骨髓间充质干细胞移植在哮喘小鼠肺组织中的作用

目的:探讨外源性骨髓间充质干细胞(MSCs)移植后在哮喘小鼠肺组织中的分布及对气道炎症的影响,为以MSCs为基础的哮喘疾病的防治提供实验依据。方法:取30只雌性BALB/c小鼠随机分成空白对照组、哮喘组和MSCs处理组。在无菌条件下取绿色荧光蛋白(GFP)转基因小鼠骨髓MSCs,体外扩增并鉴定。哮喘组和MSCs处理组应用卵白蛋白(OVA)腹腔注射(第0、7、14天)和雾化吸入(第15～21天)制备慢性哮喘模型。第14天通过尾静脉注射将表达GFP的MSCs移植入MSCs处理组小鼠。于末次激发哮喘后24 h,取3组动物支气管肺泡灌洗液(BALF)和外周血,计数细胞总数和嗜酸粒细胞数,取肺组织行病理切片,HE染色观察肺部气道炎症情况,并通过荧光显微镜观察MSCs在哮喘小鼠肺组织中的分布,Image-pro plus图像分析软件测量支气管壁厚度和平滑肌厚度。结果:GFP转基因小鼠骨髓中分离的MSCs表达MSC特异性标志物并表达GFP。MSCs处理组和哮喘组小鼠BALF中细胞总数以及外周血和BALF嗜酸粒细胞百分比均高于空白对照组,但MSCs处理组上述指标明显低于哮喘组,差异有统计学意义(P<0.05)。与哮喘组比较,MSCs处理组小鼠肺组织病理学变化改善,支气管壁厚度和平滑肌厚度均显著降低(P<0.05)。结论:外源性MSCs体内移植能集中分布于哮喘小鼠肺组织并通过减少哮喘气道嗜酸粒细胞侵润等方式抑制哮喘小鼠的气道炎症。

干细胞:许旺细胞的新来源

背景:许旺细胞对神经系统损伤的修复与再生有着重要作用。然而,许旺细胞不易直接获取,使其在临床上的应用受到限制。目的:综述神经损伤及修复过程、许旺细胞的作用以及各种干细胞分化为许旺细胞的潜能。方法:使用计算机检索Pubmed数据库2000/2011有关许旺细胞参与神经损伤的修复、干细胞分化为许旺细胞验证及应用的文献,检索词为"Schwann cells,nervous system,stem cells"。排除重复性研究,对资料进行初审,并查看每篇文献及其引文。根据纳入标准,收集到29篇相关文献。结果与结论:许旺细胞通过分泌各种细胞因子和营养因子为受损的神经营造了适于修复与再生的微环境,从而促进轴突再生;同时通过增殖及分化等机制围绕新生轴突形成髓鞘。神经修复需要大量许旺细胞的参与,而许旺细胞不易直接获取。研究表明,各种干细胞,包括胚胎干细胞、间充质干细胞、神经嵴干细胞和嗅鞘细胞,能在一定诱导条件下分化为许旺细胞样细胞,为神经系统损伤的治疗带来了新的希望。其中,间充质干细胞的研究备受关注。

2036灵芝孢子(全破壁)胶囊长期毒性试验报告

目的观察连续给予2036灵芝孢子(全破壁)胶囊对大鼠产生的毒性反应及严重程度。方法根据成人用量和本品最大灌胃浓度,将大鼠设定为高、中、低3个剂量给药组(分别为5.40g/kg、2.70g/kg、1.35g/kg)和1个阴性对照组。大鼠连续口服26周,停药后再观察4周,进行一般症状观察,血象、生化、脏器解剖、脏器系数和组织病理学检查。结果所有剂量动物组活动自如,外观、摄食和粪便等均未见异常,体质量增加与对照组比较无明显差异;血液生化指标与对照组比较均无显著差异;心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、胸腺、睾丸、卵巢的脏器系数与对照组比较均无显著性差异;尸检动物主要脏器未见明显病理变化。结论 2036灵芝孢子(全破壁)胶囊长期毒性试验未见异常反应,无毒剂量为5.40g/kg(相当于临床拟定人用剂量的60倍),临床上应用本品是安全可靠的,可以长时间较大剂量服用。

2036灵芝孢子油软胶囊长期毒性实验研究

目的:观察2036灵芝孢子油软胶囊对大鼠产生的长期毒性反应及严重程度。方法:根据成人用量和本品最大灌胃浓度,将大鼠分为3个剂量(0.5、0.9、1.8 g/kg)给药组和1个阴性对照组。连续口服26周,停药4周,进行一般情况观察,血常规、血清生化指标、脏器系数检查。结果:给药组活动自如,外观、摄食和粪便等均未见异常,体质量增加;血清生化指标,心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、脑、胸腺、睾丸、卵巢的脏器系数与对照组比无统计学意义;尸检主要脏器未见明显病理变化。结论:2036灵芝孢子油软胶囊长期毒性实验未见异常反应,临床上用本品是安全可靠的,可长时间较大剂量服用。

人骨髓间充质干细胞诱导分化为汗腺细胞的实验研究

目的:研究人骨髓间充质干细胞(hMSCs)在体外诱导分化为人汗腺细胞(hSGCs)。方法:体外分别分离培养hMSCs和hSGCs,原代培养hSGCs融合后,收集细胞,制备汗腺细胞匀浆,用含10%汗腺细胞匀浆的汗腺培养基来诱导培养hMSCs。1周后,检测诱导培养的hMSCs的抗原表达。结果:培养的hSGCs表达CK19和CEA;hMSCs表达CD44、105,不表达CK19、CD34和CEA。诱导培养1周,免疫细胞化学染色示诱导培养组少量细胞表达CEA和CK19,而对照组未见CEA和CK19阳性细胞;流式细胞仪检测CEA在诱导培养组的阳性表达率约为(6.2±1.2)%,对照组(0.9%±0.0)%(P<0.05)。结论:在无完整汗腺细胞存在的情况下,hMSCs在体外也可诱导分化为hSGCs。

衰老对缺氧刺激下心脏干细胞生物学功能的影响

目的 探讨衰老对缺氧损伤刺激下心脏干细胞（CSC）生物学功能的影响.方法 原代分离小鼠干细胞抗原1 （Sca1）＋ CSC,培养6代后采用衰老β半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色鉴定细胞衰老情况.比较正常培养和缺氧培养第1代和第6代Sca1＋ CSC增殖速度,血管内皮生长因子（VEGF）、血小板衍生生长因子（PDGF）-A、PDGF-B mRNA水平,及VEGF和PDGF-BB分泌水平.将12只青年小鼠和12只老年小鼠各均分为心肌缺血组和假手术组,心肌缺血组采用冠状动脉前降支结扎法建立心肌缺血模型,术后3d取心脏分离细胞,采用流式细胞仪检测Sca1＋ CSC水平.结果 第6代Sca1＋ CSC与第1代Sca1＋ CSC比较体积明显增大,SA-β-Gal蓝染,第1代Sca1＋ CSC未见SA-3-Gal蓝染细胞.第6代Sca1＋ CSC增殖率明显低于第1代Sca1＋ CSC[（18±5）％比（103±27）％]（P＜0.01）.缺氧培养后,第1代Sca1＋ CSC增殖率[（58±11）％]明显降低（P＜0.05）,第6代Sca1＋ CSC增殖率[（26±8）％]无明显改变（P＞0.05）.缺氧培养与正常培养比较,第1代CSC中VEGF、PDGF-A和PDGF-B mRNA水平明显增加,第6代Sca1＋ CSC中VEGF、PDGF-A和PDGF-B mRNA水平无明显变化,第1代Sca1＋ CSC中VEGF和PDGF-BB分泌水平明显增加[（150±37） μg/L比（18±6）μg/L、（288±37） μg/L比（35±6）μg/L],差异有统计学意义（均P＜0.01）,第6代Sca1＋ CSC中VEGF和PDGF-BB分泌水平无明显变化,差异无统计学意义（均P＞0.05）.心肌缺血组老年和青年小鼠Sca1＋ CSC水平均明显高于假手术组[（13.2±4.2）％比（1.5±0.4）％、（31.7±6.5）％比（5.0±0.6）％]（P＜0.05）,2组老年小鼠Sca1＋ CSC水平均明显低于青年小鼠（P＜0.05）.结论 衰老可致缺氧损伤刺激下Sca1＋ CSC增殖能力、分泌能力以及损伤后的动员能力下降.

热损伤与碱性成纤维细胞生长因子联合处理诱导表皮细胞去分化的实验研究

目的:体外建立表皮细胞去分化模型,为深入阐明表皮细胞去分化过程奠定基础。方法:离体条件下选择热损伤与碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为联合诱导因素处理成熟表皮细胞。通过Giemsa染色和电镜观察细胞形态的改变;通过细胞培养和滋养层培养体系观察细胞的增殖能力,包括克隆形成和复层生长情况;采用器官培养体系体外构建三维皮肤,观察细胞再分化形成表皮情况;应用基因芯片技术观察细胞基因表达的改变。结果:经联合诱导后,细胞形态发生改变。表现为体积减小,细胞器数目减少,核浆比增大。增殖和再分化能力的改变体现在诱导后的表皮细胞能形成克隆,在滋养层培养条件下可以形成复层生长,并能够在体外构建出包括基底层和基底上层在内的表皮结构。基因水平的改变表现为与角质化相关基因下调和与有丝分裂相关基因上调。结论:在热损伤与bFGF联合诱导下,已分化的表皮细胞会发生形态、功能和基因表达的改变,表现为干细胞的特性。