应用连接介导PCR法于线粒体DNA的测序

目的 简化DNA测序方法 ,优化条件 ,以适用于线粒体DNA的测序。方法 应用MaxamGilbert化学断裂反应和连接介导PCR(LigationMediatedPCR ,LMPCR)来测定线粒体DNA的序列。结果 读取的 14 0bp的核苷酸序列 ,输入基因库 ,确定为线粒体DNA重链 80 51～ 8190片段的序列 ,符合率为 70 7% ( 99/14 0 )。结论 该方法改进的成功 ,对进一步进行线粒体DNA氧化损伤图谱分析等研究 。

铅镉影响肾上腺皮质细胞分泌功能的机制与途径

目的 了解铅、镉对肾上腺皮质细胞分泌功能的直接毒作用及可能的介导途径。方法原代分离培养的豚鼠肾上腺皮质细胞 ,分别以 0 0 0、6 2 5、12 5 0、2 5 0 0、5 0 0 0和 10 0 0 0 μmol/L氯化镉(CdCl2 )和 0 0 0、12 5 0、2 5 0 0、5 0 0 0和 10 0 0 0 μmol/L醋酸铅 (PbAc)处理细胞 ,在不同孵育时间 (30～2 40min)分别测定培养液皮质醇水平 ,并观察环 磷酸腺苷 (cAMP)与皮质醇分泌的相关性。结果 6 2 5～ 10 0 0 0 μmol/LCdCl2 引起细胞皮质醇分泌水平降低 ,呈现明显的剂量 效应关系 ,且与时间具有协同抑制效应。 12 5 0～ 10 0 0 0 μmol/LPbAc对皮质醇分泌的毒效应呈低剂量轻度抑制、高剂量回复正常的双相反应 ,表现为皮质醇水平在低剂量降低 (12 5 0和 2 5 0 0 μmol/L) ,而高剂量略升高 (10 0 0 0μmol/L) ,且随时间延长其效应愈为明显。cAMP随CdCl2 剂量增加而降低 ,具有剂量 效应关系 ,其变化与CdCl2 抑制皮质醇分泌具有相关性 ;而PbAc对cAMP的作用则表现为低剂量轻微抑制、高剂量升高 ,且与皮质醇分泌的变化相似。结论 在促肾上腺皮质激素存在下 ,CdCl2 可直接抑制皮质醇的合成分泌 ,PbAc对细胞分泌皮质醇功能的毒效应呈低剂量轻微抑制 ,高剂量回复正常 ,甚至诱导的双?

甲基汞对大脑皮层神经细胞内游离钙的影响

目的 研究甲基汞对急性分离的大脑皮层神经细胞内游离Ca2 + 水平的影响。方法 采用钙离子指示剂Fura 2双波长荧光检测技术。结果 (0 10～ 5 0 0 )× 10 -6mol/L甲基汞可使大脑皮层神经细胞内游离Ca2 + 水平显著升高 ,且有剂量 效应关系。甲基汞升高神经细胞内游离Ca2 + 的作用与胞外Ca2 + 大量内流和胞内储Ca2 + 释放有关 ,且以胞外Ca2 + 内流为主。胞外Ca2 + 内流与N 甲基 D 天冬氨酸受体门控Ca2 + 通道以及电压门控Ca2 + 通道有关 ,而与电压依赖性Na+ 通道无关。结论 甲基汞可使神经细胞内游离Ca2 + 浓度异常升高 ,且与Ca2 + 通道有密切关系。