深圳地区2002-2008年副溶血弧菌分子特征研究

目的 了解深圳地区副溶血弧菌主要血清型和分子分型以及毒力因子分布,分析新O3：K6型克隆群与国际流行株的进化关系.方法 对2002-2008年深圳地区1005株副溶血弧菌临床分离株进行血清型分型；采用荧光PCR方法对68种不同血清型的28 1株副溶血弧菌进行tlh、toxR、tdh和trh毒力基因检测；对281株菌株进行orf8检测；采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）对不同分离时间的5种主要血清型菌株进行分子分型,根据有代表性的分子分型图谱选取82株副溶血弧菌菌株进行GS-PCR检测,并选取60株副溶血弧菌菌株进行toxRS基因测序；进而对41株O3∶K6和O1∶K25副溶血弧菌菌株进行多位点序列分型（MLST）分析,采用eBURST软件分析进化关系.结果 1005株菌共得到79种不同的血清型,主要血清型为O3∶K6、O4∶K8、O1∶K25、O1∶KUT、O4∶K68、O1∶K56和O9∶K44,所占比例分别为57.9％、8.16％、5.27％、5.87％、1.39％、1.39％和0.99％.243株为tlh＋、toxR＋、tdh＋、trh-,37株为tlh＋、toxR＋、tdh-和trh-,1株tlh＋、toxR＋、tdh＋和trh＋.35株O3∶K6型菌株的MLST序列类型为ST3,是同源复合体CC3,O4∶K8型副溶血弧菌的序列类型为ST189,无同源复合体.结论 深圳地区主要流行的副溶血弧菌为tdh＋、trh-的O3∶K6、O4∶K8和O1∶K25菌株,2006年后出现O1∶K56、O9∶K44、O3∶K29、O4∶K9新的血清型；其中O3∶K6血清型属于新的O3∶K6克隆群,与其他国家流行的副溶血弧菌属于同一克隆群,同时也存在新、旧克隆群.血清的多样性和新旧克隆群的存在是造成深圳地区副溶血弧菌腹泻病高发态势的主要原因之一.

致腹泻奇异变形杆菌病原学及其分子特征研究

目的：研究致腹泻奇异变形杆菌病原学特征及毒力基因和质粒携带情况，探讨其与耐药性/致病性的关系。方法对6株不同来源（食物中毒、外环境及健康人群）的奇异变形杆菌进行生化、药敏和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析；PCR检测常见的毒力基因；提取质粒后电泳并切胶回收质粒进行测序分析。结果不同来源的奇异变形杆菌生化特征基本相同，且均具有常见的毒力基因ureC、rsmA、hpmA和zapA。但各菌株PFGE分型和药敏结果不同，其携带质粒情况也各异。对其中2株菌存在的小质粒测序后发现，该质粒长2683 bp，主要编码qnrD基因，与耐喹诺酮类药物相关。结论采用传统的生化分析及常见的毒力基因鉴定方法，无法区分不同来源的奇异变形杆菌，可利用PFGE和质粒分析。耐药菌株中普遍存在的质粒与菌株的耐药性相关，存在多个质粒的菌株其耐药性更强。

M肉汤法在沙门菌血清分型中的应用

目的建立一种简便快捷的沙门菌H抗原诱导方法,用于沙门菌的血清分型。方法将沙门菌接种于M肉汤过夜培养进行鞭毛诱导,吸取少量再次进行M肉汤2次诱导,取诱导后的肉汤进行沙门菌血清型鉴定,同时用血平板-滤纸条搭桥法和软琼脂法比对。结果 30株沙门菌同时用3种不同的方法诱导,应用M肉汤法一般1-2次都能鉴定出来,效果比搭桥法和软琼脂法好。应用M肉汤法对369株沙门菌进行血清分型,诱导1次的分型率为81.30%,诱导两次的分型率为97.02%。结论 M肉汤法操作简单、方便、成本低,诱导效果好,适合用于沙门菌血清分型鉴定。