IL-12诱导类风湿关节炎和骨关节炎外周血T淋巴细胞STAT4活化状态的比较

目的:比较类风湿关节炎和骨关节炎外周血T淋巴细胞在IL12作用下诱导STAT4酪氨酸磷酸化水平的差异。方法:2007年5月至2009年8月分离提纯20例类风湿关节炎患者[均为女性;年龄28～55岁,平均(45.0±13.0)岁]和20例骨关节炎患者[均为女性;年龄55～75岁,平均(67.0±9.6)岁]的外周血T淋巴细胞,流式细胞仪进行T淋巴细胞纯度鉴定。用50ng/mlIL12分别作用0、10、30、60min后,提取蛋白进行浓度测量,然后进行WesternBlot检测,经蛋白条带灰度扫描,比较IL12作用各时间点类风湿关节炎和骨关节炎T淋巴细胞STAT4酪氨酸磷酸化水平的差异。结果:经过对外周血单核细胞的分离纯化,T细胞纯度达到91%以上;IL12在对骨关节炎和类风湿关节炎T细胞作用30min后达到活化峰值,在各个时间点(10、30、60min)类风湿关节炎外周血T淋巴细胞活化水平均高于骨关节炎。结论:类风湿关节炎外周血T淋巴细胞在IL12作用下STAT4异常活化。

兔骨髓间充质干细胞体外培养的生物学特性及多潜能分化研究

目的:研究兔骨髓间充质干细胞体外培养的生物学特性,建立一种稳定的细胞分化体系。方法:取3月龄大耳白兔骨髓3ml^4ml,采用贴壁法获取骨髓间质干细胞,取2代细胞按1×104个/孔接种于24孔培养板内,绘制生长曲线。将传代2代细胞按3×103个.cm-2,接种于6孔板内,并加入条件培养液(地塞米松10-7mol.L-1,β-甘油磷酸钠10 ml.L-1,50 mg.L-1抗环血酸),ALP-钙化染色鉴定,将传代2代细胞按3×105个.cm-2接种于6孔板内,并加入条件培养液(TGF-β15 ng.ml-1,地塞米松10-7mol.L-1或多聚赖氨酸10μg.ml-1),阿新兰染色鉴定。结果:原代生长的细胞呈梭形,7d后形成多个集落,并逐渐溶合或片铺满瓶底,随着传代次数的增加,细胞增殖能力增强。骨髓间质干细胞在不同条件培养液下可向成骨细胞或软骨细胞分化,ALP-钙染色及阿新兰染色阳性。结论:在本培养体系下,骨髓间质干细胞生长良好,可分化为成骨细胞及软骨细胞,具有多向分化潜能。

TGF-β_1在骨髓间质细胞分化中的作用及与纤维连接蛋白表达的相关研究

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）在骨髓间质细胞分化中的作用及与纤维连接蛋白在诱导分化中表达的量效关系。方法抽取Wister大鼠骨髓于DMEM培养液中单层培养，扩增。用2，3传代细胞按一定比例种植于24孔板内，加入TGF-β1 1，5，10ng／mL，分别于不同时间点取材固定，用于甲苯胺兰组织学染色及抗纤维连接蛋白抗体免疫组化染色。用不同剂量的纤维连接蛋白抗体加入诱导体系中观察细胞的聚集变化。结果传代的骨髓间质细胞在TGF-β1的作用下于第4天产生形态变化，由梭型变为圆形，甲苯胺兰染色呈阳性，TGF-β1为5ng／mL时效果显著；纤维连接蛋白的表达主要以48～72h明显，当加入其抗体时，细胞结合逐渐松散，当剂量为200μL／孔时，不再发生细胞聚集现象。结论TGF-β1在诱导骨髓间质细胞转化中发挥重要作用，其最佳剂量为5ng／mL，同时它可促进纤维连接蛋白的合成分泌，二者呈正相关。本研究结果为细胞外基质蛋白纤维连接蛋白可能参与TGF-β1的信号传导通路提供了有力依据。

发生于股骨干中段骨母细胞型骨肉瘤1例

病例介绍患者，文某某，女，39岁。因左股部渐进性痛3个月于2007年10月24日入院。查体：左下肢跛行。左股部皮肤无红热，中段偏内侧深触痛明显，并可触及一硬性肿物。腹股沟淋巴结无肿大。左髋膝关节活动正常，远端运动感觉正常。化验：白细胞计数正常，血沉：23，钙磷正常，体温正常。