钠离子荧光探针用于检测雪卡毒素的细胞毒性

目的研究和建立以细胞为基础的结合钠离子荧光探针检测雪卡毒素的方法,为快速、敏感检测雪卡毒素提供科学的实验依据。方法采用雪卡毒素标准品(P-CTX-1)结合乌苯苷和黎芦定处理小鼠脑神经瘤细胞(N-2A),用钠离子荧光探针(CoroNaTM Green)标记细胞,利用多功能酶标仪检测荧光强度,建立雪卡毒素浓度与荧光强度的标准曲线关系式;同时,采用CCK-8法和酶标仪检测毒素处理组细胞的存活率,建立细胞毒性实验的标准曲线关系式;分析比较两种方法的灵敏度。以两种方法分别对采集的33份深海珊瑚鱼样品进行毒素检测,对检测结果作分析比较。结果以细胞为基础的荧光检测法检测样品中毒素的检出限为10-13 g/ml,而细胞毒性试验检测法检测样品中毒素的检出限为10-12 g/ml,其结果具有一定的相关性,且荧光检测法灵敏度比细胞毒性试验高;同时钠离子荧光探针检测法的实验终点比CCK-8法缩短2～4 h。结论以细胞为基础的结合钠离子荧光探针检测法能快速、敏感地检测雪卡毒素,可作为雪卡毒素检测初筛方法推广应用。

不同粒径二氧化硅对人永生化表皮细胞抗氧化酶基因mRNA表达水平的影响

目的探讨经不同粒径二氧化硅染毒人永生化表皮(HaCaT)细胞后,细胞内氧化应激相关的过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽还原酶(GSR)和超氧化物歧化酶(SOD-1)的mRNA表达水平的变化。方法对数生长期的HaCaT细胞分别经不同浓度(5,10,15 mg/L)、不同直径(15、30、100nm)二氧化硅粉尘处理24 h后,采用实时荧光定量PCR(RT-Q-PCR)检测CAT、GSR和SOD-1基因mRNA的表达水平。结果与对照组相比,各粒径二氧化硅染毒均能诱导HaCaT细胞CAT、GSR和SOD-1基因的mRNA表达水平发生明显变化。其中,CAT的mRNA表达水平在15 nm组和30 nm组随染毒浓度的增加明显下降;GSR的mRNA表达水平在各颗粒组中均随二氧化硅颗粒浓度的增加呈现明显的下降趋势;SOD-1的mRNA表达水平随二氧化硅颗粒浓度的增加呈现波动趋势。结论在一定剂量范围内,不同粒径二氧化硅染毒可以诱导细胞内CAT、GSR和SOD-1基因mRNA表达水平改变,推测这些改变可能参与二氧化硅的细胞毒性反应。

作用钠离子通道海洋生物毒素的研究及检测进展

离子通道类毒素是一类特异性作用于离子通道的神经毒素,而海洋生物毒素中有许多毒素都是通过作用于Na+通道蛋白来影响与受体有关的一系列细胞调控活动,它们以其独特的化学结构和毒理特性,将成为21世纪研究与开发海洋资源的重要组成部分。本文就海洋生物中几种主要的Na+通道受体神经毒素及其检测技术做一概述,为其研究提供科学参考。