黄芩素对阿霉素肾病大鼠肾小管上皮细胞PERK-CHOP凋亡通路的作用

目的:探讨黄芩素对阿霉素肾病大鼠肾小管上皮细胞PERK-CHOP凋亡通路的调节作用。方法:18只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(正常组,n=6)、阿霉素肾病组(模型组,n=6)和阿霉素肾病+黄芩素观察组(观察组,n=6),模型组和观察组一次性尾静脉注射阿霉素2.0 mg/kg诱导阿霉素肾病动物模型,正常组注射等量生理盐水。造模后第1d开始,观察组予黄芩素300 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组予等量蒸馏水灌胃,共治疗12周。12周时留取各组大鼠24h尿液标本、血清标本及肾脏组织标本,使用TUNEL检测肾小管上皮细胞凋亡,免疫组化检测肾组织中p-PERK和CHOP表达,Western blot方法检测肾皮质组织中p-PERK和CHOP蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组24h尿蛋白定量明显升高(P<0.05),血清白蛋白明显降低(P<0.05),血清总蛋白、血肌酐、血尿素氮无明显差异,肾小管上皮细胞凋亡数量明显增加(P<0.05),肾皮质中p-PERK、CHOP蛋白水平明显上调(P<0.05)。经黄芩素干预12周后,与模型组比较,观察组24h尿蛋白定量明显下降(P<0.05),肾小管上皮细胞凋亡数量明显减少(P<0.05),肾皮质中p-PERK和CHOP蛋白水平明显下降(P<0.05)。结论:黄芩素可能通过调节PERK-CHOP通路起到拮抗阿霉素肾病肾小管损伤的作用。

黄芪甲苷对1型糖尿病STZ小鼠肾组织renalase/Akt/mTOR通路的作用

目的探讨renalase/Akt/mTOR在1型糖尿病链脲佐菌素(STZ)小鼠肾组织中的表达及黄芪甲苷(AS-Ⅳ)的干预作用。方法使用STZ一次性腹腔注射建立1型糖尿病小鼠,造模成功后随机选取12只糖尿病小鼠分为1型糖尿病模型组(STZ组,n=6)和AS-Ⅳ治疗组(STZ+AS-Ⅳ组,n=6),另外选取6只正常小鼠作为对照组(control组)。control组和STZ组给予标准饲料喂养,STZ+AS-Ⅳ组给予添加AS-Ⅳ的饲料喂养,共计干预8周。8周时,将各组小鼠禁食6 h后测定空腹血糖,使用小鼠代谢笼留取尿液标本后测定24 h尿白蛋白排泄率、尿糖、尿NAG酶、尿NGAL等指标。留取各组小鼠肾组织标本,行PAS染色测定肾小球和肾小管面积,免疫组化染色观察renalase表达分布,透射电镜检测足细胞融合程度,Western blot测定肾皮质组织中renalase、p-Akt(Ser473)和p-mTOR(Ser2448)的蛋白含量。结果第8周时,STZ组小鼠24 h尿白蛋白排泄率明显高于control组(P <0. 05),AS-Ⅳ干预8周后,STZ+AS-Ⅳ组较STZ组24 h尿白蛋白排泄率明显降低(P <0. 05)。透射电镜结果显示:与control组比较,STZ组小鼠肾脏足细胞有明显融合(P <0. 05),STZ+AS-Ⅳ组较STZ组融合明显减轻(P <0. 05)。第8周时,与control组相比,STZ组空腹血糖、尿糖均显著增加(P <0. 001),AS-Ⅳ干预8周后空腹血糖、尿糖无明显改变(P> 0. 05)。STZ组小鼠肾重/体重明显大于control组(P <0. 001),肾组织切片PAS染色结果显示,单位体重肾小球和肾小管面积明显增大(P <0. 001),AS-Ⅳ干预8周后可明显改善上述病理变化(P <0. 05,P <0. 01)。与control组相比,STZ组小鼠肾小管损伤指标尿NAG、尿NGAL明显增加(P <0. 001),AS-Ⅳ干预8周后可明显降低尿NAG、尿NGAL排泄(P <0. 05)。免疫组化染色结果显示renalase主要表达于肾小管中,肾小球中亦有少量表达。Western blot结果显示,STZ组肾皮质组织中renalase、p-Akt(Ser473)、p-mTOR(Ser2448)蛋白明显增加(P <0. 05),AS-Ⅳ治疗8周后可明显减低这些蛋白表达(P <0. 05)。结论 renalase/Akt/mTOR通路在糖尿病肾脏肥大损伤中具有一定的作用,AS-Ⅳ可能通过抑制其活化起到肾脏保护作用。