SOCS1在人骨髓间充质干细胞中的表达以及稳定表达SOCS1间充质干细胞株的建立

目的探讨不同炎性因子刺激下细胞因子信号转导抑制分子-1(suppressor of cytokine signaling1,SOCS1)在人骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)中的表达情况,并研究稳定表达SOCS1的MSCs细胞株的建立方法。方法用SOCS1相关炎性因子刺激剂处理24小时后裂解MSCs,Westen Blot检测各组细胞SOCS1的表达。通过Gateway技术,构建出表达SOCS1基因的载体质粒p Final/PGK-puro-EF1α-SOCS1-IRES-EGFP,将其与包装质粒共转染293FT细胞产生慢病毒,通过多次感染将载体导入人骨髓间充质干细胞,流式细胞术筛选出稳定表达SOCS1的人骨髓间充质干细胞,并用Westen Blotting、流式细胞术、成骨成脂肪诱导分化来鉴定。结果 SOCS1蛋白在IFN-γ、Pam3CSK4、Poly(I∶C)、LPS和ODN 2006刺激的MSCs中表达升高(P<0.01)。表达载体包装出的病毒感染后的MSCs中SOCS1蛋白水平提高,流式细胞检测表达(>95%)CD29、CD44、CD73、CD90、CD105、CD166,不表达(<2%)CD34和CD45,在相应诱导剂诱导下可分化为成骨细胞和脂肪细胞。结论多种炎性因子能诱导MSCs内SOCS1表达升高,说明SOCS1可能参与了MSCs的免疫调节功能;成功建立了稳定表达SOCS1的MSCs细胞株。