pIRES2-EGFP-BCL11B真核表达载体体外表达的动态分析

目的:研究真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(B细胞白血病/淋巴瘤11B基因)在K293(人胚肾细胞株)和Raji(人Burkitt淋巴瘤细胞株)细胞中的表达情况。方法:分别利用脂质体和核转染技术将真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B(pBCL11B)转染至K293和Raji细胞中,并设立空质粒组(pI2)和空转染组(MOCK)作为对照。通过荧光显微镜和流式细胞仪检测转染后48 h各组EGFP的表达,确定转染效率。通过荧光实时定量PCR(Taqman)技术检测转染后24 h各组BCL11B mRNA的表达情况,通过Western blotting技术检测转染后48 h各组BCL11B蛋白的表达情况。高分辨率活细胞成像系统动态观察转染后36-72 h重组质粒在Raji细胞增殖过程中的表达。结果:K293细胞pBCL11B、pI2和MOCK组的转染效率分别为(71.23±4.62)%、(70.45±3.58)%和(0.30±0.10)%,而Raji细胞各组的转染效率分别为(23.12±5.94)%、(22.48±6.25)%和(0.30±0.10)%。实时定量PCR和Western blotting结果显示转染后pBCL11B组在mRNA和蛋白水平均能检测到BCL11B基因的有效表达,BCL11B的表达量均明显高于pI2组和MOCK组(P<0.05)。活细胞追踪显示转染后36-72 h重组质粒在细胞中可稳定表达且转染后的细胞可以正常分裂增殖。结论:系统分析了真核表达载体pIRES2-EGFP-BCL11B转染至K293和Raji细胞的表达变化特点,转染后可以检测到该基因的有效上调,研究结果为下一步转染正常人T细胞奠定了基础。

类风湿性关节炎患者IL-33水平变化与疾病严重程度的关系

目的检测类风湿性关节炎（RA）患者血清IL-33的表达，分析其与类风湿因子（RHF）和C反应蛋白（CRP）的相关性．探讨IL-33的表达水平与疾病严重程度的关系。方法采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测24例活动期RA病人血清IL-33的表达水平，以25例正常人作为对照；检测RA患者风湿四项的实验室指标；分析RA患者IL-33与RHF和CRP的相关性：结果RA患者血清IL-33的表达明显高于正常对照（P〈0．01）；风湿四项的指标申100％（24人）患者的RHF值、79．17％患者（19人）的CRP和75％患者（18人）的ESR（红细胞沉降率）高于正常；患者IL-33的表达与RHF和CRP成正相关关系。结论IL-33在RA患者的发病过程中发挥重要作用，与疾病严重程度相关，可为RA病情的判断提供新的检测指标。