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滚环扩增结合DNA纳米传感器超灵敏检测HIV整合酶方法的建立
1
作者
陈辅明
王婧
李富荣
《新发传染病电子杂志》
2023年第6期1-8,共8页
目的以H I V整合酶(integrase,I N)为特异性靶标,利用滚环扩增(rollingcircle amplification,RCA)技术结合DNA纳米传感器建立一种HIV IN等温扩增检测方法(rolling-circle-enhanced-INactivity-detection,REIAD)。方法提取纯化的重组HIV...
目的以H I V整合酶(integrase,I N)为特异性靶标,利用滚环扩增(rollingcircle amplification,RCA)技术结合DNA纳米传感器建立一种HIV IN等温扩增检测方法(rolling-circle-enhanced-INactivity-detection,REIAD)。方法提取纯化的重组HIV IN或包装HIV颗粒,以HIV IN活性为靶标,设计IN识别的附着位点(attachment site,att)长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)和双链DNA环,与DNA纳米传感器检测技术结合,将LTR固定于载玻片表面并催化其末端插入双链DNA环生成一个有切口的DNA环,进行界面RCA扩增和荧光标记探针检测,建立REIAD。通过检测梯度稀释HIV IN和包装HIV颗粒,评价检测方法的敏感性,确定检测限;通过梯度稀释小鼠白血病病毒(murine leukemia virus,MLV)和HIV IN抑制剂雷特格韦作用,评价检测方法的特异性。通过对梯度稀释HIV IN中加入HEK293全细胞提取物及10%胎牛血清细胞培养基检测,评价患者血浆样本检测的可行性。结果REIAD方法在37℃、整合50min、滚环扩增30min条件下完成梯度稀释HIV IN及包装HIV颗粒的检测,具有良好的敏感性,重组HIV IN和包装HIV颗粒的最低检出限可达15fmol和2TU/μl,与MLV无交叉反应,具有良好的特异性。结论本研究建立的REIAD检测方法具有敏感性高、特异性好,操作简便,平台要求低等优点,有望为HIV早期检测提供一种新的方法。
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关键词
纳米传感器
HIV检测
整合酶
滚环扩增
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职称材料
题名
滚环扩增结合DNA纳米传感器超灵敏检测HIV整合酶方法的建立
1
作者
陈辅明
王婧
李富荣
机构
深圳市
人民医院
(
南方科技大学
第一
附属
医院
)
转化
医学
协同
创新
中心
广东省干细胞与细胞治疗工程技术研究
中心
南方科技大学
健康
医学
研究院
出处
《新发传染病电子杂志》
2023年第6期1-8,共8页
基金
广东省基础与应用基础基金联合基金项目(2020A1515110521)
深圳市国际合作研究项目(GJHZ201908211641420866)
深圳市基础研究专项面上项目(JCYJ20190807144609346)。
文摘
目的以H I V整合酶(integrase,I N)为特异性靶标,利用滚环扩增(rollingcircle amplification,RCA)技术结合DNA纳米传感器建立一种HIV IN等温扩增检测方法(rolling-circle-enhanced-INactivity-detection,REIAD)。方法提取纯化的重组HIV IN或包装HIV颗粒,以HIV IN活性为靶标,设计IN识别的附着位点(attachment site,att)长末端重复序列(long terminal repeat,LTR)和双链DNA环,与DNA纳米传感器检测技术结合,将LTR固定于载玻片表面并催化其末端插入双链DNA环生成一个有切口的DNA环,进行界面RCA扩增和荧光标记探针检测,建立REIAD。通过检测梯度稀释HIV IN和包装HIV颗粒,评价检测方法的敏感性,确定检测限;通过梯度稀释小鼠白血病病毒(murine leukemia virus,MLV)和HIV IN抑制剂雷特格韦作用,评价检测方法的特异性。通过对梯度稀释HIV IN中加入HEK293全细胞提取物及10%胎牛血清细胞培养基检测,评价患者血浆样本检测的可行性。结果REIAD方法在37℃、整合50min、滚环扩增30min条件下完成梯度稀释HIV IN及包装HIV颗粒的检测,具有良好的敏感性,重组HIV IN和包装HIV颗粒的最低检出限可达15fmol和2TU/μl,与MLV无交叉反应,具有良好的特异性。结论本研究建立的REIAD检测方法具有敏感性高、特异性好,操作简便,平台要求低等优点,有望为HIV早期检测提供一种新的方法。
关键词
纳米传感器
HIV检测
整合酶
滚环扩增
Keywords
Nanosensor
HIV testing
Integrase
Roll circle amplification
分类号
R447 [医药卫生—诊断学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
滚环扩增结合DNA纳米传感器超灵敏检测HIV整合酶方法的建立
陈辅明
王婧
李富荣
《新发传染病电子杂志》
2023
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