金黄色葡萄球菌常见大环内酯类耐药基因快速检测和分析

目的利用SYBRGreenI实时荧光定量多重聚合酶链反应(PCR)结合融解曲线分析,对金黄色葡萄球菌(SA)常见大环内酯类耐药基因进行快速检测和分型,结合D-试验及时为临床提供用药信息。方法利用含有ermA、ermB、ermC、msrA及16srDNA引物的SYBRGreenI实时荧光定量多重PCR体系对89株表型大环内酯耐药SADNA进行扩增,结合融解温度曲线分析进行初筛,对具有4种大环内酯类耐药基因的扩增产物进行电泳以确定型别,并对37株红霉素耐药而克林霉素敏感的菌株进行D-试验,确认是否诱导耐药。结果 88株细菌具有耐药基因,5株msrA,31株ermA,11株ermB,36株ermC,3株ermA+ermC,1株ermB+ermC,1株ermA+ermB;D-试验阳性31株,红霉素诱导克林霉素耐药率83.78%(31/37)。结论本地区大环内酯耐药SA以ermC、ermA基因型为主,检出率分别为40.45%和34.83%;红霉素诱导克林霉素耐药在SA中日益严重;应选择D-试验作为大环内酯耐药的常规筛查试验以辅助临床用药。

重症监护病房中多重耐药鲍曼不动杆菌耐药基因型及同源性分析

目的分析22株重症监护病房(ICU)中多重耐药鲍曼不动杆菌耐药表型,耐药基因型及基因同源性。方法菌株鉴定采用Vitek-32细菌鉴定仪,药物敏感试验采用K-B法。三维试验检测ESBLs和AmpC酶,协同试验检测金属酶(MBL)。PCR检测各类β-内酰胺酶类、氨基糖苷类抗菌药耐药基因及喹诺酮类相关gyrA基因。脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行基因同源性分析。结果 (1)对亚胺培南耐药率最低为4.5%,头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低为22.7%,对其他所测抗菌药耐药率均大于90%。(2)产AmpC酶21株占95.5%;产ESBLs和MBL各5株,分别占22.7%。(3)100%携带AmpC酶基因、TEM-1型广谱β-内酰胺酶基因、aacA4氨基糖苷乙酰转移酶基因;aacC1、aadA1型氨基糖苷乙酰转移酶基因各占95.5%;有gyrA型DNA旋转酶基因突变;各1株检测到OXA-23型碳青霉烯酶基因、PER型ESBLs基因和aphA1型氨基糖苷乙酰转移酶基因,分别占4.5%;未检测到SHV型β-内酰胺酶基因、VEB型ESBL基因I、MP型和VIM型金属酶基因、OXA-24型碳青霉烯酶基因。(4)PFGE结果显示20株出现完全相同条带,具有高度同源性,另2株各自为独立株。结论 22株多重耐药鲍曼不动杆菌中存在一个克隆流行株,携带AmpC酶基因、TEM-1型β-内酰胺酶基因及aacA4、aacC1、aadA1型氨基糖苷类修饰酶基因,高产AmpC酶,治疗应首选亚胺培南。

59株铜绿假单胞菌的耐药性分析

铜绿假单胞菌广泛存在于自然环境中，是一种可引起人类各种感染性疾病的条件致病菌，在医院内感染的非发酵菌中占第1或第2的位置。据报道，铜绿假单胞菌性肺炎致死率高于30％，败血症患者的病死率高达80％～90％。为了解基层医院该菌的耐药性特点，笔者对2010年度分离的铜绿假单胞菌进行了统计分析，报道如下。

Th1/Th2型细胞因子平衡与正常妊娠的关系

目的:探讨Th1/Th2型细胞因子平衡与正常妊娠之间的关系。方法:采用酶联免疫吸附方法检测40例非妊娠妇女和42例正常妊娠妇女的血清中Th1型细胞因子(IL-2 I、FN-γ、TNF-α和IL-1β)及Th2型细胞因子(IL-4、IL-6 I、L-10和IL-13)的表达水平。结果:非妊娠组相比,妊娠组血清中IL-2和TNF-α的表达水平明显降低(P值均<0.05)I,L-4和IL-10的表达水平明显升高(P值均<0.05);而两组血清中IFN-γI、L-1βI、L-6和IL-13表达水平的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论:正常妊娠是以分泌Th2型细胞因子为主的,提示Th1/Th2型细胞因子的平衡可能在正常妊娠中发挥重要作用。

先兆流产孕妇Th1/Th2细胞因子平衡状况分析

目的探讨辅助T细胞1(Th1)、辅助T细胞2(Th2)型细胞因子平衡与正常妊娠及先兆流产之间的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测60例先兆流产妇女和42名正常妊娠妇女血清中Th1型细胞因子(IL-2、TNF-α)及Th2型细胞因子(IL-4、IL-10)的表达水平。结果与正常妊娠组相比,先兆流产组血清中IL-2和TNF-α的表达水平明显升高(P均<0.05);而2组之间IL-4和IL-10的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。Th1型细胞因子与Th2型细胞因子平衡向Th1的方向移动。结论 Th1/Th2型细胞因子的病理性失衡可能与先兆流产的发生有一定关系。

人乳头瘤病毒检测在宫颈疾病中的诊断价值

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)检测在宫颈疾病中的诊断意义。方法采用荧光定量PCR法对妇科门诊598例患者进行13种高危型HPV检测,并进行阴道镜、宫颈组织病理活检等检测,分析宫颈疾病的类型、HPV的感染率及两者的关系。结果 598例患者中HPVDNA阳性236例(39.5%),其中通过病理活检证实为慢性炎症88例,宫颈癌及癌前病变148例。结论高危型HPV是诱发宫颈癌的重要因素,根据HPV的检测结果进行病理组织学检查,能够提高宫颈癌病变的早期检出率。

配组筛检红细胞与混合O型红细胞筛检新生儿溶血病患儿不规则抗体效果对比

目的对比分析配组筛检红细胞与混合O型红细胞筛检新生儿溶血病患儿不规则抗体效果。方法选取我院2006年12月至2008年3月诊断为新生儿溶血症的高胆红素血症患儿及其母亲的EDTA.K2抗凝血标本316份,设立观察组和对照组,观察组使用配组筛检红细胞方法,对照组使用混合O型红细胞筛检方法,分别对316份血液样本进行血型鉴定、红细胞分散试验、红细胞直接抗球蛋白试验、血浆及红细胞放散液中抗体的检测及不规则抗体特异性鉴定,对比两组新生儿溶血病患儿不规则抗体的检验结果,记录相关数据进行统计学分析。结果 316例诊断为新生儿溶血症的高胆红素血症患儿的EDTA.K2抗凝血标本中,检出母婴ABO血型不合(ABO系统抗体)124例,为红细胞放散液和(或)新生儿血浆中检出具有致敏性;观察组检出婴儿红细胞放散液及母婴血浆中红细胞的血型不规则抗体8例,其中抗-M有4例抗-c有1例,抗-D有1例,抗-cE有1例,抗-E有1例;对照组检出婴儿红细胞放散液及母婴血浆中红细胞的血型不规则抗体6例,抗-M有2例,抗-c有1例,抗-D有1例,抗-cE有1例,抗-E有1例,两组检验结果存在一定差异(P<0.05),具有统计学意义。结论配组筛检红细胞的方法检验新生儿溶血病患儿不规则抗体效果优于混合O型红细胞筛检,精确率高,可有效预防抗-M的漏检,具有重要的临床诊断价值。

73株大肠埃希菌整合子分布与耐药性关系

目的 分析73株大肠埃希菌整合子分布特征及与耐药性关系.方法 采用聚合酶链反应（PCR）方法检测整合酶基因（intI）;采用微量稀释法测定21种抗生素的敏感性;采用纸片确认法检测ESBLs菌株.结果 73株大肠埃希菌中37株Ⅰ类（51%）,未检出Ⅱ类及Ⅲ类整合酶基因.产ESBLs菌株20株,其中12株为Ⅰ类整合酶基因阳性（60%）;非产ESBLs菌株53株,其中25株为Ⅰ类整合酶基因阳性（47%）.整合酶基因阳性组耐药率明显高于阴性组.结论 Ⅰ类整合子在大肠埃希菌中广泛地存在,是导致多重耐药重要因素之一.

新生儿脐血免疫血清学检验结果与新生儿高胆红素血症发生率关系探讨

目的:探讨脐血免疫血清学检验结果IgG抗-A+B与新生儿高胆红素血症发生率的关系。方法:对392例O型血母亲分娩的A或B型血新生儿进行脐血免疫血清学检验,并按是否存在IgG抗-A+B进行分组,调查其高胆红素血症的发生率。结果:①在抗体释放试验阳性的新生儿中,红细胞凝集的程度与高胆红素发生率有极显著的相关性(P<0.01)。②新生儿血液中存在的IgG抗-A+B与高胆红素血症发生率无显著的相关性(P>0.05),③新生儿血液中存在的游离抗体与高胆红素血症发生率有极显著的相关性(P<0.01)。结论:脐血免疫血清学检验结果对预判新生儿发生高胆红素血症有一定的临床意义。

地屈孕酮对先兆流产患者Th1/Th2型细胞因子平衡的影响

目的探讨孕激素地屈孕酮对先兆流产患者Th1/Th2型细胞因子平衡的影响,分析以免疫调节治疗先兆流产的机制。方法采用酶联免疫吸附方法检测42例正常妊娠妇女和60例先兆流产妇女使用地屈孕酮治疗前后的血清中Th1型细胞因子(IL-2和TNF-α)及Th2型细胞因子(IL-4和IL-10)的表达水平。结果先兆流产组治疗后血清中IL-2和TNF-α的表达水平与治疗前相比明显降低(P值均<0.05),与正常妊娠组相比差异无统计学意义(P值均>0.05);而先兆流产组血清中IL-4和IL-10的表达水平在治疗前后差异无统计学意义(P值均>0.05),治疗后略有上升,达到和正常妊娠组相当的水平(P值均>0.05)。结论孕激素治疗先兆流产的机制可能在于促进Th2型细胞因子的分泌,纠正Th1/Th2型细胞因子的病理偏移,使其向着正常妊娠时的平衡移动,即由Th1向Th2的移动。

MRFQ SYBR Green I-PCR结合融解曲线快速检测产ESBLs菌耐药基因

目的探讨SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法快速检测常见超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因的可行性。方法选取经测序验证携带有tem、shv、ctx-m-1组、ctx-m-9组耐药基因的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作为阳性菌株,建立细菌耐药基因SYBR Green I实时荧光定量多重PCR检测体系,这四种耐药基因的扩增产物片段长度和融解温度(Tm值)都不同,可通过结合融解曲线分析加以区别。用此体系检测110株大肠埃希菌和94株肺炎克雷伯菌,根据特异性Tm值的有无和差别判断是否携带有耐药基因及携带耐药基因型别,结果与耐药表型、琼脂糖电泳、测序结果对照。结果经SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析,分别有47株(42.7%)大肠埃希菌和34株(36.2%)肺炎克雷伯菌携带有这四种常见的ESBLs耐药基因,与表型确证实验和电泳结果比较达到100%的一致性;根据Tm值的不同,对耐药基因进行鉴别,携带单个耐药基因菌株的检测与电泳结果和测序结果比较达到100%的一致性;对携带多个耐药基因菌株的检测不能达到较好的分辨性。结论SYBR Green I实时荧光定量多重PCR结合融解曲线分析方法可以快速筛查常见超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因,对携带单个耐药基因的细菌的基因型能进行准确鉴定。这对指导临床医生合理使用抗生素进行临床治疗和对耐药细菌的流行病学监测具有重要价值。

73株大肠埃希菌耐药表型分析

目的分析临床分离的大肠埃希菌的耐药性、产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)阳性率及耐药性之间的关系。方法用微量肉汤稀释法检测2009年10月至2010年3月分离的73株大肠埃希菌的耐药性,用酶抑制剂增强实验纸片法检测产ESBLs菌株。结果 73株大肠埃希菌产ESBLs20株,阳性率为27.4%。产ESBLs菌株对青霉素类和第一、第二代头孢菌素耐药率>95%,对第三代头孢菌素中头孢哌酮、头孢噻肟和头孢曲松耐药率均为95%,但头孢他定耐药率为20%。对酶抑制剂哌拉西林/三唑巴坦、替卡西林/克拉维酸和头孢哌酮/舒巴坦的耐药率<30%,耐药率低于30%的还有头孢西丁、阿米卡星,未检测到亚胺培南耐药株。非产ESBLs菌株耐药率明显低于产ESBLs菌株。结论本医院分离的产ESBLs大肠埃希菌的比例低于国内其他地区,具有显著的耐药性。

细胞因子和IgE检测在支气管哮喘诊断中的价值

目的探讨支气管哮喘患者血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-16(IL-16)和免疫球蛋白IgE的动态变化和检测的临床意义。方法收集30例支气管哮喘发作期患者(哮喘组)和30例正常对照者(对照组)的血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中IL-6、IL-10、IL-16和总IgE。结果与正常对照组比较,哮喘组血清IL-6、IL-16和总IgE水平明显增高,相比较有显著性差异(P<0.05);而IL-10水平明显降低,相比较有显著性差异(P<0.05);哮喘组总IgE与IL-6、IL-16之间呈正相关(r=0.6871,r=0.8633,P<0.01);与IL-10之间存在负相关(r=-0.4782,P<0.01)。结论IL-6、IL-10、IL-16和总IgE与哮喘发病机制有关,动态测定这些指标有助于病情评估。