于对照组(女:9.09%vs 12.50%,男:6.82%vs 21.88%),且在男方中差异有统计学意义(P<0.05)。HLA-DQA1等位基因位点频率分布在RIF组和对照组之间无统计学意义(P>0.05);HLA-DQ单元型、夫妇双方HLA-DQ的相容性与对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 HLA-DQ等位基因的多态性在反复种植失败中可能扮演重要的作用,HLA-DQB1*03可能是一个导致种植失败的易感基因,而HLA-DQB1*05:02可能是一个保护性基因。

性激素负反馈作用在男性不育诊疗中的应用

下丘脑-垂体-睾丸轴对男性的生殖功能起着关键性作用,下丘脑和垂体共同参与调控睾丸的甾体激素合成与精子发生;复杂的刺激和反馈机制通过神经腺成分来控制激素的合成和分泌。下丘脑和垂体均有大量雄、雌激素的受体,同时受睾酮及其芳香化产物(包括雌激素)的负反馈调节。利用男性生殖内分泌轴系中的负反馈作用,通过给予抗雌激素药物或芳香化酶抑制剂,可减弱睾酮及其芳香化产物的持续负反馈调节作用,增加内源性促性腺激素的分泌,而且还能去除雌激素对生精的副作用,恢复生精或提高精液质量。

精子DNA碎片指数与IVF/ICSI结局的相关性

目的分析精子DNA碎片指数(DFI)与IVF/ICSI治疗结局的相关性,探讨精子DNA损伤对IVF与ICSI治疗结局的影响。方法回顾性分析2017年1~12月在本院生殖中心行常规IVF治疗的134个鲜胚移植周期和行ICSI治疗的177个鲜胚移植周期。在行IVF或ICSI治疗前,男方同时行精液常规检查和DFI检测;根据DFI参考值将患者分为DFI≤30%组和DFI>30%组,比较两组间的基础数据、精液常规参数、IVF或ICSI治疗后的胚胎发育与临床结局。结果在IVF周期与ICSI周期,DFI>30%组的男方年龄、前向运动精子百分率和活动精子百分率均显著低于DFI≤30%组(P<0.05),DFI与这3项参数呈负相关(P<0.05)。在ICSI周期中,DFI>30%组的精子浓度、非前向运动精子百分率和正常形态精子百分率也显著低于DFI≤30%组(P<0.05),DFI与这3项参数均呈负相关(P<0.05)。在IVF周期,DFI>30%组的受精率与卵裂率均显著低于DFI≤30%组(P<0.05),DFI与这两项参数均呈负相关(P<0.05);在ICSI周期,DFI>30%组的优胚率显著低于DFI≤30%组(P<0.05),但DFI与优胚率无相关性(P>0.05)。IVF治疗或ICSI治疗后,不同DFI水平的临床妊娠率无显著差异(P>0.05);DFI>30%组的流产率虽然高于DFI≤30%组,但无显著差异(P>0.05)。结论DFI与前向运动精子百分率呈显著负相关,提示精子DNA损伤可能影响精子前向运动功能;精子DNA损伤可能影响IVF与ICSI治疗的早期胚胎发育,但对IVF与ICSI治疗的临床妊娠结局的预测作用有限。

反复种植失败患者周围血树突状细胞数量和功能分析

目的:了解反复种植失败(Repeated implantation failure,RIF)患者周围血树突状细胞(Dendritic cells,DC)数量和功能的变化。方法:采集30例RIF患者及15例正常对照组的黄体中期周围血,采用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)对其DC细胞功能分子及亚群进行检测。结果:与正常对照组相比,RIF患者的lin-HLA-DR+DC细胞占白细胞的比例无显著性变化(P>0.05),DC细胞表面的共刺激分子(CD80和CD86)以及免疫耐受分子CD200也无显著性变化(P>0.05)。然而,RIF患者中CD11c+CD123-m DC细胞比例显著升高(P<0.05),而CD11c-CD123+p DC细胞比例无显著性变化(P>0.05)。结论:RIF患者的周围血m DC细胞比例显著升高,其可能是影响RIF患者妊娠结局的因素之一。