肝豆状核变性基因与肿瘤耐药的研究进展

肝豆状核变性基因 (ATP7B)定位于 13q14 .3区 ,编码一种铜转运P型ATP酶。ATP7B的突变使其蛋白缺乏或丧失转运肝铜的功能 ,导致肝、肾和脑等组织铜累积过多 ,表现为慢性肝病和 (或 )神经损害 ,ATP7B蛋白对铜的转运机制尚未明了。ATP7B在多种肿瘤细胞中表达对顺铂耐药 ,研究表明ATP7B除了是铜的转运蛋白外 ,还可能转运顺铂 ,但转运位点不清楚。ATP7B可能是一个新的肿瘤化疗耐药指标。

转染肿瘤坏死因子-α及MDR1反义RNA逆转乳腺癌多药耐药的研究

目的:转染肿瘤坏死因子-α(TNF-α)cDNA和多药耐药基因(MDR1)的反义RNA到乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达,并观察它们在乳腺癌耐药逆转中的作用。方法:应用RT-PCR和DNA重组技术构建反义绿色荧光蛋白pEGFP-MDR1融合蛋白表达载体和红色荧光蛋白pDsRed2-TNF-α融合蛋白表达载体,分别和同时导入乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达,检测转染前后细胞的生长曲线、细胞凋亡程度、MDR1-mRNA和P糖蛋白(P-gp)表达情况及对ADR敏感性的变化。结果:转染后的细胞生长明显减慢,凋亡率显著增加,MDR1-mRNA和P糖蛋白(P-gp)表达明显降低,对ADR的耐药性明显下降,敏感性增加。结论:联合运用不同的逆转耐药机制,将TNF-αcDNA及MDR1反义RNA分别或同时导入乳腺癌耐药细胞中,能有效达到逆转耐药的目的。

紫杉醇或草酸铂联合氟脲嘧啶/亚叶酸治疗晚期胃癌的对比研究

目的:观察并比较紫杉醇联合氟脲嘧啶/亚叶酸(5-FU/CF)与草酸铂联合5-FU/CF治疗晚期胃癌的疗效及毒副反应。方法:随机将晚期胃癌患者分为两组:紫杉醇联合5-FU/CF组(A组)27例,草酸铂联合5-FU/CF(B组)29例。每例患者至少完成2周期以上的化疗。结果:A组有效率(CR+PR)为59.26%,中位缓解期5.8个月,中位生存期11.6个月。B组有效率(CR+PR)为55.17%,中位缓解期6.2个月,中位生存期10.8个月。两组的主要毒副反应为骨髓抑制、神经毒性和消化道反应。两者相比A组的骨髓抑制、脱发较重,B组轻度腹泻的发生率稍高。结论:紫杉醇联合5-FU/CF与草酸铂联合5-FU/CF两方案治疗晚期胃癌疗效相当,毒副反应均可耐受。

综合医院不同专科护士化疗防护现状分析与干预的探讨

目的了解在抗肿瘤化疗药物治疗过程中,不同专科的护士化疗防护现状,并探讨干预的初步效果。方法采用自行设计的防护意识认知调查表,对64名肿瘤科和非肿瘤科二组护士进行问卷调查和现场评估,并对化疗防护进行初步干预。结果肿瘤科与非肿瘤科护士在化疗防护设备、防护知识认知和具体操作水平方面均存在显著差异(P<0.01),表明抗肿瘤化疗药物因防护不善,对某些专科护士已构成潜在的职业危害。结论通过采取建立防护制度、开展职业安全教育和多学科协作等干预措施后,防护情况已得到较明显的改善,体现了“以人为本”的服务理念。

转染肿瘤坏死因子及反向多药耐药基因对乳腺癌细胞耐药基因表达的影响

目的构建反向pEGFP-MDR1重组表达载体和pDsRed2-TNF-α重组表达载体,在乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达,并观察它们对多药耐药(MDR)基因的影响。方法应用RT-PCR和DNA重组技术构建反向绿色荧光蛋白pEGFP-MDR1融合蛋白表达载体和红色荧光蛋白pDsRed2-TNF-α融合蛋白表达载体,分别和同时导入乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADR中进行表达,应用荧光显微镜直接观察融合蛋白的表达情况,RT-PCR和免疫细胞化学染色法分别检测转染前后MDR1-mRNA和P糖蛋白表达情况。结果转染了反向pEGFP-MDR1载体的细胞可见到绿色荧光,转染了pDsRed2-TNF-α载体的细胞可见到红色荧光,而同时转染了反向pEGFP-MDR1载体和pDsRed2-TNF-α载体的细胞可见到红色及绿色荧光。转染后的细胞在mRNA水平及蛋白水平明显降低了耐药细胞MCF-7/ADR的MDR1基因的表达。结论反向pEGFP-MDR1融合蛋白和pDsRed2-TNF-α融合蛋白能在乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR中分别及同时获得表达,并能抑制MDR1基因在MCF-7/ADR细胞中的表达,为进一步研究基因治疗联同免疫治疗逆转乳腺癌耐药建立了很好的基础。

肺癌端粒酶活性及外周血T淋巴细胞Ag-NORs的研究

【目的】探讨端粒酶活性与肺癌临床病理特征的关系,以及端粒酶活性强度与外周血T淋巴细胞 嗜银蛋白(Ag NORs)含量的关系。【方法】采用PCR TRAP方法检测48例肺癌组织和28例癌旁组织端粒 酶活性,并用免疫图像分析的方法术前检测20例病人的外周血T淋巴细胞Ag NORs含量。【结果】肺癌组 织与癌旁组织的端粒酶阳性表达率差异有显著性(P<0.01);肺癌端粒酶活性与淋巴结转移、TNM分期有 显著相关性(P<0.05);肺癌端粒酶活性强度与外周血T淋巴细胞Ag NORs含量呈负相关关系(R=-0. 808)。【结论】端粒酶活化与肺癌的发生发展有关,并与机体免疫功能有着密切的关系,结合分析端粒酶活性 与外周血T淋巴细胞Ag NORs含量对了解肺癌的进展情况有意义。

紫杉醇或多西紫杉醇联合顺铂治疗晚期鼻咽癌的临床研究

目的观察紫杉醇或多西紫杉醇联合顺铂治疗晚期鼻咽癌的疗效及安全性。方法随机将晚期鼻咽癌56例分为紫杉醇联合顺铂组(PP组)28例,多西紫杉醇联合顺铂组(DP组)28例。每例至少完成2周期以上的化疗。结果PP组有效率67.86%,中位缓解期10.7个月,中位生存期18.4个月。DP组有效率71.43%,中位缓解期11.8个月,中位生存期20.2个月。PP组较多出现肌肉骨关节痛和周围神经毒性;其他毒副反应为骨髓抑制和恶心、呕吐等,两组相近。结论紫杉醇或多西紫杉醇联合顺铂两方案治疗晚期鼻咽癌,效果较好,疗效相当,毒副反应均可耐受。

长春瑞滨或紫杉醇联合顺铂治疗晚期乳腺癌的临床观察

目的观察长春瑞滨和顺铂方案(NP方案)与紫杉醇和顺铂方案(TP方案)治疗晚期乳腺癌的疗效和不良反应。方法将65例晚期乳腺癌患者分为两组。NP方案组33例,NVB40mg/d,d1、d8;DDP25mg/m2,d1～d3。TP方案组32例,PTX135～150mg/m2,d1;DDP25mg/m2,d1～d3。结果NP方案有效率48.5%(16/33),中位缓解期6.5个月;TP方案有效率40.6%(13/32),中位缓解期7.8个月。组间疗效及缓解期差异无统计学意义,P>0.05。结论NP方案与TP方案对晚期乳腺癌疗效确切,不良反应可耐受,组间疗效差异无统计学意义,均可作为晚期乳腺癌一线方案应用。

DNA修复基因XPD基因型与铂类药物化疗敏感性的关系

目的探讨着色性干皮病基因D(XPD)的单核苷酸多态性(SNPs)与铂类药物化疗敏感性的关系。方法采用基因测序法对50例经病理确诊且CT扫描证实有可测量病灶的恶性肿瘤患者的外周血进行XPD基因SNPs检测,分析各基因型与化疗敏感性的关系。结果 XPD基因型的分布与病种无关(P>0.05)。XPD基因第312位密码子的纯合突变型Asn/Asn基因分型对铂类化疗的敏感性高于纯合野生型Asp/Asp及杂合突变型Asp/Asn基因分型(P<0.05)。结论 XPD基因SNPs可能与铂类药物化疗敏感性有关。

GSTP1遗传多态性对铂类化疗敏感性的影响

目的:研究谷胱甘肽-S-转移酶P1(glutathione S-transferases P1,GSTP1)基因第105位点的遗传多态性与恶性肿瘤患者对铂类药物化疗敏感性的关系。方法:收集50例经病理确诊且CT扫描证实有可测量病灶并接受以顺铂为主的化疗的恶性肿瘤患者,于化疗前抽取外周静脉血,采用基因测序的方法对GSTP1基因第105位点的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)进行检测,观察这些患者经2～4个周期化疗后的疗效,分析各基因分型与铂类药物化疗敏感性的关系。结果:GSTP1基因第105位点基因型的分布与病种无关(P>0.05)。携带GSTP1基因第105位密码子的Ile/Ile、Ile/Val和Val/Val 3种基因型的患者对铂类药物化疗有效率分别为20.0%、36.4%和87.5%,携带纯合突变型V al/Yal基因分型的患者的敏感性明显高于携带另外2种基因分型的患者(P<0.05)。结论:GSTP1基因单核苷酸多态性可能与铂类药物化疗敏感性相关。

反向MDR1及TNF-α重组表达载体的构建及其在乳腺癌耐药细胞中的表达

目的 克隆MDR1及TNF-α基因cDNA，构建反向pEGFP-MDR1重组表达载体和pDsRed2-TNF-α重组表达载体，并在乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR中进行表达。方法 应用RT-PCR和DNA重组技术构建反向绿色荧光蛋白pEGFP-MDR1融合蛋白表达载体和红色荧光蛋白pDsRed2-TNF-α融合蛋白表达载体，经脂质体分别和同时导入乳腺癌耐药细胞株MCF-7／ADR中进行表达，应用荧光显微镜直接观察融合蛋白的表达情况，G418筛选阳性克隆。结果 转染了反向pEGFP-MDR1载体的MCF-7／ADR细胞在胞浆和胞核均可见到绿色荧光。而转染了pDsRed2-TNF-α载体的MCF-7／ADR细胞在胞浆和胞核均可见到红色荧光。而同时转染了反向pEGFP-MDR1载体和pDsRed2-TNF-α载体的细胞胞浆和胞核均可见到红色及绿色荧光。结论 反向pEGFP-MDR1融合蛋白和pDsRed2-TNF-α融合蛋白能在乳腺癌耐药细胞MCF-7／ADR中分别及同时获得表达，为进一步研究基因治疗联同免疫治疗逆转乳腺癌耐药建立了很好的基础。

应用P_RP_L串联启动子表达HIV-2gag蛋白

目的 :探讨HIV 2gag非融合蛋白的表达。方法 :应用DNA重组技术 ,将HIVgag基因全序列 (gag)和部分 (gag’)cDNA片段克隆到pBV2 2 0载体PRPL 串联启动子下游 ,构建成HIV 2gag重组表达载体pBV gag和pBV gag’ ,在大肠杆菌中表达。结果 :SDS PAGE显示pBV gag’在 2 1kD处可见一明显的额外蛋白带 ,经薄层扫描分析占菌体总蛋白的 6 .1% ,蛋白印迹结果证明 ,表达出的特异蛋白分子量pBV gag为 5 7kD和 47kD ;pBV gag’为 47kD和 2 1kD。经提取包涵体证明 ,表达的蛋白主要以包涵体形式存在于菌体中。结论 :HIV

子宫内膜异位症合并不孕者STAT3基因多态性分析

目的探讨STAT3基因多态性与子宫内膜异位合并不孕症之间的相关性。方法选取2013年6月至2014年6月深圳市人民医院收治的子宫内膜异位症合并不孕症妇女30例和同期体检健康的妇女35例为研究对象。采用PCR-RFLP法对两组妇女进行STAT3基因多态性检测。结果 STAT3基因rs2293152多态性位点的C、G等位基因频率在观察组和对照组中分别为70.0%、30.0%和90.0%、10.0%,两者相比差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组CC纯合型17例,CG杂合型8例,GG纯合型5例,分别占总数的56.7%、26.7%和16.6%;对照组CC纯合型30例,CG杂合型3例,GG纯合型2例,分别占总数的85.7%、8.6%和5.7%,两组间差异有统计学意义(P<0.05)。此外,与CC基因型相比,携带G等位基因的基因型(CG+GG)可能增加了子宫内膜异位合并不孕症的发病风险[OR=4.59,95%CI(1.40,15.09)]。结论STAT3基因(rs2293152)多态性可能与子宫内膜异位症合并不孕症的易感性相关。

神经节苷脂对整合素α_2β_1介导神经母细胞瘤细胞粘附于胶原蛋白的影响

目的探讨内生肿瘤神经节苷脂(gangliosides,Gls)对整合素α2β1介导神经母细胞瘤细胞与胶原蛋白(collagen,Col)粘附反应的影响。方法用葡萄糖苷神经酰氨合成酶抑制剂(D-threo-1-phenyl-2-decaolamino-3morphinoline-1-propanol,D-PDMP)抑制SK-N-SH细胞株Gls合成,采用流式细胞仪检测清除肿瘤细胞Gls前后SK-N-SH细胞整合素α2β1(integrinα2β1)表达的变化情况,同时观察Mg2+、抗integrinα2单克隆抗体6F1和抗inte-grinβ1单克隆抗体(anti-β1)对该细胞对包被Col粘附作用的影响,所粘附的细胞用BCA方法测定,以吸光度(A570)代表粘附细胞的数量。结果SK-N-SH细胞高水平表达integrinα2β1。暴露于D-PDMP6d后,细胞Gls几乎完全清除,但integrinα2β1的表达无明显变化,Mg2+能明显增加SK-N-SH细胞I型Col的粘附反应,Mg2+浓度为1mmol/L的条件下,Gls清除组粘附能力较对照组的明显下降A570分别为0.33±0.016和0.57±0.033(P<0.01)。用从SK-N-SH细胞提取的Gls加入Gls清除组,可明显恢复该细胞的粘附能力,较对照组差异无显著性(P>0.05)。抗整合素α2β1单克隆抗体anti-α2(10μL/mL)6F1和anti-β1均能显著阻断SK-N-SH细胞粘附于胶原蛋白(A570分别为0.31±0.018和0.36±0.021);但外源性肿瘤Gls并不能恢复anti-α2或anti-β1所阻断Gls清除组细胞的粘附能力。结论内生肿瘤Gls增加整合素α2β1介导肿瘤细胞对Col的粘附作用,肿瘤Gls不能改变细胞integrin的表达,Gls对细胞粘附的调节作用主要可能通过影响细胞整合素的功能而发挥作用。

希罗达治疗晚期乳腺癌疗效观察

目的 观察希罗达治疗转移性或复发性乳腺癌的疗效及不良反应。方法 希罗达剂量为每天2510mg/m2,分早晚2次餐后口服,连用14d,间隔7d,21d为一个周期。结果 21例中无完全缓解(CR),部分缓解(PR)6例,总有效率28.6％(6/21)。不良反应有手足综合征15例,皮肤色素沉着11例,恶心19例,厌食14例,呕吐7例,白细胞下降6例,血小板下降2例,大多数为Ⅰ-Ⅱ度。结论 对经含蒽环类和(或)紫杉醇化疗方案治疗失败的患者用希罗达仍有较好的疗效,其不良反应可耐受,且口服方便。

CYP17基因多态性与子宫内膜异位症的相关性

目的探讨CYP17基因多态性与子宫内膜异位症的相关性。方法选择2014年1月至2015年12月深圳市人民医院收治的子宫内膜异位症患者30例(子宫内膜异位症组),同时选取体检健康者30例作为对照组,采集2组受试者外周静脉血标本并提取DNA,设计引物,通过聚合酶链式反应扩增包括基因多态位点的片段,用Msp A1Ⅰ限制性内切酶进行酶切,酶切产物在琼脂糖凝胶上电泳,确定CYP17基因的基因型,分析CYP17基因多态性与子宫内膜异位症的相关性。结果子宫内膜异位症组患者的CYP17基因型TT、TC、CC频率分别为36.7%、46.7%、16.7%,对照组CYP17基因型TT、TC、CC频率分别为20.0%、43.3%、36.7%,子宫内膜异位症组患者CYP17基因的TT基因型频率显著高于对照组(P<0.05),CC基因型频率显著低于对照组(P<0.05);2组TC基因型频率比较差异无统计学意义(P>0.05)。子宫内膜异位症组患者CYP17等位基因T、C频率分别为60.0%(36/60)、40.0%(24/60),对照组受试者CYP17等位基因T、C频率分别为41.7%(25/60)、58.3%(35/60),2组受试者CYP17等位基因频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。CYP17基因的TC基因型与子宫内膜异位症的患病风险无关联(P>0.05);CYP17基因携带TT基因型个体罹患子宫内膜异位症的风险增加(P<0.05)。结论 CYP17基因多态性可能与子宫内膜异位症有相关性,可能为该疾病的遗传易感基因,CYP17基因携带TT基因型个体罹患子宫内膜异位症的风险增加。

肺癌骨转移疼痛患者止痛治疗的效果评估(英文)

背景:应用以帕米膦酸盐为代表的破骨细胞活性抑制剂,是否可以缓解肺癌骨转移性疼痛,已成为治疗中值得探讨的问题。目的:评估抗癌治疗中帕米膦酸盐类药物对肺癌骨转移疼痛患者止痛治疗的效果,以及治疗后生活质量。设计:随机实验对照。地点和对象:1996-01/1998-06暨南大学附属第二医院深圳市人民医院收治的肺癌骨转移患者71例,分为综合疗法组(46例)和单一疗法组(25例。综合疗法组分为3个小组:化疗+帕米膦酸钠组18例),放)(疗+帕米膦酸钠组(16例),核素+帕米膦酸钠组(12例)。单一疗法组分为2个小组:化疗组(15例),放疗组(10例)。方法:综合疗法组的3个小组和单一疗法组的2个小组分别采用帕米膦酸钠加化疗、放疗、核素的综合疗法和化疗、放疗的单一疗法。根据主诉疼痛分级法进行疗效评价。主要观察指标:各组的镇痛效果及不良反应。结果:综合疗法组镇痛总有效率为89%(41/46),化疗+帕米膦酸钠组有效率为89%16/18),放疗+帕米膦酸钠组有效率为88%14/16),((核素+帕米膦酸钠组有效率为92%(11/12);单一疗法组镇痛总有效率为64%(16/25),化疗组有效率为60%(9/15),放疗组有效率为70%7/10)。(结论:采用抗癌和破骨细胞抑制剂帕米膦酸钠综合治疗肺癌骨转移引起的疼痛,疗效满意,不良反应无相加,可进一步改善患者的生活质量。

基于Fe_3O_4/乙二胺四乙酸磁性粒子的集成化蛋白质组学方法

建立了基于Fe_3O_4/乙二胺四乙酸(EDTA)磁性粒子的集成化蛋白质组学研究方法。首先用共沉淀法合成EDTA负载的Fe_3O_4/EDTA磁性粒子。在优化的溶液条件下(95%乙腈-1%三氟乙酸,体积分数),100μg Fe_3O_4/EDTA磁性粒子可吸附12.4μg牛血清白蛋白(BSA),吸附容量是商品化磁珠的10倍左右。以BSA作为标准蛋白质,对所合成的Fe_3O_4/EDTA磁性粒子作为蛋白质组学反应器的酶解时间进行了优化,发现Fe_3O_4/EDTA磁性粒子处理BSA酶解1、8和16 h的肽段序列覆盖率和特征肽段结果相当。因此,可以将复杂的蛋白质样品前处理时间缩短至2 h内。最后,将所合成的Fe_3O_4/EDTA磁性粒子应用于血清的蛋白质组学研究,成功地鉴定出218种蛋白质,其中包含了41种美国食品药品管理局(FDA)认证的生物标志物。所发展的基于Fe_3O_4/EDTA磁性粒子的蛋白质组学样品前处理方法将蛋白质样品预富集、还原、烷基化、酶解、多肽除盐和洗脱等步骤集成到一起,减少了样品转移和处理所造成的损失。这种技术具有快速、灵敏和易于操作的特点,可用于临床蛋白质组学研究。

α2β1整合素对神经母细胞瘤细胞侵袭迁移的影响

目的近年来研究表明细胞间黏附分子整合素的变化与肿瘤细胞的侵袭迁移之间有着重要的联系,该研究进一步深入探讨α2β1整合素对神经母细胞瘤细胞侵袭和迁移能力的影响,为预防神经母细胞瘤细胞的转移和辅助治疗提供理论依据。方法采用细胞倾斜实验、聚碳酸酯膜侵袭试验观察神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株细胞在整合素α2单克隆抗体(anti-α2)和β1单克隆抗体(anti-β1)作用下,瘤细胞迁移、侵袭能力的变化。迁移或侵袭的细胞通过姬姆萨染色,200倍显微镜下计数,计算不同条件下细胞迁移或侵袭抑制率。结果anti-α2和anti-β1阻断组细胞的迁移能力较对照组98.1±7.4明显降低,分别为50.9±10.5和54.3±9.0(P<0.01),抑制率分别为48.1%和44.5%。anti-α2和anti-β1阻断组细胞的侵袭能力较对照组41.5±4.8明显减弱,分别为25.3±4.4和18.8±3.9(P<0.01),抑制率分别为39.0%和54.7%;结论α2β1整合素在神经母细胞瘤细胞迁移侵袭过程中起着促进作用。

整合素α2对神经母细胞瘤细胞粘附于胶原蛋白的调节作用

目的:探讨两价阳离子和针对整合素α2的特异性阻断性单克隆抗体对神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH细胞粘附于胶原蛋白(Col)的影响,探讨整合素α2β1对该细胞粘附反应的调节作用。方法:将含有不同Mg2+、Ca2+浓度和有或无抗α2单克隆抗体6F1的SK-N-SH细胞混悬液。加入96孔平底非细胞培养板,此反应板已包被Ⅰ型大鼠尾Col(4μg/well),所粘附的细胞用BCA方法测定,以吸光度(A570)代表粘附细胞的数量。结果:Mg2+能明显增加SK-N-SH细胞Ⅰ型Col的粘附反应;Mg2+浓度为1mmol/L时,细胞粘附的反应已接近高峰,与对照组相比A570分别为0·59±0·03和0·25±0·01(P<0·01),而Ca2+对细胞的粘附无明显影响;抗α2单克隆抗体6F1(10mL/L)能显著阻断SK-N-SH细胞粘附于胶原蛋白(A=0·27±0·01),其粘附水平接近无Mg2+的粘附反应水平(A=0·32±0·01)。结论:整合素α2介导SK-N-SH细胞对胶原蛋白粘附反应,提示整合素α2可能参与调节神经母细胞瘤的转移。