基础医学本科创新实验课程的实践与体会

深圳大学医学院连续5年在临床医学专业学生中开设《基础医学创新实验》的实践课程。该课程组织医学本科生进行独立的科研活动,通过学生自己设计实验、组织实施实验、开题报告、进展报告、结题答辩、撰写论文,既培养了学生的创新思维和团队协作能力,又提高了学生发现问题、解决问题和分析问题的综合素质。

“聚徒教学”与基础医学创新实验课程的融合与实践

为培养医学本科生的科研思维和创新能力,深圳大学医学部构建了系统的创新人才培养体系,包括开设基础医学创新课程、建立科研导师培养制度、设立本科生科研项目、组织科研竞赛活动等。文章探索利用“聚徒教学”将本科生科研活动有效组织和整合起来,取得了良好的教学效果。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂联合紫杉醇抑制宫颈癌细胞增殖的体外实验

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA联合紫杉醇对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制效果及其机制。方法:设置空白对照组、紫杉醇(10 nmol/L)、SAHA(10μmol/L)、紫杉醇(10 nmol/L)+SAHA(10μmol/L)联合组,采用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测各组HeLa细胞的生长抑制率,计算紫杉醇对HeLa细胞的IC 50。RT-PCR法检测各组HeLa细胞中抑癌基因p27 m RNA的相对表达,Western blot检测HeLa细胞乙酰化组蛋白H4(Ac-H4)的表达。结果:紫杉醇、SAHA、紫杉醇+SAHA联合组处理HeLa细胞24 h的相对抑制率分别为25.93%±5.32%、46.38%±3.66%、54.27%±4.02%,联合组抑制率与紫杉醇组相比明显升高,差异具有统计学意义(P<0.01);48 h的抑制率分别为29.12%±3.09%、65.26%±3.03%、77.02%±3.86%,联合组抑制率最强,显著高于SAHA组和紫杉醇组(P<0.01)。经SAHA预处理后紫杉醇对HeLa细胞的IC 50较单独紫杉醇组均显著下降(P<0.05或P<0.01)。紫杉醇组、SAHA组、紫杉醇+SAHA联合组细胞中p27 m RNA的相对表达量分别为5.845±0.548、0.978±0.117和10.601±0.673,乙酰化组蛋白H4(Ac-H4)的相对表达分别为0.878±0.068、1.148±0.018、1.282±0.033,联合组中表达量均显著高于SAHA组和紫杉醇组(P均<0.01)。结论:SAHA联合紫杉醇在体外能显著抑制宫颈癌细胞HeLa的增殖,增强组蛋白乙酰化水平,诱导抑癌基因的表达。

组蛋白去乙酰化酶抑制剂SAHA与紫杉醇联用诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡的实验

目的探讨组蛋白乙酰化抑制剂SAHA联合紫杉醇体外对宫颈癌HeLa细胞增殖抑制效果及其机制。方法分别设置空白对照组SAHA(10μmol/L)组、紫杉醇(10 nmol/L)组、SAHA(10μmol/L)+紫杉醇(10 nmol/L)联合组,采用MTT法检测各组HeLa细胞的抑制率,采用流式细胞术检测HeLa细胞凋亡情况和细胞周期。结果 MTT结果显示经SAHA组、紫杉醇组和联合组分别处理24、48 h后,与SAHA和紫杉醇组比较,联合组能够显著抑制HeLa细胞的增殖,差异有统计学意义,且二者具有叠加作用(Q=0.861,Q=1.25);HeLa细胞的凋亡实验结果显示联合组的凋亡率分别高于紫杉醇组、SAHA组;HeLa细胞周期实验发现:联合组处理后的HeLa细胞主要处于G0/G1期,提示SAHA与紫杉醇联合使用能够抑制HeLa细胞有丝分裂过程中的DNA合成和复制。结论 SAHA与紫衫醇联用能够抑制宫颈癌HeLa细胞增殖,增强诱导HeLa细胞凋亡的能力,阻滞细胞周期,最终增强抗肿瘤的能力。

硒化镉/硫化锌量子点对HepG2细胞增殖和凋亡相关蛋白的影响

目的:以人肝癌HepG2细胞为对象,研究硒化镉,硫化锌(cdSe/ZnS)量子点对肝癌细胞的毒性及其机制。方法:用透射电子显微镜观察CdSe/ZnS量子点的微观结构,用荧光分光光度计测量CdSe/ZnS量子点的吸收和发射光谱。将HepG2细胞分为3组,2个实验组分别与0.5、5 nmol/L CdSe/ZnS量子点共孵育,对照组不作处理。采用激光共聚焦显微镜观察共孵育4 h后细胞对量子点的摄取情况和量子点在细胞中的定位,用流式细胞术检测细胞对量子点的摄取率;用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测共孵育24和48 h后CdSe/ZnS量子点对HepG2细胞增殖的影响;用Western blot法检测共孵育4 h后CdSe/ZnS量子点对HepG2细胞凋亡相关蛋白Caspase-9和Caspase-3的影响。结果:CdSe/ZnS量子点粒径小且分散性好,吸收光谱宽发射光谱窄而对称。0.5和5 nmol/L的CdSe/ZnS量子点处理4 h后均可被HepG2细胞摄取并定位于胞浆内,且摄取率达到99%以上。0.5、5 nmol/L CdSe/ZnS量子点处理24 h后,细胞相对存活率分别为99.2%±5.1%、99.5%±7.0%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);0.5、5 nmol/LCdSe/ZnS量子点处理48 h后,细胞相对存活率分别为91.6%±3.2%和75.1%±4.6%,显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)。Western blot结果显示,与对照组相比,实验组HepG2细胞凋亡相关蛋白Caspase-9和Caspase-3表达量均增加。结论:CdSe/ZnS量子点可被HepG2细胞摄取并抑制HepG2细胞的增殖,此抑制作用可能与其诱导细胞凋亡相关蛋白表达有关。

伏立诺他与紫杉醇增强ROS水平介导Hela细胞凋亡机制研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂-伏立诺他(SAHA)联合紫杉醇促进宫颈癌Hela细胞凋亡的机制。方法:采用流式细胞术检测SAHA、紫杉醇及SAHA联合紫杉醇对Hela细胞活性氧(ROS)含量和细胞凋亡率的影响,Western blot法检测Hela细胞中凋亡相关蛋白caspase-3和caspase-9表达,免疫荧光法观察不同药物处理后Hela细胞微管结构的变化。结果:SAHA+紫杉醇组Hela细胞中ROS水平高于SAHA组和紫杉醇组,SAHA+紫杉醇组与紫杉醇组有明显统计学差异(P<0.05)。SAHA+紫杉醇组Hela细胞的凋亡率明显高于对照组、紫杉醇组、SAHA组(P<0.01,P<0.05,P<0.01)。SAHA+紫杉醇组的caspase-3和caspase-9蛋白表达高于紫杉醇组和SAHA组(P<0.05)。SAHA和紫杉醇联合作用改变Hela细胞的微管结构,使微管短小纤细,向细胞核靠拢。结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACi)-伏立诺他(SAHA)与紫杉醇联合作用可显著促进细胞凋亡,其机制可能是通过影响Hela细胞氧化应激机制,促进Hela细胞凋亡。

多功能非病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用

基因治疗是一种新兴的治疗方式,也是攻克肿瘤最具挑战的研究领域。然而,基因治疗的实现仍然面临着缺乏安全有效转运载体的问题。常用的载体主要包括病毒载体和非病毒载体。病毒载体的转染效率高,但近年来因存在安全性问题,其临床使用受到了制约。非病毒载体具有免疫原性低、安全性高、易于制备且基因容量大等优势,目前越来越受到研究学者的关注。尤其近年来发展了一系列多功能非病毒载体,将多种功能整合于同一个非病毒载体中,使之能同时实现靶向、成像、示踪、光热疗、载药或可控释药等,从而达到了更加有效的治疗肿瘤的目的。现就近年来国内外对于影像导向、光热驱动、联合药物3种多功能病毒载体在肿瘤基因治疗中的应用作一综述,阐述其优点及临床应用前景,了解其发展方向。