屋尘螨提取液皮下注射治疗小鼠过敏性哮喘的机制研究

目的观察屋尘螨提取液皮下注射治疗小鼠过敏性哮喘的疗效,探讨其治疗机制。方法将18只小鼠随机分为正常对照组、模型组和治疗组(屋尘螨治疗组),每组6只。正常对照组采用0.9%氯化钠注射液0.5 mL皮下注射,哮喘模型的建立采用屋尘螨提取液皮下注射致敏和激发。治疗组采用屋尘螨粗提液皮下注射治疗。观察3组支气管肺泡灌洗(BALF)中细胞(包括总细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、巨噬细胞)分类计数及组织炎症细胞浸润及组织结构情况。分别检测BALF上清液中白细胞介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素-10(IL-10)的水平及IL-4、Fox p3 DNA甲基化。结果模型组、治疗组BALF中总细胞数、嗜酸性粒细胞水平均高于正常对照组,且模型组高于治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组BALF上清液中IL-4水平低于模型组,BALF上清液中IL-10、IFN-γ水平均高于模型组(均P<0.01)。治疗组血清中特异性IgG1、IgE抗体水平均低于模型组(均P<0.01)。3组IL-4基因启动子上游的CpG-408、CpG-393位点甲基化率比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组Foxp3基因启动子上游的CpG-62、CpG-53、CpG-71位点甲基化率均低于模型组(均P<0.05)。结论屋尘螨提取液可抑制过敏性小鼠气道炎症,改变Foxp3的DNA甲基化程度,调节免疫平衡。

腰果主要过敏原Anao2基因克隆及原核表达

目的克隆腰果主要过敏原Anao2基因,并利用pMAL-c表达载体表达该蛋白。方法提取腰果总RNA,设计特异性引物,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)克隆腰果Anao2基因,将其反转录基因连入pMD18T sim-ple vector,提取质粒、双酶切、鉴定并测序;将测序正确的片段连入原核表达载体pMAL-c,将重组质粒转入BL21宿主表达菌中,丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导表达目的蛋白Anao2。结果测序结果表明克隆腰果Anao2基因片段全长为1 332 bp,编码443个氨基酸,与GenBank中蛋白序列完全相同;对获得的重组蛋白进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,目的蛋白大小与理论值相符。结论成功克隆并表达了腰果过敏原Anao2。