胚胎不同发育阶段人类皮肤及附属器官汗腺的基因表达

背景:关于汗腺的发生与发育过程及汗腺损伤与再生之间的联系尚缺乏基因水平的证据,故各种原因所致的皮肤损伤都不能达到解剖结构与生理功能的完全修复。目的:观察胚胎不同发育阶段皮肤组织的形态结构及皮肤附属器汗腺的发生和发育规律,寻找在汗腺发育中起重要作用的相关基因。方法:13例胎龄为12-36周终止妊娠的胎儿,由深圳市第二人民医院妇产科严格遵循伦理原则、征得家属同意并签署合同书后提供。苏木精-伊红染色和ABC免疫组化法观察不同发育阶段人类胎儿皮肤组织及附属汗腺的结构和特征,采用RT-PCR方法分析生长发育过程中人类胎儿皮肤及汗腺附属器官相关基因的表达。结果与结论:①不同胎龄的人类胎儿皮肤组织结构呈现规律性的变化,可大致划分为3个发育阶段:其中汗腺形成初期(胚芽或原基期)(E12-15周)、汗腺形成中期(E16-24周),汗腺成熟期(E25+-36周)。②胎儿皮肤组织内的汗腺细胞中表达角蛋白7、角蛋白8、角蛋白18和癌胚抗原生物分子标记,而在真皮层和表皮层的其他细胞呈阴性反应,角蛋白19不是表皮干细胞的特异性标记物。③表皮生长因子及其受体积极地参与了皮肤及汗腺的形态发生过程,在皮肤及汗腺的功能维持中起着重要的作用。

Wnt-1基因对人表皮干细胞的分化与增殖的影响研究

目的探讨Wnt-1基因对人表皮干细胞分化与增殖的影响。方法将Wnt-1基因用重组腺病毒基因导入技术导入人表皮干细胞内,在证实Wnt-1基因在人表皮干细胞中导入成功后,检测人表皮干细胞的增殖能力、标记性分子、基质金属蛋白MMP-2、MMP-7浓度及细胞内Ca2+浓度等指标的变化。结果分离获取的人表皮干细胞在接种后第3天进入快速生长期,第7天时到达平台期;Wnt-1基因导入人表皮干细胞后,可观察到绿色荧光蛋白的表达,RT-PCR检测到了Wnt-1mRNA的存在,台盼兰excell系统检测发现人表皮干细胞直径无明显变化,而细胞增殖则明显加强;培养基中的MMP-2的浓度由感染前(-21.33±3.34)增加到感染后的(812.33±41.26)、MMP-7的浓度均值由感染前(17.33±2.31)增加到感染后的(1126.44±13.56),差异均有统计学意义(P<0.01);人表皮干细胞内Ca2+浓度明显升高,作为上皮终末分化标志的K10表达变为阳性;在汗腺分泌部表达的K18表达增强;作为干细胞和腺上皮细胞共同标记的K19的阳性明显减弱。结论导入Wnt-1基因后,人表皮干细胞增殖能力明显增强,细胞直径则没有明显变化;人表皮干细胞培养基中NPVIP-2和MMP-7的浓度均显著增高;Wnt-1的导入能够诱使人表皮干细胞内Ca2+浓度升高;Wnt-1基因具有诱使人表皮干细胞向腺样上皮细胞分化的倾向。