基于特征肽段的液相色谱-质谱技术鉴定胶原蛋白的物种来源

建立了一种基于特征肽段的液相色谱-质谱技术鉴定胶原蛋白物种来源的方法。样品经蛋白提取,还原,烷基化,胰蛋白酶消化后,采用Eksigent C18色谱柱(75μm×150 mm,3μm)分离,用流动相0. 1%甲酸水-乙腈溶液(98∶2)和0. 1%甲酸乙腈-水溶液(98∶2)梯度洗脱,在正离子模式下,通过纳升电喷雾四极杆飞行时间质谱进行检测,数据经Protein PilotTM软件及blast分析,筛选出潜在的特征肽段。消化后的样品再采用Eclipse Plus C18色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm)分离,用流动相乙腈和1%甲酸水溶液梯度洗脱,在正离子模式下,通过电喷雾四极杆/线性离子阱串联质谱的多反应监测触发增强子离子扫描模式进行检测,进一步确认肽段的特异性。最终筛选并确证了3种猪源性胶原蛋白特征肽段,4种牛源性胶原蛋白特征肽段,1种羊源性胶原蛋白特征肽段。所筛选的特征肽段具有良好的耐热性,可为动物源性胶原蛋白鉴定提供一种特异性强、准确可靠的检测方法。

液相色谱串联质谱法鉴定虾中外源性成分

建立一种基于特征肽段鉴别虾肉中猪皮源和牛皮源明胶的液相色谱-质谱方法。从猪皮、牛皮中提取蛋白,酶解处理后,利用纳升液相色谱-飞行时间质谱进行检测。数据经Protein PilotTM软件结合Uniprot数据库分析,BLAST搜索对比,筛选出潜在特征肽段。根据Skyline软件构建的离子对,用超高效液相色谱-三重四极杆质谱的多反应监测(MRM)模式对明胶进行验证,表明选择的2条猪皮源和2条牛皮源特征肽段皆具有很强的特异性。利用所建立的MRM质谱方法对200批次的虾进行检测,结果未检出猪皮源和牛皮源成分。