宫颈细胞系化学转染与电穿孔转染效率的比较与优化

目的定量比较4种化学转染试剂在五株常用的宫颈(癌)细胞系中的DNA转染效率,以助于针对不同细胞系选择合适的转染试剂;同时探索电穿孔转染法在难转细胞系Ect1/E6E7、CaSki中的应用,选择最佳转染条件。方法以pcDNA3.1-EGFP为报告载体,采用FuGENE HD、jetPRIME、Lipofectamine 2000和Lipofectamine 3000四种转染试剂分别转染常用宫颈(癌)细胞系HeLa、SiHa、CaSki、C33A和Ect1/E6E7,转染24h后用倒置荧光显微镜观察记录,并采用Cellometer K2对转染效率进行定量分析。针对化学转染法难转细胞系Ect1/E6E7、CaSki,采用电穿孔转染法进行转染,优化转染条件,并对转染效率进行定量比较。结果jetPRIME和Lipofectamine 3000转染试剂在HeLa细胞中的转染效果很好,而对SiHa、C33A细胞转染效率相对较低,在CaSki、E6E7细胞中的转染效果很差。FuGENE HD转染试剂除了对HeLa、SiHa细胞转染效果较好之外,在其他3株细胞中的转染效果均不理想。Lipofectamine 2000在5株细胞中的转染效果也不理想。在穿孔电压170V、脉冲波长7ms、脉冲间隙10ms和驱动电压20V的条件下电穿孔转染法在Ect1/E6E7、CaSki细胞中的转染效率最佳且均高于化学转染法。结论针对不同的宫颈(癌)细胞系选择合适的转染方式和转染试剂可达到更高的转染效率。相对电转染,化学转染细胞存活率高,电转染更适用于难转细胞的稳定转染。

发生盆腔淋巴结转移的宫颈鳞癌组织微小RNA表达谱分析

目的:探讨发生盆腔淋巴结转移的宫颈鳞癌组织微小RNA(miRNA)表达谱特征。方法:采用miRNA 4.0芯片检测宫颈鳞癌淋巴结转移(n=8)和未转移患者(n=16)组织中表达的miRNAs。结果:两组间有5个miRNAs差异表达具有统计学意义(P<0.05),且均表现为上调,其中miRNA-8073和miRNA-5585-3p在以往宫颈癌相关miRNA研究中未见报道。结论:本研究结果显示miRNA-8073和miRNA-5585-3p与宫颈鳞癌盆腔淋巴结的转移有关,可能成为宫颈癌淋巴结转移的标志物或治疗靶点。