EGFP在EGFP/GDNF融合基因修饰骨髓基质干细胞中的示踪作用

目的 探索增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)能否作为标记基因追踪胶质源性神经生长因子(GDNF)基因修饰的骨髓基质干细胞 (MSC)在体内外的存活、生长、分化和表达外源目的基因的情况。方法 应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法从新生小鼠大脑皮质细胞克隆出GDNFcDNA片断 ,连入pEGFP C1载体 ,构建表达EGFP和GDNF融合蛋白的质粒并转染MSC ,将稳定表达EGFP GDNF基因的细胞株植入小鼠纹状体。用荧光显微镜和免疫组织化学的方法在体内外观察MSC。结果 成功制备EGFP GDNF融合基因修饰的MSC工程细胞 ,免疫组织化学方法检测显示GDNF呈强阳性 ,在体内外MSC工程细胞均发出明亮的绿色荧光 ,并且绿色荧光可反映细胞形态学变化。结论在EGFP GDNF融合基因修饰的MSC工程细胞中EGFP可作为标记基因同时标记GDNF和MSC。

玻璃体腔注射雷珠单抗治疗老年性黄斑变性前后的护理分析

目的：分析玻璃体腔注射雷珠单抗治疗老年性黄斑变性前后的护理方法,观察效果。方法：选取2013年8月-2014年12月到我院就诊的78例（102眼）患者为研究对象,均采用玻璃体腔注射雷珠单抗治疗,采用抽签方式,将患者分为对照组（39例,50眼）和观察组（39例,52眼）,对照组予以常规护理,观察组在常规护理基础上实施护理干预,对比两组护理效果。结果：1护理后,观察组SAS和SDS评分均显著低于对照组（P〈0.05）;2观察组护理总满意度（97.44%）明显高于对照组（82.05%）（P〈0.05）。结论：在应用玻璃体腔注射雷珠单抗治疗老年性黄斑变性的常规护理中实施护理干预,效果明显,值得临床推广。

RNA干扰真核表达载体pEGFP-H1介导的血管内皮生长因子shRNA治疗人胶质瘤的实验研究

目的 构建针对血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹环RNA(shRNA)质粒(pEGFPH1 /VEGF),观察其在体内和体外对胶质瘤细胞株U251生长的抑制作用。方法 应用PCR构建携带绿色荧光蛋白(EGFP)基因的RNA干扰真核表达载体pEGFP- H1,并利用该载体介导VEGFshRNA。用阳离子脂质体转染U251细胞,通过荧光显微镜和流式细胞仪观察EGFP的表达,用RT- PCR检测VEGFmRNA的表达,以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测培养液中VEGF蛋白的含量。同时筛选转染pEGFP- H1和pEGFP- H1 /VEGF的U251稳定细胞株,制备裸鼠U251细胞移植瘤模型,观察肿瘤生长情况。结果 与空载体转染组相比, pEGFP- H1 /VEGF对VEGF的抑制率达77. 9%。对照组和pEGFP -H1组裸鼠肿瘤重量分别为1 .7g±0 4g和1 .5g±0 .7g,体积分别为1573mm3 ±330mm3 和1430mm3 ±382mm3,两组之间重量和体积差异均无统计学意义(P>0 .05 ),而pEGFP- H1 /VEGF组肿瘤重量为0 .5g±0 .4g,体积为401mm3 ±272mm3,与对照组比较差异有统计学意义(P<0. 01)。结论 pEGFP H1介导的VEGFshRNA能有效抑制U251细胞中VEGF的表达,并在体内抑制肿瘤生长。