胶体金免疫层析法检测水产品中孔雀石绿前处理方法的优化

为了提高胶体金检测孔雀石绿方法的精密性、准确度、检测限等指标,并尽可能缩短样品处理时间,对样品用量、提取剂用量、离心时间、吹干温度、空气出量等检测条件进行优化,建立一种简便、快速检测水产品中孔雀石绿及其代谢物残留量的胶体金免疫层析方法。优化后,在满足检测限、假阳率和假阴率不变的条件下,样品处理过程更加简单,省去了传统方法需要过柱的步骤;单个样本处理,除去空气吹干的时间,只要最少7min即可完成样品的前处理,大大低于市场上样品前处理的时间;出带速度快,检测时间短,单个样本的检测时间在10~15min;对组织(鱼)中孔雀石绿的检出限可提高到2μg/kg;减少样品处理过程中耗材和试剂的用量,节约检测成本。该方法节省了大量的人力和物力,适用于日常的大批量样品检测,为胶体金免疫层析法检测孔雀石绿及其代谢物,提供了一种新的样品处理方法。

快速检测鱼样中隐性孔雀石绿的酶联免疫法研究

孔雀石绿（Malachite Green,MG）为具有金属光的绿色结晶体,属于三苯甲烷类工业染料,商品化的孔雀石绿主要为其草酸盐或盐酸盐。由于孔雀石绿对水产品具有显著的抗菌作用,而且施用简单,价格便宜,在水产品的养殖和运输过程中存在滥用的现象。

一种制备19-去甲睾酮完全抗原及单克隆抗体的方法的建立

本文旨在建立一种制备19-去甲睾酮完全抗原及单克隆抗体的方法。通过丁二酸酐将19-去甲睾酮（19BNT）半抗原与牛血清白蛋白（BSA潲联得到偶联物（19BNT—HAS—BSA），以此进行免疫、筛选，最终获得3株阳性杂交瘤细胞（4D5，6F2，7E7），并制得相应的单克隆抗体。用间接竞争酶联免疫法，对7E7株抗体进行鉴定，发现：抗体的亲和常数为3．35×108L／mol，半抑制浓度为0．35ng／mL，表明此抗体对19-去甲睾酮有很强的亲和力；以19-去甲睾酮为参照物，抗体对丙酸诺龙的交叉反应率为80．3％，对甲基睾酮、睾酮、群勃龙、己烯雌酚等的交叉反应率均小于0．2％，表明此抗体具有良好的特异性。由此可知，7E7株抗体可用于对19-去甲睾酮、丙酸诺龙的免疫分析。

禽流感抗体胶体金半定量检测方法的建立

针对目前禽流感抗体主要采用的HI检测方法操作步骤繁琐,耗时较长且必须在实验室内进行判定的缺陷,为了提高检测效率和通关速度,借助胶体金半定量检测技术,以禽流感HI抗体滴度24为临界值,研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡。首先复苏了含A/Chicken/Hongkong/SZ-HI/1997(H5N1)病毒株HA基因重组质粒pETHA的阳性菌,IPTG诱导表达4h后,SDS-PAGE电泳对HA重组蛋白进行了确证。以纯化的HA重组蛋白和灭活的禽流感病毒为主要材料,采用夹心法原理研制了禽流感抗体胶体金半定量检测卡,确定了检测卡的最佳组合反应模式、最佳上样量、最佳反应时间、最适的胶体金颗粒、最佳硝酸纤维素膜和吸水垫。所建立的禽流感抗体胶体金半定量检测卡特异性强,与其他家禽抗原阳性标准血清交叉反应小。检测卡的检测结果与HI检测结果基本一致,检测HI抗体滴度为24鸡血清时结果符合率达94%。