广东省深圳市坪山区健康体检人群幽门螺杆菌感染特点分析

目的了解深圳市坪山区健康体检人幽门螺杆菌(Hp)感染特点,为开展健康管理提供参考。方法采用^(13)C呼气试验检测985名健康体检者是否感染Hp。结果在985名体检者中,按年龄分为A、B、C、D、E共5组。检出Hp阳性386例,感染率为39.2%,其中男性Hp阳性222例,感染率40.6%,女性Hp阳性164例,感染率37.4%;A组感染率(男性35.1%、女性33.9%),B组感染率(男性42.9%、女性28.6%),C组感染率(男性42.7%、女性41.7%),D组感染率(男性37.0%、女性49.3%),E组感染率(男性35.7%、女性57.7%)。男性30~39岁感染率最高(42.9%)。女性30~39岁感染率最低(28.6%),40岁以后逐步增高,50~59岁感染率达到49.3%;30~39岁时,男性感染率显著高于同年龄段女性,而50~59岁人群,女性感染率高于同年龄段男性12.3%。结论深圳市坪山区体检人群Hp感染率与年龄、性别有关。50岁以上人群,女性感染率高于同年龄段男性的原因,有待于大样本流行病学和分子生物学研究。

N乙酰半胱氨酸对四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤的保护机制研究

目的考察抗氧化剂N乙酰半胱氨酸(NAC)对四氯化碳(CCl4)所致的大鼠急性肝损伤的保护机制研究。方法将4~6周龄的SPF级SD雄性大鼠随机分为A、B、C三组,分别为模型组、对照组和NAC治疗组。本实验制备经典CCl4大鼠急性肝损伤模型,通过腹腔注射浓度为10%的CCl4橄榄油溶液10 ml/kg建立SPF级SD大鼠急性肝损伤的模型,CCl4注射前30 min、给药后6、12 h分别给腹腔注射等体积生理盐水,共三次。通过生化仪器检测血清中天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、血清碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、血清总胆红素(TBil)、白蛋白(ALB)、谷氨酸脱氢酶(GLDH)、谷氨酰转肽酶(GGTP)、血清铁、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平。留取每只大鼠肝脏相同部位,4%多聚甲醛固定,进行石蜡包埋,石蜡切片,每组织切1张,并进行HE染色及全景扫描。观察肝组织病理学变化。结果NAC治疗组的GLDH水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01);NAC治疗组的血清铁与SOD水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.0001);NAC治疗组的TBil、MDA水平低于模型组,差异有统计学意义(P<0.0001)。NAC治疗组能够降低模型组大鼠血清中GLDH水平,增加肝组织SOD的水平,降低肝组织TBil和MDA水平,可减少肝细胞坏死。结论NAC通过抗氧化应激途径,能够有效改善CCl4所致大鼠急性肝损伤,对肝损伤有积极作用。

负性调控因子IRAKM在系统性红斑狼疮免疫调节异常中的作用

目的:研究白介素-1受体相关激酶-M(IRAKM)在系统性红斑狼疮(SLE)中的表达及其与免疫调节的关系。方法:将103例SLE患者根据其疾病活动度评分(SLEDAI)分为活动期组(55例)和稳定期组(48例),另选40名体检健康者作为对照组;采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测3组外周血单核细胞中IRAKM mRNA的表达量,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中抗ds-DNA抗体、抗Sm抗体水平,免疫散射比浊法测定血清补体C3、C4水平;应用单因素方差分析法分析3组各观察指标的差异,Pearson或Spearman分析IRAKM与SLE自身抗体及补体的相关性。结果:活动期组和稳定期组SLE患者的IRAKM mRNA表达量均明显低于对照组(P<0.05),且活动期组比稳定期组更低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比,活动期组和稳定期组血清抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体水平均明显升高(P<0.05),补体C3、C4的水平均明显降低(P<0.05),且活动期组血清自身抗体和补体水平变化较稳定期组更显著(P<0.05);SLE患者的IRAKM mRNA表达量与抗ds-DNA抗体和抗Sm抗体水平呈负相关(P<0.05),与补体C3、C4水平呈正相关(P<0.05)。结论:IRAKM负性调控参与SLE的免疫调节过程,其表达水平与SLE病情活动程度密切相关。

基于CRISPR/Cas9技术构建人CLCN7基因编辑载体

目的为修复石骨症致病基因(CLCN7)进行前期探索,采用CRISPR/Cas9技术构建CLCN7基因编辑表达载体。方法根据sgRNA设计原则,在CLCN7外显子区设计一对sgRNA,合成四条单链DNA寡核苷酸,退火后连接于CRISPR/Cas9质粒的BspQ I酶切位点处,然后转染感受态大肠杆菌DH5α,并通过氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,扩大培养。结果最后经过PCR和Sanger测序鉴定获得了两个基因编辑表达载体CLCN7-sg1RNA-CRISPR-Cas9和CLCN7-sg2RNACRISPR-Cas9。结论基因编辑载体的成功构建为CLCN7突变修复提供了工作基础。

胸腔积液和血液γ-干扰素释放试验在结核性胸膜炎患者中的诊断价值

目的探讨胸腔积液和血液γ-干扰素释放试验(IGRA)在结核性胸膜炎患者中的诊断价值。方法选取2016年1~12月深圳市人民医院临床症状有胸腔积液的患者151例,按临床诊断将其分为结核性胸膜炎组77例,非结核性胸膜炎组74例,分别收集患者的血液和胸腔积液样本开展IGRA,利用统计学软件分析试验对血液和胸腔积液样本的灵敏度、特异性、阴性预测值、阳性预测值以及结果的一致性。结果胸腔积液IGRA灵敏度为97.4%,特异性为73.1%;血液灵敏度为83.1%,特异性为87.7%,胸腔积液灵敏度高于血液(χ2=8.94,P<0.05),但特异性小于血液(χ2=4.74,P<0.05);胸腔积液阳性预测值为80.6%,阴性预测值为96.1%;血液阳性预测值为87.7%,阴性预测值为83.1%,胸腔积液的阳性预测值与血液的比较,差异无统计学意义(χ2=1.48,P>0.05),而胸腔积液的阴性预测值高于血液(χ2=4.98,P<0.05);两种样本检测结果一致性一般(Kappa=0.57)。结论胸腔积液和血液IGRA在结核性胸膜炎中均有一定诊断价值,胸腔积液IGRA对鉴别诊断结核性胸膜炎更有意义。

胸腔积液γ-干扰素释放试验在结核性胸膜炎诊断中的价值

目的探讨胸腔积液γ-干扰素释放试验(IGRA)在结核性胸膜炎诊断中的价值。方法选取2016年1-12月胸腔积液患者105例,经临床诊断为结核性胸膜炎患者52例纳入结核组;非结核性胸膜炎患者53例,其中42例IGRA结果阴性的非结核患者纳入IGRA阴性-非结核组,11例IGRA结果阳性的非结核患者纳入IGRA阳性-非结核组。收集患者胸腔积液标本进行体外IGRA试验,并对结果进行比较。结果结核组阴性对照干扰素水平明显高于IGRA阴性-非结核组(t=0.001 6)和IGRA阳性-非结核组(t=0.001 7)阴性对照干扰素水平;结核组结核刺激剂干扰素水平明显高于IGRA阴性-非结核组(t=6.327 61×10^(-8))和IGRA阳性-非结核组(t=5.906 37×10^(-7))结核刺激剂干扰素水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论综合分析胸腔积液IGRA检测阴性对照及结核刺激剂干扰素水平能够有效诊断结核性胸膜炎。

应用iTRAQ技术对支原体肺炎患儿血清差异蛋白的定量分析

目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析支原体肺炎患儿血清蛋白,筛选出差异蛋白并行其功能分析。方法采用强阳离子交换色谱分析法对8种不同同位素标记的iTRAQ和液相色谱法以及串联质谱分析支原体肺炎组(MPP组)和健康对照组血清蛋白并通过Mascot软件分析和GO分析表达差异的蛋白。结果与对照组相比,MPP组中共鉴定出有定量信息的蛋白质66个,包括52个上调蛋白和14个下调蛋白。生物信息学分析显示差异表达的蛋白主要参与急性期反应、急性炎症反应、氧气输送、空气运输、过氧化氢分解过程、细胞氧化解毒、凝血、及细胞解毒等过程,这些表达差异的蛋白中选择6个显著表达差异作为候选蛋白,分别是上调蛋白SAA、CRP、HBB、APOM和下调蛋白APOC3、GPX3。结论本研究发现这6种蛋白在小儿支原体肺炎过程中发挥重要作用,可能作为该病潜在的临床筛查生物标志物。

肝癌患者外周血环状RNAs诊断价值分析

目的探讨原发性肝癌(PLC)患者外周血中环状RNAs(circRNAs)作为PLC分子标志物的临床诊断价值。方法利用circRNAs微阵列芯片技术检测4例PLC患者(PLC组)和4例健康对照者(对照组)外周血circRNAs的表达谱,并进行组间差异分析,基因本体/基因功能(GO/KEGG)分析差异表达的circRNAs明显富集的潜在功能和信号通路。结果与对照组比较,PLC组中共有26种circRNAs具有差异表达,包括上调的14种circRNAs和下调的12种circRNAs,亲本基因为:NFATC3、UBQLN1、SKA3、OAT、DENND4A、MGEA5、N4BP2L2、MKLN1、RANBP9、PICALM、SPECC1、LRP5、FAM64A、RPS8、FLI1、PCNXL2、RPL13、LINC00340、KIF26B、WBSCR17、NUP214、GPI、GRB10。GO/KEGG分析发现,亲本基因多涉及转录因子活性、RNA转运RT及通过内质网蛋白质加工、泛素介导的蛋白质水解和参与cGMP-PKG信号通路等功能。结论PLC患者外周血存在明显差异表达的circRNAs,其亲本基因可能参与PLC复杂的发病机制。

肝细胞癌组织表达下调蛋白的筛选及分析

目的筛选肝细胞癌(HCC)组织表达下调蛋白,探索生物标志物。方法采用在中国人民解放军某三甲医院8例住院患者HCC组织及癌旁组织标本,使用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)蛋白标记技术和液相串联质谱分析对这些标本进行蛋白表达水平研究。结果共筛选出下调蛋白71个,结合蛋白覆盖度、可信度及文献,发现蛋白谷胱甘肽转移酶(GSTM1)、B淋巴细胞瘤-2蛋白(Bcl-2)、细胞色素氧化酶(CYP)2C8、CYP2A6、氨基酰化酶1(ACY1)明显下调。结论HCC组织下调蛋白对该病的诊断、预后判断有重要价值,下调蛋白迫切需要大样本进行验证,并开展关键蛋白机制研究,为HCC的防治提供新的信息。

5例前列腺癌T细胞受体β链CDR3的多样性分析

T淋巴细胞受体(TCRs)在抗原识别免疫应答中作用重要,其多样性与宿主免疫反应及肿瘤预后判断密切相关。目的:采用高通量测序技术研究前列腺癌组织和癌旁组织中T细胞受体(TCR)克隆多样性及其克隆序列。方法:收集5例PC患者的癌组织和癌旁组织,提取DNA后经多重PCR技术对TCRβ链CDR3区进行扩增。用Illumina MiSeq进行测序,经过数据处理和比对分析,比较前列腺癌组织TCR CDR3组库的组成特征。结果:前列腺癌组织具有更高程度的克隆百分比和较高的高度扩增克隆比HEC(HEC:频率>样本总读数的0. 5%的TCR克隆),并获得了24对在癌组织样本中差异表达的V-J基因组合、16对在癌旁组织样本中差异表达的V-J基因组合。结论:前列腺癌组织与癌旁组织均存在差异性的V-J基因组合以及高克隆表达的HEC,其中癌组织样品具有更高的HEC。PC发生发展对免疫学研究提供了新的数据,对PC免疫监视、T细胞受体变异标志等研究提供了参考,对以后继续研究打下了基础。

应用iTRAQ定量蛋白质组学技术对β-地中海贫血患者血浆差异蛋白的定量分析

目的应用同位素相对标记与绝对定量技术(iTRAQ)分析β-地中海贫血患者血浆蛋白,筛选出差异蛋白及其功能分析。方法通过强阳离子交换色谱分析法的8种不同同位素标记的i TRAQ和液相色谱法以及串联质谱分析了地贫组和健康照者血浆蛋白。通过Mascot软件分析和GO分析表达差异的蛋白。结果与对照组相比,实验组中共鉴定出有定量信息的蛋白质58个,包括49个上调蛋白和9个下调蛋白。生物信息学分析显示差异表达的蛋白主要参与凝血、凝固止血、伤口愈合、应对受伤、体液调节的水平、急性炎症反应、囊泡、介导转运、血小板激活、血小板脱粒等过程,这些表达差异的蛋白中选择5个显著表达差异作为候选蛋白,分别是CRP、SAA1、HBA、FBLN1、HRG。结论本研究发现这5种蛋白在β-地中海贫血发病过程中发挥重要作用,可能作为该病潜在的临床筛查生物标志物。

儿童类风湿关节炎高贡献率易感基因的研究

目的通过对小儿类风湿关节炎全基因组基因拷贝数变异(copy number variations,CNVs)的研究,为该病易感基因筛选和发病机制研究提供理论基础。方法选取小儿类风湿关节炎患者(Juvenile rheumatoid arthritis,JRA)20例作为患病组,随机从体检中心选取无类风湿关节炎患病史健康儿童20例作为健康对照组。采用测序仪分别对类风湿关节炎患病组和健康组的DNA-pool进行全基因组重测序,用生物信息学软件对测序数据进行分析。结果我们采用CNVnator软件对患病组和健康组的测序数据进行检测,发现CNV位点分别为7479个和5201个。通过生物信息学分析筛选,患病组与健康组比较发现有825个CNVs位点,其中有192个位于内含子区域,有93个位于外显子区域,19个位于上游位置,25个位于下游位置。结论本研究揭示了儿童期类风湿关节炎患者的基因组拷贝数变异的变化,并发现了编码区的KIR3DL1、CD247、PPIP5K1、MIOX、ANK3、HK3基因可能为类风湿关节炎的易感基因。

基于蛋白组学方法对α-地中海贫血患者血浆蛋白谱的分析

目的 通过对α-地中海贫血女性患者血浆蛋白进行定性和定量分析,筛选α-地中海贫血特异蛋白,为临床研究和诊断提供新的信息。方法 采用同位素标记相对和绝对定量技术(iTRAQ)分别分析10例女性α-地中海贫患者和10名健康对照者血浆蛋白,并对差异蛋白进行生物信息学分析。结果 共检测到41个差异表达蛋白,其中包括29个表达上调蛋白,12个表达下调蛋白,发现CRP、SAA1、HRG、AACT及VCAM1等5个差异蛋白是蛋白网络的关键性节点。结论 CRP、SAA1、HRG、AACT及VCAM1等5个蛋白参与的炎症反应可能在一定程度上影响α-地中海贫血患者的铁代谢和蛋白代谢,进而影响患者的造血功能和缩短了红细胞寿命。CRP、SAA1、HRG、AACT及VCAM1有可能作为评估α-地中海贫血发生和发展的标志物。