人胚胎干细胞表达生殖细胞分化相关基因的研究

目的探讨人胚胎干细胞(hES)系H1生殖细胞分化相关基因的表达。方法免疫荧光、碱性磷酸酶检测和核型分析等方法联合鉴定H1的基本生物学特性,RT-PCR方法检测未分化H1的生殖细胞分化相关基因的基本表达模式,分别以人正常睾丸组织和人胚胎成纤维细胞株HFF-1作为阳性和阴性对照组织。结果H1保持正常核型并维持未分化状态。未分化H1表达减数分裂前生殖细胞标志基因STELLAR、DAZL、FRAGILIS、PUM1、PUM2和GDF3;不表达原始生殖细胞(PGCs)标志基因BLIMP-1、减数分裂特异标志基因SCP1、减数分裂启动标志基因STRA8以及生殖细胞分化后期标志基因VASA。结论未分化H1细胞表达生殖细胞减数分裂前标志基因,但不表达分化后期基因,BLIMP-1可能成为区分未分化hES细胞与PGCs的特异性标志基因。

细胞因子对鸡胚胎原始生殖细胞(EPGCs)增殖的影响

采用MTT法分别检测mLIF、bFGF、hSCF、hIL-11四种细胞因子协同作用对体外培养的第19、28期鸡EPGCs生长的影响。结果表明与对照组相比较,19期的EPGCs体外培养72h后,mLIF、hSCF、bFGF、hIL-11对鸡EPGCs的增殖影响显著（P〈0.05）。mLIF的最佳作用剂量是10-20ng/ml,hSCF的最佳作用剂量是15-20ng/ml,bFGF的最佳作用剂量是10-20ng/ml。hSCF、bFGF的联合使用优于单因子作用的结果（P〈0.05）。单独使用hIL-11时,细胞的增殖情况比其他三因子单独使用的效果较差,但OD均值有随剂量增高而上升的趋势。在与其他因子联合使用的情况下,hIL-11的最佳作用剂量为0.10-0.20ng/ml。

精子顶体相关基因DKKL1在正常人和男性不育患者睾丸组织中的表达差异

目的:研究精子顶体相关基因DKKL1在正常人和男性不育患者睾丸组织中的表达差异。方法:采用RT-PCR和Western Blot方法检测DKKL1基因在人多组织中的表达特征,并比较其在正常人和男性不育患者睾丸组织中的表达差异。采用免疫组化方法分析DKKL1蛋白在正常和男性不育患者睾丸组织中的表达差异。结果:人多组织RT-PCR和Western Blot结果显示DKKL1基因为睾丸组织特异性表达,与正常人睾丸组织比较,DKKL1基因在男性不育患者睾丸组织中表达减弱或消失。免疫组化结果显示DKKL1蛋白主要定位在正常男性睾丸的精母细胞和圆形精子细胞,而在唯支持细胞综合征(SCOS)和隐睾患者睾丸组织中不表达,在各种生精细胞阻滞患者的睾丸中观察到不同的表达特征。结论:DKKL1基因在男性不育患者睾丸组织中对精子发生可能具有重要作用,其表达降低或消失可能是男性不育症发生的重要原因之一。

前列腺癌中TMPRSS2-ETS基因融合及机制研究进展

超过50%的前列腺癌中存在跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)和E26(ETS)转录因子间的基因融合,其中TMPRSS2-ERG最为常见。TMPRSS2-ERG基因融合造成的ERG过表达参与了前列腺的癌变。雄激素受体结合和遗传毒性胁迫共同诱导了染色体的靠近和TMPRSS2-ETS的基因融合。TMPRSS2-ERG基因融合可作为前列腺癌诊断的一种生物标志物,并可通过病人尿液检测来实现。文章对TMPRSS2-ETS基因融合的特征、融合及致癌及临床应用进行了综述。

Daxx基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:研究死亡结构域相关蛋白(Daxx)基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征,初步探讨其在生精过程中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR(q PCR)、Western印迹及免疫荧光等方法检测Daxx在不同周龄野生型小鼠睾丸组织以及成年睾丸支持细胞雄激素受体特异性敲除(SCARKO)和雄激素受体敲除(ARKO)小鼠睾丸中的表达特征。结果:q PCR、Western印迹和免疫荧光结果表明,Daxx基因在出生4周后小鼠睾丸中高表达,且主要定位于细胞核;与野生型小鼠相比,SCARKO小鼠睾丸中DAXX的表达差异不显著(0.853±0.058 vs1.000±0.015),但在生精细胞细胞核中呈极性分布;DAXX在ARKO小鼠睾丸表达显著降低(0.299±0.026 vs1.000±0.015,P<0.01)。结论 :Daxx基因在小鼠睾丸发育中期时表达最高。ARKO小鼠中DAXX的表达与野生型相比显著降低,睾丸支持细胞中AR基因特异性敲除影响DAXX定位。DAXX可能参与调控小鼠的精子发生过程。

新基因TSG23在正常和无精子症睾丸组织中的表达差异

目的研究TSG23基因在正常和无精子症睾丸组织中的表达差异。方法应用PCR方法检测TSG23基因在人和小鼠多组织中的表达特征,并比较其在正常和无精子症睾丸组织中的表达差异。结果 PCR结果显示TSG23为睾丸组织特异性表达。与正常睾丸组织比较,TSG23基因在无精子症睾丸组织的表达减弱或消失。结论 TSG23基因对精子发生可能具有重要作用,其表达降低或消失可能是男性不育症发生的重要原因之一。

人睾丸特异性基因蛋白抗体制备及其在无精症睾丸组织中的表达

目的探讨人睾丸特异性基因(TSC21)蛋白在无精子症患者睾丸组织中的表达特征。方法构建人pET32a-TSC21表达载体,转化到感受态BL21细菌,诱导表达并纯化TSC21蛋白;免疫小鼠,制备抗人的TSC21多克隆抗体;应用免疫组化方法检测TSC21在健康者睾丸组织和生精阻滞患者睾丸组织中的表达差异。结果成功制备人TSC21的鼠源性多克隆抗体;TSC21蛋白在健康者睾丸组织中主要定位于精母细胞和圆形精子细胞;在生精阻滞的无精症患者中表达减弱。结论 TSC21蛋白对于睾丸发育和精子发生可能具有重要作用,其表达降低可能是男性不育症发生的重要原因之一。

1700008O03Rik基因在小鼠睾丸中的表达特征及生物信息学分析

目的:研究1700008O03Rik(RIKEN cDNA 1700008O03)基因在B6小鼠睾丸中从出生到性成熟过程的表达特征,并初步探讨其参与调控小鼠精子发生的作用。方法:小鼠基因表达谱芯片筛选得到睾丸特异性基因1700008O03Rik,本研究采用反转录PCR、实时定量PCR、Western印迹、免疫组化及免疫荧光等实验方法,检测1700008O03Rik基因在小鼠睾丸发育中的表达特征,并用生物信息学方法作相关分析。结果:1700008O03Rik基因在小鼠睾丸中高表达,且呈鼠龄依赖性增加;免疫组化结果表明其主要表达于长形精子胞浆。生物信息学分析结果显示人和小鼠的1700008O03Rik蛋白序列高度同源,进化树分析结果表明从低等哺乳动物到高等哺乳动物1700008O03Rik蛋白均高度保守。结论:1700008O03Rik为小鼠睾丸高表达基因,且主要表达于长形精子胞浆,其可能参与调控小鼠精子的成熟过程。

精子蛋白Ropporin的研究进展

Ropporin一直以来被认为是精子细胞特异性蛋白,在睾丸组织中特异性表达,并参与精子的运动、获能、顶体反应等生理活动。然而,新的研究表明Ropporin在正常的非睾丸组织也有微弱表达,而且作为一种新的肿瘤睾丸抗原(CT抗原)在恶性血液病的肿瘤细胞中高表达。Ropporin在哺乳动物中的表达具有高度保守性,说明它对生命的重要性。本文就Ropporin的特性、表达与分布、生理学功能及临床研究的新进展进行了综述。

癌症基因组学：机遇和挑战

癌症是人类的第二大致死疾病，每年全球约有13％的病患死于癌症，如2007年全世界有760万死亡病例，因此严重威胁人类健康。随着社会的发展．环境问题和老龄化问题将使癌症问题更显突出．一方面它造成人们生活质量的下降，另一方面也增加了全社会的经济负担。

汽车尾气对男性生殖功能的影响

近半个世纪以来，正常男子精子密度平均减少了40％-50％，而且精子数量还在以每年2％的速度下降，将来男性不育症发生率可能高于目前文献报道的12％-15％，甚至达到30％以上。1994年在开罗召开的国际人口与发展大会上提出了“2015年人人享有生殖健康”的宏伟目标。全世界都很重视对男性生殖的研究，其中环境污染对男性生育力的影响是目前研究的热点，国家“973”重大科学研究计划2008年重要支持方向中明确指出：“影响男性生育异常的环境和遗传因素，重点研究环境因素、遗传因素所导致男性不育与出生缺陷的机制，

1700001O22RIK基因在小鼠睾丸的特异表达及生物信息学分析

目的:研究1700001O22RIK(RIKEN c DNA 1700001O22)基因在小鼠睾丸的表达特征,结合生物信息学分析初步探讨其功能。方法:通过分析小鼠基因表达谱芯片,发现1700001O22RIK基因特异性表达于睾丸组织。采用RT-PCR、实时PCR、Western印迹及免疫组化等方法分析该基因在成年C57BL/6J小鼠各组织中的表达特征,以及不同发育阶段小鼠的睾丸组织中的表达变化。利用生物信息学软件对该基因进行相关生物信息学分析。结果:1700001O22RIK基因在小鼠睾丸组织中呈现特异性表达,表达水平具有年龄依赖性,在成年期表达最强;1700001O22RIK蛋白在成年小鼠睾丸组织中主要定位于精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞。经生物信息学分析,1700001O22RIK基因编码蛋白氨基酸序列在人和小鼠具有高度同源性,提示该基因在哺乳动物进化过程中十分保守。结论:1700001O22RIK属于睾丸特异性基因,主要表达于生精小管的精原细胞、精母细胞及圆形精子细胞,提示其可能参与精子发生的调节。

Ccdc70基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:探讨Ccdc70(Coiled-coil domain containing 70)基因在小鼠睾丸中的表达特征并分析其在生精过程中的潜在功能。方法:经表达谱芯片筛选出小鼠睾丸特异性基因Ccdc70,通过RT-PCR、real-time PCR、Western印迹及免疫组化检测Ccdc70基因在成年小鼠睾丸中表达特征,并对该蛋白做相关的生物信息学分析。结果:RT-PCR、real-time PCR和Western印迹结果表明Ccdc70基因在小鼠睾丸中高表达,在附睾中低表达;免疫组化结果表明Ccdc70蛋白在睾丸中主要表达于小鼠精母细胞和圆形精子胞质,在附睾中主要表达在附睾管上皮细胞。生物信息学分析显示该蛋白存在一个CCDC结构域,并在哺乳动物进化过程中高度保守。结论:Ccdc70为小鼠睾丸高表达基因,且主要表达于精母细胞、圆形精子及附睾管上皮细胞,提示其可能参与调控小鼠精子发生过程及附睾精子的进一步成熟。

小鼠睾丸支持细胞的分离培养

为了分离小鼠睾丸支持细胞并进行鉴定,试验采用胶原酶、透明质酸酶和胰蛋白酶分步消化法分离小鼠睾丸支持细胞,用细胞免疫荧光染色鉴定细胞。结果表明:在分离培养的细胞中,支持细胞占培养细胞的95%以上。说明试验成功分离和鉴定了小鼠睾丸支持细胞。

机动车尾气雄性生殖毒性的研究进展

本文主要从机动车尾气对动物、动物后代的生殖毒性及人群流行病学研究以及人类对机动车尾气生殖毒性的保护性研究等方面，就机动车尾气对雄性生殖毒性的研究最新进展进行了综述，旨在对机动车尾气的生殖毒性有更全面的认识。

Mm.158494基因在白消安引起的无精子症小鼠中的表达

目的建立一个小鼠无精子症模型,并探讨Mm.158494基因在无精子症中的表达及意义。方法建立无精子症小鼠模型,观察小鼠睾丸生精小管结构的变化。筛选与精子发生相关的睾丸特异性新基因,利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析,RT-PCR分析该基因在无精子症小鼠睾丸中的表达。结果生物信息学分析发现Mm.158494基因cDNA序列全长1046bp,含有762bp的完整开放阅读框。编码253个氨基酸、分子量为29.432kDa的蛋白质。小鼠无精子症模型中微弱表达Mm.158494基因。结论Mm.158494基因在无精子症中表达明显降低,提示该基因可能在精子发生中起重要作用。

SEPT11基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的初步探讨Septin11(SEPT11)基因在精子发生中的作用。方法通过实时定量PCR、蛋白免疫印迹及免疫荧光等方法检测SEPT11在不同周龄野生型小鼠以及成年睾丸支持细胞激素受体(Ar)特异性敲除小鼠(SCARKO)和Ar全敲除(ARKO)小鼠睾丸中的表达特征。结果 SEPT11基因小鼠出生2周内高表达,随后表达水平降低,出生6周后出现并与未释放的成熟精子共定位且高表达。与野生型小鼠相比,SEPTIN11在SCARKO小鼠和ARKO小鼠睾丸中表达降低(P<0.01),m RNA水平显著升高(P<0.01);SEPTIN11在成熟精子中定位于尾部。结论 SEPT11基因在小鼠出生时表达最高;SEPTIN11在小鼠成熟精子中定位于尾部;Ar的敲减提高了SEPT11的表达。

精子顶体小泡蛋白-1(ACRV1)在小鼠睾丸组织中的表达与定位

目的:研究精子顶体小泡蛋白-1(ACRV1)在小鼠睾丸组织发育过程中的表达特征。方法:将4 d、9 d、18 d、35 d、54 d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的ACRV1基因。采用RT-PCR方法检测ACRV1基因在小鼠不同日龄和不同组织中的表达情况,采用免疫组织化学方法检测ACRV1蛋白在小鼠睾丸组织中的定位。结果:对Affymetrix全基因组芯片杂交结果分析后,筛选得到1个差异表达杂交点,通过在NCBI网站与小鼠全基因组序列Blast分析可知该差异表达基因是ACRV1基因。RT-PCR结果表明ACRV1 mRNA呈小鼠睾丸特异性表达,在出生31 d小鼠睾丸开始高表达,在成年前达到高峰。ACRV1蛋白主要定位在睾丸圆形精子和长形精子细胞。结论:ACRV1基因存在发育的表达调控,为小鼠年龄依赖性表达基因,其表达与小鼠精子发生的过程有很强的一致性,且具有睾丸特异性表达的特征,因此推测该基因可能在精子发生中具有关键作用。

睾丸特异性基因BAFL在人和小鼠中的表达及其生物信息学分析

目的筛选与精子发生相关的基因。方法将4d、9d、18d、35d、54d和6月龄小鼠睾丸组织cDNA探针与Affymetrix全基因组芯片进行杂交,筛选出差异表达的基因。利用网络信息资源对该基因进行生物学信息分析。RTPCR分析该基因在小鼠睾丸不同发育阶段4d、9d、11d、14d、18d、21d、38d、6月龄及人和小鼠不同组织心、肝、脾、肺、肾、脑、附睾和睾丸中的表达。结果芯片结果分析筛选出1个差异表达杂交点,生物信息学分析发现该差异点是BAFL基因,该基因全长527bp,含有273bp的完整ORF,编码90个氨基酸、相对分子量(Mr)为10.266kDa的蛋白质。RT-PCR分析表明小鼠mBAFL基因在小鼠21d龄睾丸及之前没有表达,在35d龄睾丸后开始高表达并特异性地表达于睾丸组织。人hBAFL基因在所检测的8种组织中,也只在睾丸组织中表达。结论 BAFL基因为睾丸特异性基因,小鼠mBAFL的表达与小鼠精子发生的过程一致,可能在精子发生中起重要作用。

SPACA4基因在人和小鼠的表达及其生物信息学分析

目的 分析SPACA4在小鼠和人的表达特性.方法 本研究通过对小鼠SPACA4基因（mSPACA4）在4、9、18、35、54d和6月龄小鼠睾丸中的Affymetrix芯片杂交,结合RT-PCR实验和生物信息学软件,分析mSPACA4及其同源基因hSPACA4的表达特性.结果 芯片杂交结果显示,mSPACA4基因在小鼠35d睾丸中开始表达,半定量RT-PCR结果与之完全一致.RT-PCR结果还显示,mSPACA4和hSPACA4分别在8种小鼠组织和10种人组织中呈现睾丸特异性表达.生物信息学分析显示,亚细胞定位预测该基因是跨膜蛋白（34.8%）或质膜上（34.8%）表达.mSPACA4蛋白的信号肽剪切位点在第19～20个氨基酸之间,跨膜区在第2～20及101～126个氨基酸之间.结论 mSPACA4和hSPACA4均为睾丸特异性表达基因,mSPACA4特异性地在35d龄后的小鼠睾丸中表达,SPACA4具有作为男子避孕药的靶点进行研究的潜在价值.