深圳地区育龄人群地中海贫血基因型分布调查

【目的】了解深圳地区育龄人群中α、β地中海贫血基因型的分布情况。【方法】通过检测育龄男女外周血的平均红细胞容积(MCV)、平均红细胞血红蛋白含量(MCH)和血红蛋白电泳进行地中海贫血的筛查。对于6 276例筛查阳性者用PCR及反向斑点膜条杂交技术(Reverse Dot Blot Hybridization,RDB法)进行α、β地中海贫血基因诊断,未检查到常见突变者进一步行基因突变热点测序、比对检测。【结果】5 503例进行了α地贫基因诊断,共检出11种α地贫基因型共2 129例,其中常见缺失型α地贫基因型--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα,构成比分别为76.84%、15.12%、5.26%,共97.22%。2 947例进行了β地贫基因诊断,共发现14种β地贫基因型共1059例,其中最常见的6种突变类型分别为β41-42(-TCTT)、βIVS-2-654(C→T)、βCD17(A→T)、β-28(A→T)、βCD26(G→A)、βCD71/72(+A),共占94.71%。其中通过β珠蛋白基因全长DNA序列分析,首次在广西籍患者中发现1种在中国人种中罕见报道的突变:CD37突变(G→A),此前仅发现于中国广东人和阿富汗人中。【结论】深圳地区是国内地贫发生率较高和遗传背景较复杂的地区,但是仍以广东人为主,其α、β地贫基因型分布的特点符合广东省的基本特点。对育龄人群进行地贫的筛查和基因诊断,对提高人口素质有重要作用。

无创胎儿DNA检测在2949例传统唐氏筛查临界风险孕妇中的应用

目的探讨无创胎儿DNA检测(NIPT)在传统唐氏筛查临界风险孕妇中的应用价值。方法选择2015年3月1日—2016年3月31日因"传统唐氏筛查为临界风险"在深圳市妇幼保健院就诊,经知情同意自愿接受NIPT作为后续检查的2 949例孕妇为研究对象。回顾性分析孕期传统唐氏筛查、超声检查、NIPT结果和侵入性羊膜腔穿刺胎儿染色体核型分析结果,追踪随访其妊娠结局。结果 2 949例传统唐氏筛查为临界风险孕妇均100%获得NIPT检测结果,发现NIPT高风险25例;25例中24例接受侵入性羊膜腔穿刺行胎儿染色体核型分析,确诊胎儿染色体异常13例,其中21三体5例、13三体2例、性染色体异常4例、其他染色体异常2例;另有1例NIPT性染色体异常高风险者拒绝产前诊断,出生后随访新生儿未见异常。经随访,NIPT阴性孕妇中未发现染色体异常新生儿,临界风险孕妇中胎儿染色体异常发生率0.44%(13/2 949)。结论应用NIPT作为唐氏筛查临界风险孕妇的二线筛查将大大减少侵入性产前诊断的例数,明显提高胎儿染色体异常的检出率。

乳腺癌新辅助化疗对ERCC1基因表达的影响

目的探讨核苷酸切除修复基因家族成员ERCC1基因在乳腺癌中的表达情况和新辅助化疗对它的影响及临床意义。方法RT-PCR检测40例常规手术切除的乳腺癌标本和14例术前曾接受新辅助化疗的乳腺癌标本中ERCC1基因的表达。结果乳腺癌中ERCC1基因阳性表达率为35.0%,其表达水平与患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、病理分型、组织学分级、ER、PR和HER-2均无明显相关性(P>0.05)。新辅助化疗组ERCC1基因的表达水平明显高于无化疗组(P<0.05)。结论ERCC1基因的表达不影响乳腺癌的临床病理特征,新辅助化疗可以上调ERCC1基因的表达水平,在临床后续化疗中应予重视。

妊娠高血压疾病血脂指标的变化

目的分析妊娠高血压疾病的血脂代谢特点，了解血脂代谢紊乱和妊娠高血压疾病的关系。方法选取孕周为37～41周的健康妊娠孕妇60例（正常妊娠组），妊娠高血压疾病孕妇90例（妊娠高血压疾病组），正常未孕女性60例（未孕组），比较3个组的三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白-胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白-胆固醇（LDL-C）、载脂蛋白-A（Apo-A）、载脂蛋白-B（Apo-B）及脂蛋白a（Lpa）之间的差异。同时将90例妊娠高血压疾病孕妇按病程分级分为妊娠高血压组30例、轻度子痫前期组30例及重度子痫前期组30例共3个组，并比较不同分级的妊娠高血压疾病孕妇血脂的变化，分析血脂异常程度与妊娠高血压疾病严重程度的关系。结果（1）未孕组、正常妊娠组及妊娠高血压疾病组间TC、TG、HDL-L、LDL-L、Apo-A及Apo-B水平差异有统计学意义（P＜0．05）；而3个组间Lpa水平差异无统计学意义（P＞0．05）。（2）在不同病程妊娠高血压疾病中，妊娠高血压组、轻度子痫前期组及重度子痫前期组3个组的TG、LDL-C、Apo-B水平比较差异有统计学意义（P＜0．05），而TC、HDL-L、Apo-A及Lpa各组之间差异无统计学意义（P＞0．05）。结论妊娠高血压疾病的发生可能与孕期血脂代谢紊乱相关，血脂异常程度越高，发生严重妊娠高血压疾病的可能性就越大，故加强血脂监测，早期进行干预并纠正血脂紊乱以保证母婴健康。

高龄孕妇对2种不同唐氏产前诊断方案的需求及经济学评价

目的:探讨高龄孕妇对2种不同唐氏产前诊断方案的需求,并对这2种方案进行经济学评价。方法:选择2015年3月1日至2016年3月31日孕20+6周前在深圳市妇幼保健院产科就诊的单胎高龄孕妇4104例,由孕妇自主选择先行无创胎儿DNA检测(NIPT),NIPT高风险再行羊膜腔穿刺(方案1)或直接羊膜腔穿刺(方案2)。比较孕妇对2种方案的需求及其影响因素,并对2种方案进行经济学评价。结果:选择方案1的比率明显高于方案2[51.34%(2107/4104)vs 7.65%(314/4104),χ~2=1883.431,P<0.001]。Logistic回归分析显示,孕妇年龄、传统唐氏筛查结果和胎儿颈部透明层厚度(NT)是影响孕妇选择的因素。与方案2相比,方案1可以节省67.21%的总费用。结论:高龄孕妇对NIPT有巨大的需求,且高龄孕妇采用NIPT筛查阳性后再行羊膜腔穿刺术可节省医疗费用,建议在充分知情同意的基础上可将NIPT用于高龄孕妇的一线筛查,尤其是适用于年龄较轻、传统唐氏筛查非高风险、NT正常的高龄孕妇。

子痫前期患者血浆2-ME水平及胎盘COMT的表达

目的:研究子痫前期(PE)孕妇血浆2-甲氧雌二醇(2-ME)水平及胎盘组织中儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)mRNA的水平,探讨COMT、2-ME与PE发病的关系。方法:选择2012年4月至8月在南方医科大学附属深圳妇幼保健院产科住院分娩的36例孕妇,其中18例PE孕妇(PE组),18例正常孕妇(对照组)。采用酶免疫法(EIA)检测两组的血浆2-ME水平,采用实时荧光定量PCR技术检测两组胎盘组织中COMT mRNA的水平。结果:PE组和对照组的血浆2-ME水平分别为(957.8±333.3)pg/ml和(917.0±457.0)pg/ml,两组无显著差异(P=0.794)。PE组胎盘组织中COMT mRNA的表达水平(0.00188±0.00056)显著低于对照组(0.00235±0.00097)(P=0.016)。结论:COMT基因转录的下调可能与PE发病有关。

湖南籍人群α、β地中海贫血流行病学调查及突变类型分析

目的调查在深圳的湖南籍人群α、β地中海贫血的携带频率,探讨α和β地贫基因突变类型及其构成比例。方法通过血常规、血红蛋白电泳等方法对湖南籍贯4423人进行地贫筛查,对异常者进行基因分析,统计湖南籍人群2种地贫的发生频率及突变类型。结果对受检样品中HbA2和/或MCV偏低者直接进行基因分型诊断,发现α地贫95例,占所检人群的2.15%,共有4种基因型:--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα、--SEA/-α3.7,所占比例依次为76.34%、1.51%、3.23%、1.08%;共发现HbA2显著增高者90例,检出率为2.03%;对其中73例进行基因分型,共检测到9种突变类型:IVS-II-654(C-T)、CD41/42(-TCTT)、CD17(A-T)、TATAbox-28(A-C)、CD26(G-A)、CD43(G-T)、TATAbox-29(A-G)、CD27/28(+C)、CD71/72(+A),各型突变的构成百分比依次为35.61%、26.03%、21.92%、5.48%、2.74%、2.74%、2.74%、1.37%、1.37%。结论湖南籍人群α、β地贫的发生率较高;不同突变类型的构成情况与其他地区相比明显不同,本研究结果对开展遗传咨询、基因分析及产前诊断具有重要的参考价值。

孕妇外周血中胎儿有核红细胞分离和应用研究

无创性产前实验诊断是指利用非侵入性方法获取胎儿细胞或核酸等物质,用于诊断胎儿是否携带遗传性疾病和先天性疾病。与传统羊水穿刺、绒毛膜取样等方法相比,该类方法最大的优势是不会引起孕妇感染、胎儿流产等并发症，因此成为当前研究的热点。现就从孕妇外周血中分离胎儿有核红细胞（fetal nucleated red blood cells，FNRBC）进行产前诊断研究的现状综述如下。

PCR-高效液相色谱法检测线粒体DNA A1555G突变

目的探讨PCR-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)分析技术在检测线粒体(mt)12S rRNA基因第1555位A-G均质点突变中的应用。方法 4例临床诊断为氨基糖苷类抗生素耳聋的患者及40例听力正常体检者,分别运用PCR-DHPLC技术、酶切技术及DNA测序技术进行mtDNA1555位点检测。结果 PCR-DHPLC与酶切技术均检测出4例患者mtDNA A1555G突变,在PCR-DHPLC中均呈特征性突变双峰;40例正常体检者未检测出突变,样品均呈单峰。DNA测序技术证实了DHPLC及酶切技术的准确性。结论 DHPLC能有效地应用于线粒体DNA A1555G突变的检测,该方法简便,成本低廉,可作为mtDNA A1555G突变位点大样本筛查的的手段。

HPV-18病毒E2与E6在宫颈病变中的表达与意义

目的探讨HPV—18病毒E2与E6基因在宫颈病变组织中的表达及其在宫颈癌变过程中的作用。方法采用逆转录聚合酶链反应技术，检测HPV-18阳性的宫颈炎15例、CINI19例、CINⅡ17例、CINⅢ20例、宫颈浸润癌24例的标本中E2及E6基因的表达，比较两者在各组中的表达差异。结果HPV-18E2在宫颈炎、CINI、CINⅡ、CINⅢ和宫颈浸润癌的阳性表达率分别为93．3％、94．7％、58．8％、20．0％及0％；E6在上述各组的阳性表达率分别为6．7％、5．3％、41．2％、85．O％及100％；E2和E6在宫颈炎和CINI的表达差异无显著性（P〉0．05）；E2和E6的表达在CINI、CINII、CINⅢ和宫颈浸润癌组间的比较，差异有显著意义（P〈0．05）；E6和E2的表达呈负相关（r=-0．728，P〈0．01）。结论HPV-18E2的表达缺失和E6的过度表达，可能是HPV诱导宫颈细胞恶性转化的关键环节，在宫颈癌的演变过程中起重要作用。检测HPV-18E2与E6的表达对早期评估CIN的预后可能有一定的参考价值。

先天性甲低患儿相关基因突变及胰岛素样生长因子结合蛋白表达的研究

为了解先天性甲状腺功能衰退症患儿相关基因突变以及胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP-3)表达水平,选取100例先天性甲状腺功能衰退症患儿为观察对象,并选取同期67例正常儿童作为对照。结果发现,与正常儿童比较,先天性甲状腺功能衰退症患儿IGFBP-3水平明显著降低,另有10例双氧化酶2(DUOX2)基因的第28外显子基因存在突变,另有30例第17外显子基因突变。表明先天性甲状腺功能衰退症患儿存在DUOX2基因突变和IGFBP-3水降低。

1例男性不育患者与1例产前诊断胎儿的idic(Yp)细胞及分子遗传学分析

目的:综合应用细胞及分子遗传学技术检测1例男性不育患者和1例产前诊断胎儿,以明确idic(Y)的基因诊断,并指导临床咨询和患者生育。方法:常规外周血和羊水细胞培养制片,G、C显带核型分析及荧光原位杂交(FISH);常规提取外周血和羊水基因组DNA,进行微阵列比较基因组杂交(Array-CGH)及多重连接依赖探针扩增(MLPA)分析。结果:综合各项检测结果,2例患者均诊断为45,X/46,X,idic(Y)(p11.31)嵌合型,男性不育患者Y染色体基因组序列为chrY:2,710,250-57,428,567;SRY、ZFY、UTY及AZF等关键基因结构完整。产前诊断胎儿除AZFc区有父源性微缺失外,与男性不育患者结果相似。结论:idic(Y)(p11.31)可引发矮小及男性不育症状。在经典的核型分析和FISH基础上,综合应用Array-CGH、MLPA技术可以提高idic(Y)的诊断准确度,有助于其遗传基础与临床效应的研究及指导临床遗传咨询。

HPV-18病毒E2、E6与Brd4在宫颈癌及癌前病变的表达与意义

目的探讨HPV-18病毒E2、E6与宿主蛋白Brd4在CIN和宫颈癌中的表达与临床意义。方法 RT-PCR检测HPV-18阳性的宫颈炎15例、CINⅠ19例、CINⅡ17例、CINⅢ20例、宫颈浸润癌24例的标本中E2和E6mRNA的表达,Western blot检测E2蛋白和Brd4的表达,比较上述指标在各组中的表达差异。结果 HPV-18E2和E6 mRNA在宫颈炎和CINⅠ的表达差异无显著性(P>0.05);从CIN到宫颈浸润癌,E2 mRNA的表达呈下降趋势;E6 mRNA的表达呈增加趋势(P<0.05);E6 mRNA和E2 mRNA的表达呈负相关(P<0.01)。E2蛋白和Brd4在宫颈炎和CINⅠ的表达差异无显著性(P>0.05);从CIN到宫颈浸润癌,其表达呈下降趋势(P<0.05)。结论 Brd4-E2复合体的解体,E2的表达缺失和E6的过度表达,可能是HPV-18诱导宫颈细胞恶性转型的关键环节,在宫颈癌的演变中起重要作用。检测HPV-18E2、E6与Brd4的表达对早期预测CIN的预后有一定的参考价值。

胎盘儿茶酚-O-甲基转移酶单核苷酸多态性与子痫前期遗传易感性的关系研究

目的探讨胎盘中儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)单核苷酸多态性与子痫前期遗传易感性的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对138例子痫前期患者胎盘组织(子痫前期组)和126例正常晚期妊娠妇女胎盘组织(对照组)的COMT基因第4号外显子第158位密码子G与A的多态性进行分析,分析COMT单核苷酸多态性与子痫前期发生风险的关系。结果子痫前期组COMT基因型频率:野生型(GG)、杂合子(GA)、突变纯合子(AA)分别为58.7%、34.8%、6.5%,对照组分别为61.9%、33.3%、4.8%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。子痫前期组等位基因频率G、A分别为76.1%、23.9%,对照组分别为78.6%、21.4%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 COMT基因第158/108位密码子的单核苷酸多态性与子痫前期的发病及病情轻重程度无相关性。突变基因型并没有增加子痫前期的发病风险。

急性期川崎病γ干扰素组蛋白乙酰化改变及意义初探

目的探讨急性期川崎病（KD）患儿IFN-γ组蛋白乙酰化改变及其在KD免疫发病机制中的作用。方法以2015年2月至2016年6月深圳市儿童医院诊断并住院治疗的KD患儿为KD组,经IVIG治疗后为KD-IVIG组,KD组依冠状动脉有无损伤分为冠状动脉损伤（KD-CAL＋）亚组和无冠状动脉损伤（KD-CAL-）亚组,于IVIG治疗前、后取血备检;同期体检的健康儿童为对照组。采用染色质免疫共沉淀法检测外周血CD4^＋T细胞IFN-γ组蛋白H3乙酰化水平及组蛋白乙酰化酶p300和去乙酰化酶HDAC1/2结合水平;流式细胞术检测外周血CD4^＋IFN-γ＋细胞（Th1）比例及IFN-γ、p STAT4、p STAT5和T-bet蛋白表达水平;实时荧光定量PCR检测CD4^＋T细胞IFN-γ、IL-2Rα/β、IL-12Rβ1/2、IL-18Rα/β和ITLR4m RNA表达;ELISA检测外周血浆中IL-12、IL-2和IL-18浓度。结果 ①KD患儿38例（男20例）,年龄1-5.2岁;KD-CAL＋亚组16例,KD-CAL-亚组22例。对照组32例（男17例）,年龄1.2-4.9岁。KD组和对照组年龄、性别差异无统计学意义。②急性期KD患儿Th1细胞比例、IFN-γm RNA和蛋白表达及其组蛋白乙酰化水平显著高于对照组（P〈0.05）,且KDCAL＋亚组高于KD-CAL-亚组（P〈0.05）,经IVIG治疗后明显恢复（P〈0.05）。③急性期KD患儿CD4^＋T细胞IFN-γ组蛋白乙酰化酶p300结合水平显著增加（P〈0.05）,HDAC1/2结合水平明显降低（P〈0.05）,p300/HDAC1/2明显高于对照组且与IFN-γ组蛋白H3乙酰化水平呈正相关（r=0.52;P〈0.05）,经IVIG治疗后均有所恢复（P〈0.05）。其中KD-CAL＋亚组p300结合水平及p300/HDAC1/2比值均高于KD-CAL-亚组（P〈0.05）,而HDAC1/2结合水平则低于后者（P〈0.05）。④急性期KD患儿血浆IL-2、IL-12和IL-18浓度显著增高（P〈0.05）,CD4^＋T细胞表面受体IL-2Rα/β、IL-12Rβ1/2、IL-18Rα/β和TLR4及其下游信号分子p STAT5、p STAT4、T-bet和My D88表达明显上调（P〈0.05）,且KD-CAL＋亚组前述各项均高于KDCAL-亚组（P〈0.05）,经IVIG治疗后均有不同程度恢复（P〈0.05）。结论 IFN-γ组蛋白过度乙酰化可能是导致急性期KD患儿免疫功能紊乱的重要因素之一。

多重连接依赖式探针扩增技术及其在医学上的应用

多重连接依赖式探针扩增(MLPA)是近年发展起来的新技术,其在基因检测和基因诊断等方面有较高的灵敏度。本文着重介绍MLPA技术的原理、特点及其在多种领域的研究和基因诊断上的应用。

罕见完全性易位型18-三体的产前遗传学诊断及溯源分析

【目的】探讨无创产前检测(NIPT)提示18-三体高风险胎儿的罕见异常核型起源及对生育的影响。【方法】产前诊断一例罕见完全性易位型18-三体病例,结合细胞及分子遗传学分析对胎儿染色体异常进行溯源。以“易位型18-三体”、“18-三体易位型”(包括中、英文)为检索词,对PubMed、CNKI、SinoMed文献服务系统、万方数据知识服务平台、维普中文科技期刊数据库及中华医学期刊全文数据库进行检索,收集并分析检索到的病例资料。【结果】胎儿SNP array提示18-三体,经父母G-显带核型分析验证,孕妇外周血染色体核型为46,XX,t(9;18)(q31.2;q23),胎儿最终确认核型为47,XN,t(9;18)(q31.2;q23)mat,+18,为罕见的完全性易位型18-三体;与父母SNP array溯源分析显示胎儿有2份完整18号染色体遗传物质来自染色体平衡易位的母亲。文献检索发现国外报道2例完全性易位型18-三体患儿,均有18-三体表型且都来源于亲本18号染色体与其他染色体的平衡易位。【结论】NIPT能有效提前预警或预诊18-三体;SNP array技术不仅能提高染色体异常的检出率,还可以对异常染色体进行溯源;胎儿细胞染色体核型分析仍是产前诊断染色体异常的金标准。

以蛛网膜囊肿为首发症状的神经皮肤黑色素沉着序列征1例

神经皮肤黑色素沉着序列征(NCM)是一种罕见的皮肤、软脑膜、蛛网膜黑色素细胞错构病,主要表现为外胚层的组织器官受累,中胚层、内胚层的组织也有不同程度受累[1]。该病在1861年首次被ROKITANSKY描述[2],国内也有报道[3],现将本院收治的1例报道如下。

深圳地区152例唐氏综合征出生情况及漏检原因分析

目的探讨唐氏综合征(DS)的发病因素及出生因素,加强产前诊断工作,防止唐氏征患儿漏检,杜绝唐氏征患儿出生。方法采用患儿的外周血及脐带血进行淋巴细胞培养,染色体制片,G显带处理及核型分析。结果与结论患儿染色体核型类型中单纯型21-三体140例(92.1%),嵌合型5例(3.3%),易位型6例(3.9%),1例46,X,del(X)(q21.2),+21(0.66%)较罕见,男女性别比为1.62∶1。在流动人口较多的深圳地区普及优生教育及开展产前检查和产前诊断,对防治遗传病患儿出生,提高人口遗传素质尤为重要。

深圳地区78例原发性闭经患者的细胞遗传学分析

目的探讨原发性闭经患者在细胞遗传学水平上的主要特征和发病机制。方法采用外周血淋巴细胞染色体培养技术进行染色体核型分析。结果 78例原发性闭经患者共检出染色体异常31例,异常检出率为39.74%,主要为46,XY、45,X0嵌合和X染色体数目异常,包括11例46,XY,9例45,X0嵌合,6例45,X0,4例X染色体结构异常。结论染色体异常是导致原发性闭经的重要原因之一,对原发性闭经患者进行细胞遗传学检查对确定病因和治疗方案是非常必要的。