深圳市性滥妇女性传播感染调查分析

目的 : 了解深圳市公安局收容教育所性滥妇女性传播感染 (STI)情况。方法 : 收集整理 1998～2 0 0 2年 10月深圳市某监测点性滥妇女体检资料及实验室检测资料 ,并作流行病学分析。结果 : 在6 6 73例性滥妇女中 ,共检出性病 1396例 ,检出率为 2 0 .92 %。其中梅毒检出例数最多 ,尖锐湿疣、NGU、淋病等次之。结论 : 性滥妇女性病检出率高 ,是性病传播的主要传染源 ,也是性病防治的重点人群 。

深圳地区发廊从业人员性传播疾病/艾滋病健康教育及行为干预研究

目的 了解深圳市发廊从业人员性传播疾病/艾滋病(STD/AIDS)知识水平现状,评估健康教育及行为干预的效果,改变其不良行为方式,引导正确的求医行为。方法 抽样选择深圳市53家发廊,并对其中的从业人员382人进行基线调查和干预评估,所得资料进行统计分析。结果 调查表明,发廊从业人员属于文化层次较低的一个群体,缺乏对STD/AIDS知识的了解,在性病种类的认识上存在着较大的误区。绝大多数都了解STD/AIDS的传播途径,但对日常生活是否传播艾滋病认识较为模糊,且获取STD/AIDS知识的途径较为单一,她们有较高的安全套使用率和较正确的求医行为。结论 对特殊人群进行健康教育和行为干预能够产生很好的社会效果。

收容教育所妇女性传播疾病流行病学分析

目的 :了解 1997～ 2 0 0 1年深圳市收容教育所妇女性传播疾病 (STDs)流行情况。方法 :收集整理 1997～ 2 0 0 1年深圳市某监测点收容教育所妇女体检资料及实验室检测资料 ,并作流行病学分析。结果 :5 80 0名收容教育所妇女中 ,共检出性病 12 0 2例 ,检出率为 2 0 . 72 %。其中梅毒检出例数最多 ,尖锐湿疣、NGU、淋病等次之。结论 :收容教育所妇女是性病传播的主要传染源 ,也是性病防治的重点人群和控制性病传播流行的关键所在 。

几种提取生殖道常见病原菌DNA方法的比较

目的建立一种快速、有效提取生殖道常见病原菌DNA的方法。方法用3种方法分别提取念珠菌、淋病奈瑟氏菌、生殖支原体、阴道毛滴虫等生殖道常见病原菌的DNA,然后PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳,比较3种DNA提取方法。结果蛋白酶K/SDS法提取DNA质量较好,PCR扩增条带也较清楚,但操作复杂,T riton X-100煮沸法虽提取质量不及蛋白酶K/SDS法,但简便快速。结论对于提取上述病原菌的临床分离株DNA除可采用蛋白酶K/SDS法外,还可采用T ri-ton X-100煮沸法进行提取,不宜采用SDS法提取念珠菌DNA。

梅毒螺旋体部分抗原分子生物学研究进展

近年来,梅毒的发病率正在逐年上升,但梅毒螺旋体(TP)的体外培养至今尚未成功。TP抗原获取困难,从而影响到TP的基础研究、实验室诊断及疫苗研制。随着分子生物学技术的发展,有关TP膜抗原和内鞭毛抗原的理化性质和基因结构等日益明确。这将有利于特异性抗原的获取、提高诊断的特异性和敏感性,也有利于对TP发病机制和疫苗的研究。本文对TP部分抗原分子生物学研究进展作了综述。

PCR-RLB技术同时检测淋病奈瑟菌Opa和16S rRNA基因的研究

目的建立和评价一个新的多重PCR-反向线点杂交技术(RLB)检测淋病奈瑟菌(Neisseria gonorrhoeae,NG)的方法。方法选择NG Opa基因和16S rRNA基因分别设计两对PCR引物,生物素标记下游引物。构建二重PCR扩增NG DNA,然后与固定在尼龙膜上的特异性寡核苷核探针杂交。并对117例经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测的标本进行检测。结果多重PCR两对引物均可扩增3株NG标准菌株DNA,其中Opa和16S rRNA PCR产物的片段长度分别为89bp和414bp。43份FQ-PCR NG阳性标本中31份16S rRNA PCR-RLB阳性,而Opa PCR-RLB均检测为阳性,31份二者均为阳性。74份FQ-PCR NG阴性标本中64例Opa PCR-RLB阴性,73例16S rRNA PCR-RLB阴性,64份二者同时为阴性。结论多重PCR-RLB检测NG是一种简便、快速及有效的方法,为无症状人群NG感染的初筛和准确诊断提供了一种可靠的方法。

都柏林念珠菌感染的实验室诊断进展

都柏林念珠菌是一种新近鉴定的条件致病念珠菌 ,与白色念珠菌很相似。其鉴别主要靠一些选择性培养基 ,如CHROMagarCandida琼脂培养基、甲基蓝 沙保弱氏琼脂培养基等培养及生化鉴定、分子生物技术鉴定。

梅毒螺旋体青霉素结合蛋白的克隆及表达

目的体外克隆并表达梅毒螺旋体青霉素结合蛋白,为制备预防性疫苗奠定基础。方法利用PCR反应及基因重组技术,扩增重编码青霉素结合蛋白的基因,构建重组质粒pETJKM/TpN47,IPTG诱导表达。结果PCR法扩增出了1350bp的目的片段,原核表达质粒pETJKM/TpN47酶切鉴定正确,测序结果与Gengbank上公布的基因序列完全一致,并可在大肠杆菌中高效表达。结论成功构建了人pETJKM/TpN47原核表达载体,高效表达了青霉素结合蛋白,为梅毒的预防性疫苗的制备以及进一步研究其血清学诊断试剂奠定了基础。

梅毒螺旋体重复蛋白K的克隆表达

目的体外克隆并表达梅毒螺旋体重复蛋白K,为制备预防性疫苗奠定基础。方法利用PCR反应及基因重组技术,扩增重复蛋白K编码基因,构建重组质粒pET28b㈩/TprK,IPTG诱导表达。结果PCR法扩增出了1350bp的目的片段,原核表达质粒pET28b㈩/TprK酶切鉴定正确,测序结果与Gengbank上公布的该基因序列完全一致,并可在大肠杆菌中高效表达。结论成功构建人pET28b㈩/TprK原核表达载体,并能高效表达TprK蛋白,为梅毒的预防性疫苗的制备以及进一步研究其血清学诊断试剂奠定了基础。

多重PCR-反向线点杂交技术在检测女性念珠菌和阴道毛滴虫感染中的应用

目的建立和评价多重PCR-反向线点杂交技术(mPCR-RLB)快速同时检测阴道毛滴虫和念珠菌感染的方法。方法分别选择阴道毛滴虫特异性DNA重复序列设计一对特异性引物,以念珠菌属28srRNA至5.8s rRNA间隔序列Ⅱ(ITS2)为靶基因设计一对检测念珠菌的通用引物,构建二重PCR同时扩增阴道毛滴虫、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念球菌、近平滑念珠菌、都柏林念株菌DNA,然后与通过氨基标记固定在尼龙膜上的各特异性寡核苷核探针杂交,并对女性阴道试子标本进行检测。结果多重PCR可同时扩增阴道毛滴虫、白色念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念球菌、近平滑念珠菌、都柏林念株菌临床或标准菌株DNA,上述念珠菌标准菌株可扩增出302～441bp DNA片段,阴道毛滴虫临床株可扩增出262bp DNA片段。6种念珠菌和阴道毛滴虫的特异性寡核苷酸探针可分别与其相应的PCR产物杂交。通过对150例女性阴道试子进行检测,mPCR-RLB检测念珠菌的阳性率为47.33%,阴道毛滴虫的阳性率为6.67%,二者同时阳性率为1.33%。而培养法检测念珠菌阳性率为36.00%,阴道毛滴虫的阳性率为2.00%,二者同时阳性率为0.67%。明显高于培养法(P<0.05)。结论多重PCR-RLB可快速同时检测念珠菌和阴道毛滴虫,为女性阴道炎的临床诊断提供了一种可靠的方法。

PCR反向线点杂交鉴定常见念珠菌的研究

目的建立PCR反向线点杂交技术(PCR-RLB)快速检测和鉴定常见念珠菌的方法。方法以念珠菌属间隔序列Ⅱ(ITS2)为靶基因设计通用引物,用生物素标记反义引物,PCR扩增白念珠菌、热带念珠菌、克柔念珠菌、光滑念球菌、近平滑念珠菌、都柏林念珠菌DNA,然后与通过氨基标记固定在尼龙膜上的各特异性寡核苷酸探针杂交,并进行临床标本和分离株的检测。结果念珠菌标准菌株可扩增出302～441 bp DNA片段,6种特异性寡核苷酸探针可分别与相应念珠菌PCR产物杂交,其敏感性为10 cfu/mL。通过对100例分离株的检测,然后与培养法鉴定(Merieux Vitek)的结果比较,有97株与培养结果一致,另外3株通过DNA测序结果证实与PCR-RLB测定结果一致。通过对200例女性阴道拭子进行检测,PCR-RLB阳性率为49%,而涂片法和培养法阳性率分别为27%和39%,明显高于涂片法和培养法(P<0.05)。结论该方法可快速、敏感、准确鉴定临床上常见的念珠菌。

阴道毛滴虫的实验诊断研究进展

阴道毛滴虫(trichomonas vaginalis,TV)感染是一种十分常见的性传播疾病。人群普遍易感,除引起泌尿生殖道感染外,还是增加HIV感染和诱发宫颈癌的危险因素之一。因此,TV早期诊断十分重要,其能有效减少TV的传播。然而,其早期诊断主要靠实验诊断,包括病原学、免疫学、分子生物学等。

膜芯片技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体、淋病奈瑟菌和3种支原体的方法学研究

目的建立和评价一个新的多重PCR-反向线点杂交技术(RLB)快速同时检测泌尿生殖道沙眼衣原体(Ct)、淋病奈瑟菌(Ng)和3种支原体感染的方法。方法分别选择Ct隐蔽质粒和Ng 16S rRNA基因设计两对特异性引物,以支原体内转录间隔序列(ITS)设计一对支原体属通用引物,生物素标记下游引物。构建三重PCR同时扩增Ct、Ng、解脲脲原体(Uu)、微小脲原体(Up)、人型支原体(Mh)等菌DNA,然后与固定在尼龙膜上的各特异性寡核苷酸探针杂交。并对142份经荧光定量PCR(FQ-PCR)检测Ct和Ng的性病高危人群标本,以及45份经支原体液体培养法鉴定的标本进行检测。结果多重PCR可同时扩增Ct、Ng、Uu、Up和Mh标准菌株DNA,其PCR产物的片段长度为208～408 bp。97份FQ-PCR Ct阳性标本中有93份经多重PCR-RLB检测为Ct阳性,45份FQ-PCR Ct阴性标本中35份多重PCR-RL8阴性。41份EQ-PCR Ng阳性标本中34份多重PCR-RLB Ng阳性,101份FQ-PCR Ng阴性标本中98份多重PCR-RLB阴性。其中36份经多重PCR-RLB检测为混合感染。32份支原体液体培养阳性标本中28份多重PCR-RLB阳性,13份支原体培养阴性标本经多重PCR-RLB检测均为阴性。结论多重PCR-RLB可快速同时检测Ct、Ng、Uu、Up和Mh,为性传播疾病的临床诊断提供了一种可靠的方法。