恶性疟原虫FCC-1/HN株环子孢子蛋白基因分枝杆菌——大肠杆菌穿梭表达重组质粒的构建及序列测定

本文对恶性疟原虫环子孢子蛋白 ( circum sporozoite protein,CSP)基因片段进行克隆和序列测定。根据恶性疟原虫 837株基因编码序列设计合成一对引物 ,采用 PCR技术从恶性疟原虫 FCC- 1/HN株基因组DNA中特异扩增 CSP基因片段的 区、中央重复区、重复区后可变区和 区 ;经纯化的扩增产物用 Bam H 和 Kpn 双酶切后 ,定向克隆入大肠杆菌——分枝杆菌穿梭表达质粒 ,转化感受态大肠杆菌 DH 5α,重组克隆经抗性筛选和快速凝胶电泳鉴定 ,再经 PCR和酶切鉴定 ,并对重组子进行序列测定。结果表明从恶性疟原虫 FCC- 1/HN株基因组 DNA中可特异扩增出约 1171bp的基因片段 ,阳性重组质粒经双酶切和 PCR鉴定与预期的结果一致 ,序列测定表明所克隆的基因和编码环子孢子抗原的基因片段相符。

恶性疟原虫DNA疫苗在小鼠体内组织分布和安全性的初步研究

目的 探讨疟疾DNA疫苗在小鼠体内的组织分布 ,并对其安全性进行观察。方法 将重组质粒pBK -CSP经肌肉途径免疫BALB/c小鼠 ,分别在 4周和 8周后剖杀动物并摘取各种组织 ,抽提全组织DNA进行PCR扩增后经琼脂糖凝胶电泳分析 ,并对DNA疫苗的安全性进行观察。结果 免疫 4周和 8周后 ,仅有DNA疫苗接种位点的肌肉组织检测到CSP基因 ,而 10 0 μg的质粒DNA并未产生明显的毒副作用。 结论 疟疾DNA疫苗接种 4周后 ,质粒DNA仅分布于接种部位 ,并可持续至 8周以上 ,而未发现毒副作用。

恶性疟原虫FCC-1/HN株环子孢子蛋白基因片段的亚克隆及表达

目的 构建恶性疟原虫FCC 1/HN株CSP基因的重组真核表达质粒 pBK CSP ,在大肠杆菌中进行表达 ,并进行鉴定。方法 采用限制性内切酶法从重组的大肠杆菌 分枝杆菌穿梭质粒pBCG5 .6 /CSP中分离出经过测序鉴定的CSP基因片段 ,将其亚克隆于 pBK CMV真核表达载体 ,构建重组真核表达质粒 pBK CSP。经IPTG诱导 ,重组质粒在大肠杆菌DH5α中进行表达 ,并进行SDS PAGE及免疫印迹分析。结果 从 pBCG5 .6 /CSP中分离出CSP基因片段 ,成功构建 pBK CSP重组质粒 ;SDS PAGE及免疫印迹分析结果显示特异性蛋白条带的相对分子质量约为 42 0 0 0。结论 从pBCG5 .6 /CSP中成功分离出CSP基因片段 ,并成功构建 pBK CSP重组质粒 ,诱导表达CSP非融合蛋白 。