K83A变异MxA蛋白抑制VSV复制的体外研究

目的研究K83A变异对MxA蛋白抑制VSV复制活性的影响。方法将野生型和K83A变异MxA蛋白载体pcDNA3.1-MxA(WT和K83A)分别瞬时转染Wish细胞,24h后VSV感染细胞,感染48h后MTT检测各组细胞增殖;另取Wish细胞转染MxA载体和对照DNA,24h后加入VSV,感染24h后收集细胞RT-PCR检测VSVmRNA水平;Western blot检测各组MxA蛋白表达水平。结果野生型和K83A变异MxA蛋白均在Wish细胞有较好表达;MTT检测结果提示K83A组细胞增殖数明显低于WT组(P<0.01),RT-PCR结果显示K83A组VSVmRNA水平明显高于WT组(P<0.01),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论K83A变异MxA蛋白使MxA蛋白失去了抑制VSV复制的活性。

T103A变异MxA蛋白抑制水泡性口膜炎病毒复制的体外研究

目的研究T103A变异MxA蛋白抑制水疱性口膜炎病毒(VSV)复制活性。方法将野生型、T103A变异MxA蛋白表达载体和对照质粒分别瞬时转染Wish细胞,24h后VSV感染细胞,48h后用MTT法检测各组细胞增殖;另取Wish细胞转染上述3种质粒,转染24h加入VSV感染细胞,24h后收集细胞采用RT-PCR检测VSV mRNA水平;Western blot检测各组MxA蛋白表达。结果野生型、T103A变异MxA蛋白均在Wish细胞有较好表达;MTT检测结果提示T103A变异组细胞增殖数显著低于野生型组(P<0.01);RT-PCR结果显示T103A变异组VSVmRNA水平显著高于野生型组(P<0.01),但与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论T103A变异MxA蛋白失去了抑制VSV复制活性。

L612K变异MxA蛋白体外抑制水泡性口膜炎病毒复制的研究

目的研究L612K变异MxA蛋白抑制水泡性口膜炎病毒(VSV)复制活性。方法将野生型MxA蛋白重组表达载体pcDNA3.1-MxA(WT)和L612K变异MxA蛋白载体pcDNA3.1-MxA(L612K)分别瞬时转染Wish细胞,24h后VSV感染细胞,感染后48hMTT检测各组细胞增殖数;另取Wish细胞转染MxA载体和对照DNA,24h后加入VSV,感染24h后收集细胞,RT-PCR检测VSV mRNA水平,Western blot检测MxA蛋白的表达水平。结果野生型和L612K变异MxA蛋白均在Wish细胞有较好表达;MTT检测L612K变异组细胞增殖数明显低于野生型(t=1.13,P<0.01),RT-PCR检测L612K变异组VSV mRNA水平明显高于野生型组(t=0.13,P<0.01)。结论L612K变异可能使MxA蛋白降低了对VSV的抑制活性。