双菌种混合发酵制备富含γ-氨基丁酸酸奶工艺优化

为提升富含γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)酸奶中GABA的含量与品质,以脱脂复原乳液为主要原料,以课题组前期筛选的在乳基底物中具备高产GABA潜力的乳酸乳球菌乳酸亚种为发酵剂,以活菌数、GABA产量、L-谷氨酸钠(L-Glu-Na)残留和感官评定等为评价指标,对富含GABA酸奶的发酵工艺进行优化。经单因素实验和均匀试验,推导出双菌种混合发酵脱脂复原乳的模型方程,并确定发酵工艺最优条件。结果表明,复配菌种为干酪乳杆菌;乳酸乳球菌乳酸亚种和干酪乳杆菌复配比例为1:3,发酵时间为48 h,发酵温度为32℃,L-Glu-Na添加量为8 g/L;在此最优发酵工艺最优条件下,GABA产量为4.10±0.10 g/L,是优化前的3.78倍。此外酸奶中活菌数为3.03×10^(10)±1.75×10^(10) CFU/g,酸度值为129.67±2.08°T,L-Glu-Na残留为0.11±0.01 g/L,各项指标满足GB 19302-2010《食品安全国家标准发酵乳》中要求,综合感官评分78.42±4.63分。该工艺有望为更多富含GABA发酵乳制品的开发奠定基础。

酶法水解花生蛋白制备短肽及其降血压活性试验

对酶法水解花生蛋白制备高水解度短肽的工艺进行研究。选用碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶分别对单酶水解工艺、复合酶水解工艺及前处理条件进行考察。研究发现：单酶水解优化工艺虽可达到较高水解度（27.85%、23.40%）,但水解时间长（386.25、382.68 min）、底物质量浓度低（1.09、1.07 g/100 mL）;所考察的前处理技术中除亚硫酸钠前处理外,热处理、超声处理条件对水解度无显著影响。研究得到理想的酶法水解条件为：以花生蛋白（质量浓度为5 g/100 mL）为原料,先用亚硫酸钠（质量浓度为0.07 g/100 mL）进行前处理;随后进行复合酶酶法水解,调整料液体系至pH 8.0、温度50℃,按加酶量为7 429.79 U/g加入碱性蛋白酶,水解120 min,随后将料液体系调至pH 6.8、温度45℃,按加酶量为7 642.50 U/g加入菠萝蛋白酶,水解120 min,测得蛋白质水解度为（33.21±0.70）%。通过对原发性高血压大鼠的作用试验表明,灌胃剂量在1 000-1500 mg/kg（按体重计）时,给药4 h后,大鼠收缩压显著降低,降压效果可持续8 h,表明酶法水解产物（花生短肽）有明显的降血压效果。

膜技术分离纯化花生蛋白酶解液制备活性短肽

对膜技术在花生蛋白酶解液分离纯化应用的工艺进行了研究。考察了超滤膜截留相对分子质量（1、3、5 kDa）、超滤压力（0.086、0.121、0.157、0.193 MPa）、超滤温度（30、35、40、45℃）、超滤加水量（0.5-5.5倍）对超滤效果的影响,以及考察加水次数（1-12次）对纳滤脱盐效果的影响。结果表明：超滤操作的最适工艺为用截留相对分子质量为1 kDa的超滤膜,在超滤压力0.193MPa、超滤温度45℃的条件下进行恒体积超滤,加水量以加入3倍水为最适,此时短肽透过率可达65.01%,透过液中短肽的相对分子质量主要分布在283-402 Da之间;纳滤操作在纳滤温度为常温（20℃）、纳滤压力为1.5 MPa的条件下进行,采用间歇式恒容纳滤方式,最适加水次数为10次,此时Na＋脱除率为（69.78±0.69）%,短肽损失率仅为2.00%。采用最适的先超滤、后纳滤联用工艺制备的花生短肽液经冻干后,冻干粉对ACE的IC50为0.78 mg/mL,体外抗氧化活性为ORAC值（以Trolox计）（2 359.50±40.43）μmol/g,表明短肽同时具有较强的ACE抑制活性和体外抗氧化活性。

动态超高压微射流均质对大米蛋白功能特性的影响

以大米蛋白为原料，在不同料液比（1：100—12：100）和不同pH（2—12）的条件下，采用动态超高压微射流进行均质处理，研究不同均质压力（40～200MPa）和均质次数（1～5次）对大米蛋白功能特性（溶解性、乳化性及稳定性、起泡性及稳定性和粘度）的影响。结果表明：不同料液比和不同pH的大米蛋白溶液经动态超高压微射流均质后其溶解性、起泡性、粘度均有显著的提高，而不同料液比和不同pH的大米蛋白溶液的起泡稳定性均无显著的提高。不同pH的固定料液比（3：100）大米蛋白溶液经动态超高压微射流均质后其乳化性及稳定性有显著的改善，而不同料液比（尤其是料液比较高时）的固定pH（pH=7）大米蛋白溶液的乳化性及稳定性无显著性改善。均质压力对固定料液比（3：100）和pH（pH：7）大米蛋白溶液的溶解性、乳化性及稳定性、起泡性、粘度的提高影响显著，而对其起泡稳定性无显著性作用。均质次数对固定料液比（3：100）和pH（pH=7）大米蛋白溶液的溶解性、乳化性稳定性、起泡性及稳定性、粘度的提高影响显著，而对其乳化性无显著性作用（1-3次），甚至在均质次数较多（4～5次）时有负面性影响。

高效液相色谱法测定玉米中的游离酚和结合酚

建立了高效液相色谱法同时测定玉米中游离酚和结合酚的检测方法,包括原儿茶酸、龙胆酸、对羟基苯甲酸、绿原酸、香草酸、咖啡酸、丁香酸、表儿茶素、香豆酸、阿魏酸、芥子酸、芦丁、橙皮素、槲皮素。有机溶剂提取玉米中的游离酚,碱法提取玉米中的结合酚,以ZORBAX Eclipse Plus Phenyl-Hexyl（4.6 mm×250mm,5μm）为分析柱,乙腈（A）和含0.4%乙酸的超纯水（B）为流动相梯度洗脱,采用二极管阵列检测器280 nm波长检测。14种酚类化合物在一定浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.999 4-0.999 9,加标回收率为90%-108%,相对标准偏差为0.03%-3.59%。试验结果表明,该方法能用来同时测定玉米中的游离酚和结合酚。

大孔吸附树脂纯化重组降血压肽VLPVPR的研究

考察大孔吸附树脂(DA201-CⅡ,D4020和HPD100B)对重组降血压肽VLPVPR的吸附性能及纯化效果,确立纯化VLPVPR的优化工艺。通过大孔树脂静态吸附解吸及动态吸附解吸实验,结果表明DA201-CⅡ最适于VLPVPR的纯化。最优纯化工艺为:样品pH9.8,上样流速为2mL/min,上样量为100mL,70%乙醇洗脱75mL,洗脱流速为2.7mL/min。该条件下VLPVPR的回收率为96.9%,纯度为27.4%。

铁观音多酚提取物对小鼠肝Cyp450s的影响

为探究铁观音多酚提取物对小鼠肝Cyp450s的影响,采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法和Western blot法评价铁观音多酚提取物对小鼠肝Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2c37 3种酶的m RNA和蛋白表达。结果显示,与空白对照组相比,低剂量铁观音多酚提取物(150 mg/(kg·d))能显著诱导Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2c37的m RNA表达(P<0.05),同时显著诱导Cyp2d22蛋白的表达,但对Cyp3a11蛋白表达无明显作用,对Cyp2c37蛋白表达呈现显著抑制作用;中剂量(300 mg/(kg·d))能显著抑制Cyp3a11、Cyp2c37的m RNA和蛋白表达(P<0.05),而对Cyp2d22的mRNA和蛋白表达无显著影响;高剂量(600 mg/(kg·d))对3种酶的m RNA表达无显著影响,但对3种酶的蛋白表达呈显著抑制作用(P<0.05)。结果表明铁观音多酚提取物能够影响小鼠肝Cyp3a11、Cyp2d22和Cyp2c37的表达,揭示了铁观音多酚提取物与药物合用时产生的代谢性药物相互作用。

玉米醇溶蛋白高水解度酶解制备短肽

以高水解度水解蛋白为目标,对酶解玉米醇溶蛋白制备短肽的工艺进行了研究。选择了碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶,采用均匀试验设计法对三种酶的酶解工艺进行了考察,同时还对复合酶水解、理化前处理技术的作用进行了探讨。实验结果对三种酶的酶解工艺条件进行了优化;明确了三种酶复合水解时,得到的水解度均显著高于单酶水解结果,且其中以"碱性蛋白酶+中性蛋白酶+胃蛋白酶"顺序的复合酶组合得到的水解度最高达(29.95±0.87)%;考察的加热、添加亚硫酸钠、超声等三种理化前处理技术,对玉米醇溶蛋白水解度没有明显的影响。总而言之,应用合适的蛋白酶及酶解方式,玉米醇溶蛋白水解制备短肽,可以达到较高的水解度。

黄山毛峰茶多酚提取物对肝药酶Cyp3a11的调控作用

以黄山毛峰为原料,采用实时荧光定量反转录聚合酶链式反应法和蛋白免疫印迹法研究其茶多酚提取物对肝药酶Cyp3a11及孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)的mRNA和蛋白表达影响,在此基础上采用瞬时共转染报告基因技术进一步验证是否通过PXR实现对Cyp3a11表达调控。结果表明:黄山毛峰茶多酚提取物各剂量组(75、150、300 mg/(kg·d))均能显著调控小鼠肝Cyp3a11、PXR m RNA及其蛋白表达;报告基因实验结果显示,100、200、300μg/m L黄山毛峰茶多酚提取物经PXR通路使细胞色素P4503A4基因荧光素酶活力分别增加(3.86±0.05)、(4.82±0.72)、(5.38±0.11)倍。研究表明黄山毛峰茶多酚提取物可激活PXR通路调控肝药酶Cyp3a11的表达。

凝胶层析和离子交换层析结合法纯化重组降血压肽VLPVPR

为了提高VLPVPR的纯度,采用凝胶层析结合离子交换层析的方法对VLPVPR进行纯化。先用Sephadex G-10凝胶对VLPVPR溶液脱盐,再考察离子交换剂(SP Sepharose Fast Flow和Q Sepharose Fast Flow)对重组降血压肽VLPVPR的纯化效果,确立纯化VLPVPR的优化工艺。实验结果表明SP Sepharose Fast Flow不适于VLPVPR的纯化。采用Q Sepharose Fast Flow的纯化工艺为:上样量为柱床体积的10%,用10mmol/L pH9.0的CHES缓冲液洗脱,流速为1mL/min。VLPVPR回收率为93.8%,纯度达到47.2%。采用Q Sepharose Fast Flow纯化提高了VLPVPR的纯度。

大孔树脂纯化血管紧张素酶抑制肽VLPVPR的工艺优化

考察大孔树脂(AB8,D101,DM130,HPD100B,HPD826)对血管紧张素酶抑制肽VLPVPR的吸附性能及纯化效果,确立纯化VLPVPR的较优工艺。结果表明,HPD100B最适于VLPVPR的纯化。最优纯化工艺为:温度20℃,pH9.8,上样流速为3mL/(cm2·min),上样量达到180mL,洗脱液乙醇溶液浓度为60%,洗脱流速为0.25mL/(cm2·min),洗脱体积为45mL。此条件下,VLPVPR的解吸率达93.1%,纯度为28.8%,血管紧张素酶抑制率IC50为4.1μmol/L。

不同提取方法对海蒿子多糖性质的影响研究

海蒿子多糖是存在于海洋褐藻植物海蒿子细胞内和细胞间的一种天然大分子物质,具有多种生物活性。本研究比较了传统水提法、柠檬酸提取法、超声法、超声波辅助水提法、超声波辅助柠檬酸提取法五种方法提取海蒿子多糖的性质区别。结果表明采用柠檬酸法提取海蒿子多糖得率最高,可达5.31%,是传统水提法的1.8倍。并且,不同方法提取的海蒿子多糖分子量大小存在差异性,其中传统水提法提取多糖的分子量为739.663ku,约是超声法提取多糖分子量大小的19倍。通过不同抗氧化能力评价指标的测定表明传统水提法提取多糖的DPPH·清除能力在浓度0.5mg/m L时为54.77%,ABTS+清除能力在浓度0.25mg/m L时为74.59%,还原力在浓度0.3mg/m L时为1.381,氧自由基吸收能力(ORAC)值可达5404.90μmol Trolox/g。且硫酸基含量最高,为12.28%,具有较好的抗氧化活性。因此,采用传统水提法工艺来提取多糖更利于维持海蒿子多糖的功能活性,便于进一步的深入研究。

龙井茶多酚提取物对小鼠肝Cyp450酶表达的影响

目的观察不同剂量和不同给药时长龙井茶多酚提取物对小鼠肝Cyp450酶的影响。方法取40只小鼠,随机分为空白组、75 mg/kg组、150 mg/kg组、300 mg/kg组各10只,龙井茶多酚提取物组给予75、150、300 mg/(kg·d)灌胃,空白组给予超纯水0.1 mL/(10 g·BW)灌胃,各组连续灌胃7 d。取另外40只小鼠,随机分为对照组、7 d组、14 d组、28 d组各10只,7 d组、14 d组、28 d组以龙井茶多酚提取物150 mg/(kg·d)分别灌胃7、14、28 d,对照组给予超纯水0.1 mL/(10 g·BW)灌胃28 d。采用real-time PCR法检测各组肝脏Cyp3a11、Cyp 1a2、Cyp2c37、Cyp2d22 mRNA表达,采用Western blotting法检测各组肝脏Cyp3a11、Cyp1a2、Cyp2c37、Cyp2d22蛋白表达。结果相对于空白组,不同剂量的龙井茶多酚提取物各组Cyp3a11、Cyp2d22、Cyp2c37 mRNA及蛋白表达均有不同程度降低,Cyp1a2 mRNA及蛋白表达均增高(P均<0.05)。相对于对照组,不同给药时长的龙井茶多酚提取物对Cyp3a11和Cyp2d22 mRNA及蛋白表达先降低、再增高,Cyp1a2 mRNA及蛋白表达增高,对Cyp2c37 mRNA及蛋白表达降低(P均<0.05)。结论龙井茶多酚能够显著影响小鼠肝Cyp450s酶多种亚型的表达,且剂量和给药时长对Cyp450底物药物的代谢过程产生不同的影响。

龙井茶多酚提取物对C57BL/6J小鼠肝脏氧化应激和代谢酶的影响

探究龙井茶多酚提取物对C57BL/6J小鼠肝脏氧化应激水平的影响,及其对小鼠肝脏内代谢酶系和转运蛋白的作用。灌胃给予C57BL/6J小鼠三个剂量龙井茶多酚提取物,采用病理切片、血清中谷草转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和谷丙转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)含量来评价龙井茶多酚提取物对小鼠肝脏的损伤情况,通过测定小鼠肝脏谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)来评价其对小鼠肝脏内氧化应激水平的影响,Western blotting分析其对小鼠肝脏中代谢酶系的影响。结果显示龙井茶多酚提取物可以通过增加肝脏中GSH-Px和CAT的含量来增强肝脏的氧化防御;通过诱导细胞色素450酶系2E1/3A11(cytochrome P4502E1/3A1,CYP2E1/3A11),硫酸转移酶1A1(sulfate transferase 1A1,SULT1A1),葡萄糖醛酸转移酶1A6(UDP-glucuronosyltransferases1A6,UGT1A6),多药耐药相关蛋白家族2(multi-drug resistance associated protein 2,MRP2)的蛋白表达,抑制P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的蛋白表达来调节代谢。

重组血管紧张素转化酶抑制肽工程菌细胞破碎条件优化

以重组血管紧张素转化酶抑制肽（ACEIP）工程菌E.coli BL21（pGEX-4T-2-AHP）破碎率、破碎液中目的融合蛋白浓度（GST-AHP）为主要考察指标,对重组血管紧张素抑制肽工程菌破碎条件进行了优化。结果表明,其最佳工艺条件为每克湿菌体重悬于3 mL含有2 mmol/L EDTA的1×PBS缓冲液中,加溶菌酶至终浓度20 000 U/mL,室温放置30 min后超声破碎30 min,4℃10 000 r/min离心10 min取上清液。在此最佳工艺条件下破碎液中可溶性GST-AHP浓度达到1.83 g/L。

制备富含γ-氨基丁酸酸奶的乳酸菌筛选及相关特性分析

为获得能够在乳基底物中生产富含γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)酸奶所需的食品安全级乳酸菌,从国内市售发酵食品中分离出171株乳酸菌作为实验菌株。采用16S rDNA序列分析对实验菌株进行种属鉴定,采用改进后的高效液相色谱法(HPLC)测定发酵后GABA产量。经肉汤培养基初筛和乳基底物培养基复筛,得到一株在乳基底物中具备高产GABA潜力的乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis),编号4043。将该菌以3%(V/V)接种于含L-谷氨酸钠(L-Glu-Na)2 g/L的10%(m/V)乳基底物培养基中,在30℃下单菌种发酵48 h,GABA产量约0.39 g/L,在目前属于较高水平。该菌能够代谢葡萄糖、半乳糖等18种糖分。将其于30℃下接种于M17培养基中,对数生长期为2~8 h。该菌持续产酸能力较弱,在pH值3~5.5的环境中具备良好的酸耐受性,菌株自凝聚力良好,但对胆盐的耐受性极差;且属于表面弱疏水性菌株,粘附特性较差,难以在人体肠道内有效粘附与定植,不适宜作为胃肠道内益生菌。该菌可作为多菌种混合发酵生产富含GABA的酸奶的发酵剂。

富含γ-氨基丁酸酸奶对小鼠睡眠的促进作用

采用ICR小鼠体内实验探讨富含GABA酸奶对小鼠睡眠的促进作用及机制。通过戊巴比妥钠阈下剂量催眠实验、延长戊巴比妥钠睡眠时长实验、巴比妥钠睡眠潜伏期实验研究富含GABA酸奶对小鼠睡眠的改善作用,通过测定小鼠血清和脑组织中的Gly、GABA、5-HT和Glu的含量变化探讨富含GABA酸奶对PCPA所致小鼠失眠模型的改善机制。结果显示,与阴性对照组比,富含GABA酸奶80 mg/kg、160 mg/kg剂量组小鼠入睡率均由0显著提高至60%(p<0.05);富含GABA酸奶(80 mg/kg)组能将小鼠睡眠时长由43.40 min显著延长至156.20 min(p<0.05);但富含GABA酸奶各剂量组均无缩短小鼠睡眠潜伏期的作用。在失眠实验中,与失眠模型组比,富含GABA酸奶能够显著增加失眠小鼠脑组织中抑制性氨基酸GABA和Gly的含量(p<0.05),GABA含量升至1.10 ng/mL,Gly含量升至28.78 ng/mL。本研究结果显示,富含GABA酸奶能够有效延长ICR小鼠的睡眠时长,改善小鼠的失眠状态,其机制与增加小鼠脑内抑制性递质GABA及Gly的含量有关。

松茸多糖的结构分析及抗增殖活性研究（英文）

松茸,被誉为"菌中之王"。多糖作为其重要的活性成分之一,被报道具有抗癌、抗辐射、提高免疫等功效。本研究采用琼脂糖凝胶柱DEAE Sepharosse fast flow、葡聚糖凝胶柱Sephadex G-75对松茸多糖进行分离纯化,得到四个组分,分别为TM-P1A、TM-P1B、TM-P2A和TM-P2B。再通过GC-MS、HP-GPC以及核磁共振波谱对其结构进行分析。结果表明TM-P1A和TM-P2B主要由葡萄糖和半乳糖组成,并含有少量甘露糖,其摩尔比分别为8.7:1.8:1.0和8.9:1.3:1.0。TM-P2A由葡萄糖、半乳糖、甘露糖和岩藻糖组成,摩尔比为17.7:7.9:3.9:1.0。TM-P2B主要由β-1,6-吡喃型葡萄糖构成,无支链,有少量β-1,6-吡喃型半乳糖和β-1,6-吡喃型甘露糖。几个组分中TM-P2B抗氧化能力及抗肿瘤能力最强。其氧化自由基吸收能力(ORAC值)为2475.33±15.32μmol Trolox/g。在多糖浓度为1 mg/mL时对人肝癌细胞HepG2的抑制率达到90.23±2.17%,是TM-P2A的1.2倍,TM-P1A的3.1倍。本研究对于松茸的深度开发利用及相关产品的开发具有重要意义。

全麦粉模拟消化过程中的抗氧化活性研究

本文以3个不同品种小麦为原料(AK58、西农979、扬麦16),通过体外模拟胃肠消化实验,测定全麦粉在消化过程中多酚和黄酮含量及抗氧化活性变化规律。结果表明:在模拟消化过程中,酶对多酚释放作用显著,胃消化中最大释放量为胃消化0 h的3.03~3.14倍,肠消化中最大释放量为胃消化0 h的5.54~5.94倍和肠消化0 h的1.77~1.94倍;胃酸和酶均对黄酮释放具有显著效果,胃消化中最大释放量为胃0 h的1.72~1.94倍,肠消化中最大释放量为胃0 h的2.34~3.14倍和肠消化0 h的1.57~1.71倍;小麦粉抗氧化能力(ORAC)在消化过程中增加显著,胃消化中最大抗氧化能力为胃消化0 h的2.14~3.92倍,肠消化中最大抗氧化能力为胃消化0 h的7.19~10.18倍和肠消化0 h的2.72~3.24倍。此外,抗氧化能力与多酚释放量存在极显著正相关(rs=0.90~0.99,p<0.01)。

不同品种荔枝果肉细胞抗氧化及抗增殖活性评价

为明确荔枝果肉的生物抗氧化和抗肿瘤保健功能,采用HepG2人肝癌细胞模型对我国南方地区主要种植的10种代表性荔枝品种果肉的细胞抗氧化活性(CAA值)和抗肿瘤细胞增殖活性进行了评价。结果表明,10种荔枝品种中,妃子笑荔枝果肉具有最大的CAA值,淮枝则最小;妃子笑抗HepG2肿瘤细胞增殖活性最强,糯米糍则最弱。荔枝果肉的CAA值与总多酚含量、总黄酮含量、多酚化学抗氧化能力指数(ORAC值)之间都有极显著的正相关性(p<0.01),且与黄酮含量之间正相关性最大,说明荔枝果肉中起生物抗氧化作用的主要成分是黄酮类化合物;但荔枝果肉对HepG2肿瘤细胞的抗增殖活性与总多酚含量、总黄酮含量、ORAC和CAA值之间均呈现较弱的负相关性(p>0.05),提示某些特殊酚类单体或其协同作用在抗肿瘤细胞增殖过程中发挥主要作用。