利用Gap-PCR技术鉴定1例罕见的巴氏水肿胎儿

目的运用Gap-PCR技术对罕见的缺失型珠蛋白生成障碍性贫血进行基因分析鉴定。方法用XE-2100血细胞分析仪对一对夫妻的静脉血标本进行检测,并用毛细管电泳分析仪Capillarys2对夫妻的静脉血和胎儿脐带血进行分析。最后用珠蛋白生成障碍性贫血商品试剂盒和实验室配置的试剂进行珠蛋白生成障碍性贫血基因分析。结果血细胞分析显示,夫妻二人的红细胞参数为小细胞低色素型细胞,而血红蛋白电泳分析结果正常。胎儿血红蛋白分析显示,HbH带1.0%,HbBart′s带90.9%,HbF带4.5%,HbA带2.1%,另有一条不明快速带1.5%。珠蛋白生成障碍性贫血基因Gap-PCR分析,丈夫为东南亚型缺失珠蛋白生成障碍性贫血,妻子为泰国型缺失珠蛋白生成障碍性贫血,胎儿为泰国型缺失合并泰国型缺失珠蛋白生成障碍性贫血。结论 Gap-PCR技术可以用于鉴定未知缺失突变的珠蛋白生成障碍性贫血基因型。

不同用量BigDye在HBV测序检测中的效果分析

目的 :通过减少测序反应中 Big Dye的用量 ,以降低 DNA测序的检测成本。方法 :6 4份 HBV DNA阳性血清随机分成两组 (试验组、常规组 ) ,两组血清均用 DNA测序法进行检测。其中 Big Dye的用量试验组为 1μL,常规组为 2μL。结果 :试验组 2 9份满意 ,常规组 30份满意 ,P>0 .0 5 ,两组阳性率相同。结论 :测序反应中 ,Big Dye的用量从 2 μL减少至 1μL 效果仍然满意 ,这是降低 DNA测序成本的有效方法。

HBV DNA及BCP、Pre-C突变株基因芯片检测方法的构建

目的 构建HBVDNA及BCP、Pre C突变株的基因芯片检测方法。方法 该基因芯片检测方法使用了PCR、寡核苷酸芯片二项技术 ,包含了对nt1896、nt 1899、nt186 2、nt176 4、nt176 2五个突变热点的检测 ,并用DNA测序法对该基因芯片进行验证。结果 该基因芯片检测HBVDNA方面结果与DNA测序法 10 0 %相符 ;检测突变株方面 14 6个位点两种方法结果相符 ,4个位点结果不相符 ,P >0 0 5。结论 该基因芯片具有便捷、高通量的特点 ,能同时检测多个BCP、Pre C突变位点。结果提示该基因芯片和DNA测序法检测结果阳性率相等 ,特异性与DNA测序法相当 ,检测混合株有更大优势 ,可用于临床检测。

基因芯片高通量检测乙型肝炎病毒拉米夫定耐药株及对其突变热点的分析

目的 通过大规模、多位点检测深圳地区拉米夫定耐药株,进一步了解拉米夫定耐药突变的各种分布状况。 方法 用基因芯片法对552份乙型肝炎患者血清进行检测,得出192份拉米夫定耐药突变标本,再对192份耐药标本检测结果进行分析。 结果 192份耐药标本中,191份YMDD突变,124份528位点突变,9份555位点突变。YMDD突变中88％为:YVDD、528位点同时突变;YIDD单独突变;YIDD、528位点同时突变。YMDD突变密码子91％为:GTG、ATT;9％为:ATA、ATC。 结论 552位点(YMDD)突变为核心突变,528、555位点的突变为协同突变。YVDD突变总是与528位点同时出现;YIDD突变则表现为多样化。YMDD突变密码子约有9％为少见密码子ATA、ATC,这可能是传统聚合酶链反应法检测YMDD突变阳性率较低的原因。

基因芯片技术检测HBV DNA及拉米夫定耐药株的应用研究

目的 :研究基因芯片技术检测 HBV DNA及拉米夫定耐药株在临床应用中的特异性、实用性。方法 :利用基因芯片法、双脱氧测序法分别对 4 3例服用拉米夫定且 HBV DNA仍为阳性的乙型肝炎 (乙肝 )患者及 10例非乙肝患者的血清进行 HBV DNA和 P区 5 2 8、5 5 2、5 5 5突变位点检测、对比。结果 :两种方法检测 HBV DNA10 0 %相符 ;检测拉米夫定耐药突变株 12 4个位点结果相符 ,5个位点结果不相符 (P >0 .0 5 ) ,提示两种方法检测HBV DNA及 P区 5 2 8、5 5 2、5 5 5突变位点阳性率相等。结论 :利用基因芯片技术检测 HBV DNA及拉米夫定耐药株 ,其特异性可与 DNA测序媲美 ,在混合株检测方面比 DNA测序有更大的优势。其方法简便 ,能大量地对临床标本进行检测 ,可作为临床常规检测手段。

HBV拉米夫定耐药株及BCP、Pre—C突变株芯片检测方法的应用研究

目的构建针对HBV拉米夫定耐药株及c区启动子（basal core promoter，BCP）、前C区（Pre-C）突变株，多位点突变的基因芯片检测方法。并与DNA测序法比较，以了解该芯片的灵敏度、特异性、稳定性等性能并初步应用于临床实践。方法该基因芯片能对HBVDNA及P区（DNA多聚酶区）：180、204、207三个拉米夫定耐药突变位点；C区启动子（basal core promoter，BCP）及前C区（Pre—c）：nt1896、nt1899、nt1862、nt1764、nt17625个突变热点，共8个HBV突变位点进行检测，并用测序法对该基因芯片进行验证。结果①检测HBVDNA方面，两种方法检测结果100％相符。②检测突变位点方面：总体统计32份阳性血清共有256（32×8）个突变位点。两种方法检测结果有251个突变位点完全相符；5个突变位点不完全相符，基因芯片法检测为混合型，测序法检测为野生型或突变型之一。结论结果提示该基因芯片和DNA测序法检测结果阳性率无差异，特异性与DNA测序法相当，检测混合株有更大优势。