应用通用引物建立巢式逆转录聚合酶链反应检测肠道病毒(英文)

目的设计通用引物建立巢式逆转录聚合酶链反应(RT-n-PCR),以达到广泛。特异及快速诊断肠道病毒(Enterovirus,EV)感染。方法在EV基因组5'端非编码区(5'-UTR)设计二对通用第物,建立RT-n-PCR检测方法,对3种EV和3种非EV标准株以及165例可疑EV感染的327份临床标本进行检测。结果EV标准株均在电泳中检测到一清晰312bp扩增条带,而非EV标准株则无扩增条带;共有104份标本检测到相应大小扩增条带,阳性率31.8%;147例病例同时检测了粪便和咽拭子,粪便阳性49例,咽拭子阳性44例,其中粪便和咽拭子同时阳性35例,粪便和咽拭子EV阳性比较无显著性差异(P>0.05)。病例总阳性数64例,阳性率38.8%。结论RT-n-PCR可以准确地检测出肠道病毒,特异性强,用时少,同时检测多份标本可以提高EV阳性率。

B7-PE40新型重组融合外毒素的分子生物学特性预测

为探讨构建的重组外毒素融合蛋白B7 1 Linker PE4 0和B7 2 Linker PE4 0及其接头设计的合理性 ,应用核酸和蛋白质序列分析软件系统GOLDKEY ,对上述重组外毒素融合蛋白的柔性、抗原性、亲水性、表位和二级结构等分子生物学特性进行了计算机模拟预测。结果发现它们分别保留了B7 1,B7 2和PE4 0的表位特征 ,没有出现新的表位 ,其柔性接头处的抗原性也极低。与B7 1,B7 2和PE4 0的一、二级结构比较发现 ,这两种融合蛋白各有数个氨基酸残基改变 ,有的氨基酸改变可轻微影响融合蛋白的二级结构。原核表达的两个融合蛋白经Western印迹分析显示 ,它们能分别与B7 1,B7 2和PE4 0单克隆抗体发生特异性结合 ,表明它们较好地保留了B7和PE4 0的抗原性和空间结构 ,与预测的结果一致。提示预测结果会有助于我们研究该系列融合蛋白的体内、外生物学效应 ,以及设计构建新的其他融合蛋白。

人B7-1和B7-2cDNA的克隆及鉴定

目的 :为探索性构建全新型重组人B7 PE40绿脓杆菌外毒素融合蛋白以长期诱导免疫耐受 ,本研究从急性B淋巴细胞白血病细胞株Raji中克隆N 末端分别缺失 34和 1 6个氨基酸的人B7 l和B7 2基因胞外区 ,并构建含此基因的重组质粒。方法 :根据B7 1和B7 2基因序列设计合成可扩增B7 1和B7 2cDNA的特异性引物 ,用RT PCR的方法从Raji细胞总RNA中扩增B7 1和B7 2cDNA ,并克隆至 pGEM T载体中 ,经酶切鉴定后再进行序列分析。结果和结论 :从Raji细胞中扩增出预期的 6 2 4和 6 75bp的B7 1和B7 2cDNA ,将其克隆至 pGEM T载体中 ,分别经EcoRI/HindⅢ和BamHI/Sphl双酶切电泳和序列分析确证 ,为进一步构建人B7

脐血采集和分离过程中病原微生物污染概率的研究

为探讨脐血采集、分离过程中病原微生物污染的概率及不同检测方法的有效性,采用BACTEC 9050细菌培养系统和改良马丁/硫乙醇酸盐(22℃)及硫乙醇酸盐(35℃)培养法对60份脐血同时进行采集后及分离后细菌和真菌的培养;对206份脐血血清标本采用ELISA法检测HBsAg,Anti-HBC,Anti-HCV,Anti-HCMV-IgM,HTLV-1,HTLV-2,HIV-1及HIV-2;用分子生物学方法检测HBV DNA和HCV RNA;用红细胞凝集法检测TPHA。研究结果显示:采用BACTEC 9050细菌培养系统,采集后脐血中细菌污染率为3.33％,真菌污染率为0％;细胞分离后细菌和真菌污染率分别增高到6.67％和1.67％;在该系统中,厌氧菌的阳性检出率远高于改马丁/硫乙醇酸盐(22℃和35℃)。脐血血清病原菌检测结果表明:采用ELISA方法,HBsAg阳性率2.4％,Anti-HBC单项阳性率29.4％,Anti-HCMV-IgM阳性率1.89％ ;采用分子生物学方法,HBV DNA阳性率5.8％,HBsAg阴性而HBCAb单项阳性标本中HBV DNA阳性率6.7％,HCV RNA阳性率2.4％。结论:采集及分离后脉血细胞中病原微生物阳性率甚高;目前沿用的改良马丁/硫乙醇酸盐(22℃和35℃)培养系统,会导致脐血中厌氧菌漏检,有必要更新该培养方法,如采用先进的BACTEC 9050培养体系。分子生物学方法可弥补ELISA等常规脐血传染病检测方法的缺陷。

两种方法制备的血小板浓缩液的比较

两种方法制备的血小板浓缩液的比较５１８００１深圳市中心血站余枝容伍秀英陈悦康叶小演邹江洪目前，国内外普遍采用输注血小板浓缩液（以下简称ＰＣ）辅助治疗白血病、再障、ＭＤＳ等疾病引起的血小板减少性出血。ＰＣ的制备方法有手工法和血细胞分离机采集法（简称机采...

不同ELISA HCV抗体试剂在献血者筛检中的应用评价

目的探讨不同丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂在献血者血液筛检中存在漏检现象。方法采用ELISA法二种不同的HCV抗体筛检试剂对37717人份血清同时进行检测,对于筛检抗—HCV阳性的结果,再用重组免疫印迹(RIBA)法进行确认。结果A试剂ELISA法检出阳性36份而RIBA确认0份阳性,可疑8份,阴性28份;B试剂ELISA法检出阳性67份而RIBA确认4份阳性,可疑32份,阴性31份;A与B两种试剂ELISA法同时检出阳性68份,RIBA确认阳性55份,可疑5份,阴性8份。结论试剂A与试剂B抗—HCV阳性检出的一致性比较,经x2配对计算(x2=12190,P<0.01)得出两种试剂检出抗—HCV阳性标本的一致性有非常显著性的差异。为尽可能减少输血后HCV感染发生,有责任首选灵敏度高、特异性强的ELISA试剂来检测献血者血液。

STR基因位点检测技术在亲权鉴定中的应用

目的探索应用短串联重复序列(STR)基因位点检测技术开展亲权鉴定的可行性.方法自2002年3月～2004年5月间,采用PCR复合扩增技术、毛细管电泳及五色荧光自动化检测技术对143例亲权鉴定案例389份血液样本,进行了15个STR基因位点和1个Amelogenin性别基因位点检测分析.认定亲权关系的均以亲子关系指数(RCP)≥99.99%为准,排除亲权关系的则以≥3个以上基因位点不符为依据.结果在143例亲权鉴定案例中,认定有亲权关系的119例,占83.22%,排除有亲权关系的24例,占16.78%,结论 STR基因检测位点多,多态性高,DNA片段短、造成错配和优先扩增的可能性小,提高了PCR扩增的成功率和灵敏度,而且标本用量少(一般仅为0.1 ng模板DNA),因此,目前STR基因位点检测技术可以作为亲权鉴定的主要技术手段.

用丈夫淋巴细胞治疗原因不明性习惯性流产59例分析

目的探讨采用皮内注射丈夫淋巴细胞治疗原因不明习惯性流产(UHA)的可行性。方法采用丈夫淋巴细胞皮内注射免疫治疗UHA患者,治疗组59例,对照组42例。结果59例接受淋巴细胞免疫治疗者中,52例坚持治疗妊娠成功的38例,妊娠成功率为73.08%。对照组42例,妊娠成功的11例,妊娠成功率为26.19%。两组比较有显著性差异(P<0.005)。对于接受治疗的患者血清进行了封闭抗体检测,治疗前均为阴性;免疫治疗后阳性27例,阳性率为51.92%(27/52);妊娠期阳性32例,阳性率为61.54%(32/52)。结论皮内注射丈夫淋巴细胞治疗UHA疗效肯定,且有简便、安全的优点,值得推广应用。

珠江三角洲地区汉族母子ABO血型分布及不合妊娠率调查

目的了解珠江三解洲地区汉族母子ABO血型分布、ABO血型基因频率及不合妊娠率。方法用试管法对3153例汉族母子进行ABO血型检测,计算ABO血型基因频率,求出母子ABO血型不合的妊娠率。结果本地区汉族母子ABO血型不合的妊娠率为24.55%;ABO血型基因频率为r>q>p,表现型O>B>A>AB。结论本地区流族母子ABO血型不合妊娠率低于北方地区;ABO血型基因频率符合南方地区O基因频率较高的特征。

1466例自愿献血者梅毒及HIV感染情况调查

为了长期连续地观察性病在不同人群中的分布和流行趋势,了解性病的高危和低发人群,监测近年来在我市迅速增多的梅毒和艾滋病的流行动态,按照全国性病防治研究中心所制订的方案,我们进行了该项调查。

归元创疗方剂在早期闭合性创伤大鼠中的抗炎作用的实验研究

在创伤治疗早期，如何阻断全身炎症反应综合症（SIRS）向多器官功能障碍（MODS）发展是目前的重要课题，研究表明胃肠道黏膜屏障破坏和肠道细菌移位，在MODS的发生中起重要作用。本研究以闭合性创伤大鼠为模型，观察中药在创伤早期的抗炎作用，为临床应用实验依据。

肝病患者中庚型肝炎病毒感染的检测

目的探讨临床肝病病人中庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）感染情况及临床特点。方法应用庚型肝炎病毒基因组５’ＵＴＲ两对寡核苷酸作为引物，建立逆转录套式聚合酶链反应，检测１６９例不同肝病患者血清标本中ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ，并对其中１例ＰＣＲ扩增产物进行克隆及测序。结果１６９例各型肝病病人ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ总的检出率为９５％（１６／１６９）。在２９例有手术输血史患者中，３１０％（９／２９）ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶＲＮＡ呈阳性，明显高于无手术输血史组（５％，Ｐ＜００１）。序列分析显示１株庚肝病毒５’ＵＴＲ部分基因片段与已知庚肝病毒株核苷酸同源性在８９１４％～９８９１％之间。结论ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ感染普遍存在于临床肝病患者中，病人感染ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的临床表现未发现有特殊性，ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ可能不是非甲～戊型肝炎的主要致病因子。