FAM3C介导TGF-β1诱导的人血管平滑肌细胞表型转换、活力增强及迁移

目的:探讨序列相似家族3成员C(FAM3C)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转换中的作用及机制。方法:检测不同浓度(0、1、2、5及10μg/L)的TGF-β1作用24 h和10μg/L的TGF-β1作用不同时间(0、6、12、24及48 h)对原代人VSMCs中FAM3C表达的影响;检测TGF-β1(10μg/L)作用不同时间(0、6、12和24 h)对VSMCs表型转换的影响;敲减FAM3C、过表达FAM3C及加入蛋白激酶B(PKB/Akt)抑制剂Ⅷ(Akti-Ⅷ)后,Western blot检测骨桥蛋白(OPN)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、增殖细胞核抗原(PCNA)、FAM3C、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)蛋白水平,CCK-8检测细胞活力,Transwell检测细胞迁移,免疫荧光检测vimentin及α-SMA蛋白表达。结果:随着TGF-β1作用浓度(0、1、2、5及10μg/L)和时间(0、6、12、24及48 h)的增加,VSMCs中FAM3C蛋白表达上调。TGF-β1(10μg/L)呈时间依赖性(0、6、12和24 h)上调OPN及vimentin表达,下调α-SMA表达。与si-NC组相比,敲减FAM3C后,OPN、vimentin、PCNA及p-Akt蛋白水平下调(P<0.05),α-SMA表达上调(P<0.05),细胞活力及迁移能力减弱(P<0.05);此外,敲减FAM3C减弱了TGF-β1对VSMCs的作用。而与LV-GFP组相比,过表达FAM3C后,OPN、vimentin、PCNA及p-Akt蛋白水平升高(P<0.05),α-SMA蛋白表达减少(P<0.05),细胞活力及迁移能力增强;过表达FAM3C促进了TGF-β1对VSMCs表型转换、活力及迁移的作用,而Akti-Ⅷ抑制了过表达FAM3C及与TGF-β1共作用对VSMCs表型的调节。结论:FAM3C通过Akt介导TGF-β1诱导的人VSMCs表型转换、活力增强及迁移,可能是干预内膜增生的潜在靶点。

支架植入治疗血液透析相关中心静脉病变效果及影响通畅率的因素

目的 探讨支架植入治疗血液透析(血透)相关中心静脉病变(CVD)的效果,分析影响通畅率的因素。方法 纳入2015年12月至2020年3月重庆医科大学附属第一医院金山医院收治的因血透相关CVD接受腔内支架植入术患者,收集一般资料、手术信息、术后随访情况,分析影响通畅率的因素。结果 共纳入89例患者,根据支架类型分为覆膜支架组(n=70)和裸支架组(n=19),覆膜支架又分为Viabahn(n=17)和Fluency(n=53)。术后3、6、12、24个月初级通畅率和次级通畅率在覆膜支架组分别为97.1%、88.6%、71.4%、55.7%和100%、98.6%、94.3%、85.7%,裸支架组分别为84.2%、57.9%、21.1%、15.8%和100%、100%、84.2%、47.4%,两组间比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。Viabahn支架初级通畅率优于Fluency支架(P=0.044),次级通畅率差异无统计学意义(P=0.061)。多因素分析显示,覆膜支架长度与初级通畅率相关(OR=2.162,95%CI=1.248~5.764,P=0.048),支架长度越长初次通畅率越低。结论 支架植入治疗血透相关CVD安全有效。覆膜支架通畅率优于裸支架,Viabahn通畅率优于Fluency。支架长度是影响覆膜支架通畅率的危险因素。

巨自噬和分子伴侣介导自噬在内皮细胞氧化应激损伤中的特点

目的 探究巨自噬和分子伴侣介导自噬(chaperone-mediated autophagy, CMA)这两种自噬途径在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)氧化应激损伤中特点。方法 通过不同浓度(0、20、50、100、200μg/mL)氧化低密度脂蛋白(oxidation low lipoprotein, OX-LDL)作用HUVECs后产生的活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平筛选诱导HUVECs氧化应激的适宜浓度。设立空白对照组(不做任何处理)、单纯抑制巨自噬组(10 mmol/L 3-MA)、氧化应激组(50μg/mL OX-LDL)和抑制巨自噬-氧化应激组(10 mmol/L 3-MA+50μg/mL OX-LDL),检测各组细胞增殖标志蛋白PCNA、凋亡标志蛋白Caspase-3、巨自噬标志蛋白Beclin-1、分子伴侣介导自噬两种标志蛋白Hsc70和Lamp-2蛋白表达,评估不同处理下HUVECs增殖、凋亡及两种自噬的变化。其中氧化应激组和抑制巨自噬-氧化应激组处理不同时间(1、3、6、12、48 h)后,采用CCK-8检测细胞增殖抑制率,Annexin-V/PI双染检测凋亡,Western blot检测两种自噬途径蛋白Beclin-1、Hsc70、Lamp-2表达,评估巨自噬抑制前后氧化应激下HUVECs的增殖、凋亡及两种自噬的时间调控特点。结果 OX-LDL诱导氧化应激下ROS浓度呈递增关系,选择50μg/mL为适宜浓度进行后续实验。与空白对照组比较,氧化应激组HUVECs Caspase-3、Beclin-1、Hsc70、Lamp-2上调,PCNA下调(P<0.05),同时随处理时间延长,48 h内细胞增殖抑制率、全期凋亡率及Lamp-2递增,Hsc70在6 h后递增,12 h内Beclin-1水平递增(P<0.05);与氧化应激组比较,抑制巨自噬-氧化应激组Caspase-3、Hsc70、Lamp-2上调,PCNA下调(P<0.05),随处理时间延长,同时段Hsc70、Lamp-2上调,且Hsc70在3 h后递增(P<0.05)。结论 巨自噬和分子伴侣介导自噬在内皮细胞氧化应激过程中先后激活,巨自噬抑制后提高分子伴侣介导自噬水平,并提前激活时间,减轻氧化应激对内皮细胞的损伤。