冻存时间对脐血造血细胞体外增殖潜能的影响

目的 :研究冻存时间对脐血造血细胞增殖潜能的影响。方法 :在所分离的脐血有核细胞中加入联合低温保护剂Dextran 4 0 +10 %DMSO ,经梯度降温后置液氮深低温保存。采用无血清造血细胞扩增液对冻存不同时间的脐血造血细胞进行体外扩增 ,动态监测扩增潜能。结果 :将冻存 1个月、4个月脐血造血细胞体外扩增 5周 ,其总有核细胞分别被扩增了 (14 99.0± 115 .6 )倍和 (15 13.0± 110 .4 )倍 ,CFCs均于体外扩增的第 3周达到高峰 ,分别扩增了(5 3.8± 6 .3)倍和 (5 4 .8± 6 .7)倍 ,CD34+ 造血细胞于体外扩增的第 2周均达到高峰 ,分别扩增了 (6 3.8± 6 .1)倍和(6 2 .4± 5 .7)倍 ;统计分析冻存 1个月与 4个月后造血细胞扩增结果 ,不存在显著性差异 ,P >0 .0 5。结论 :在适宜深低温条件下冻存脐血造血细胞 ,在一定时间内 ,冻存时间的长短不会导致其增殖潜能下降。

人胎盘血间质干细胞分离培养

目的分离培养人胎盘血间质干细胞(hMSC),为hMSC探寻新来源。方法采用羟乙基淀粉(HES)方法分离、富集胎盘血有核细胞;DMEM培养液体外培养、纯化、扩增hMSC;流式细胞仪检测细胞表面标记;地塞米松、IBMX、胰岛素和吲哚美辛定向诱导hMSC样细胞向脂肪细胞分化。结果胎盘血来源有核细胞,在DMEM体外培养条件下,生长出具有塑料粘附特性的梭形细胞,阳性获得率2917%(7/24),该细胞传代培养达6个月以上;流式细胞仪检测结果显示CD29、CD44、CD59、CD90、CD105、CD166表达阳性,CD14、CD34、CD45、CD80、CD86表达阴性;加入脂肪细胞诱导剂,细胞在形态上向脂肪细胞转化,胞内出现脂滴、脂泡,油红O阳性。结论人胎盘血可以分离培养出hMSC,是hMSC的重要来源。