肥大细胞瘤小鼠异基因造血干细胞移植的急性移植物抗宿主病动物模型的建立和评价

目的:初步探索应用环磷酰胺预处理建立异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的急性移植物抗宿主病(a GVHD)动物模型的可行性。方法:以C57/BL/6鼠(B6鼠)为供鼠,B6D2F1鼠(F1鼠)为受鼠,将F1鼠随机分为a GVHD组(Ⅰ组)、肿瘤组(Ⅱ组)和空白组(Ⅲ组),Ⅰ、Ⅱ组均于allo-HSCT予环磷酰胺300 mg/m2·d-1,d-5^-3腹腔注射,Ⅲ组则予等体积的生理盐水腹腔注射;预处理后,Ⅰ组F1鼠经尾静脉注射肥大细胞瘤P185细胞(白血病细胞)、B6鼠的骨髓、脾脏细胞三者的混合液,Ⅱ组小鼠注射肥大细胞瘤P185细胞,Ⅲ组注射等体积的RPMI-1640培养基,随后观察各组小鼠的一般情况及a GVHD发病情况。结果:环磷酰胺预处理后,Ⅰ组小鼠均出现a GVHD,其中4只死于a GVHD,8只存活且a GVHD临床评分1~6分,小鼠出现皮肤受损、耸毛等表现,病理表现为大量的淋巴细胞浸润;Ⅱ组小鼠于第18天内全部死亡,出现后肢的麻痹等表现,病理表现为大量的肿瘤细胞浸润肝脏;Ⅲ组小鼠全程活泼好动,无异常。结论:肥大细胞瘤小鼠allo-HSCT应用环磷酰胺预处理,建立a GVHD动物模型是可行的,且操作简单,对人、动物和环境的危害较小。

急性移植物抗宿主病患者血浆miR-155的表达及其临床意义

目的:探讨急性移植物抗宿主病(aGVHD)患者miR-155的表达水平及其临床意义。方法:采用造血干细胞移植患者移植第0、第7、第14、第21及第28天的血浆标本,实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测miR-155相对表达量,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测患者血浆中白细胞介素(IL)-4、IL-7、IL-10的含量。结果:miR-155在移植后第7天开始逐渐升高,到第28天时升高明显,患者移植后不同时间点miR-155相对表达量比较差异具有统计学意义(P<0.05)。allo-HSCT后不同时间点IL-4、IL-7、IL-10水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:allo-HSCT后miR-155较IL-4、IL-7、IL-10水平变化出现早,可作为早期诊断和预测a GVHD的无创性生物标记物。

异基因造血干细胞移植后MHC单倍体相合脾脏抗白血病疗效分析

目的:观察主要组织相容性复合体(MHC)单倍体相合脾脏对非清髓异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)抗白血病疗效的分析。方法:用8~12周C57/BL/6近交系小鼠(B6鼠)作为供鼠,取其骨髓细胞和脾细胞;P815细胞即白血病细胞,近交系DBA/2小鼠与近交系C57/BL/6小鼠杂交的第一代小鼠B6D2F1(F1鼠)为受鼠,受鼠骨髓移植d-5~d-3,用环磷酰胺300mg/(m^2·d)腹腔注射预处理,受鼠移植当天(d0),将F1鼠随机分为A、B、C、D 4组,每组12只,其中A组经尾静脉注射P815细胞(1×10~4个)、骨髓细胞(5×10~6个)和脾细胞(2×10~7个)的混合细胞悬液,B组经尾静脉注射P815细胞(1×10~4个)和骨髓细胞(5×10~6个)的混合细胞悬液,C组经尾静脉注射P815细胞(1×10~4个)的细胞悬液,D组经尾静脉注射RPMI 1640细胞培养基。比较4组小鼠血象、急性移植物抗宿主病(GVHD)评分以及皮肤、肝、结肠的病理白血病细胞浸润情况。结果:(1)移植后第14天,A组GVHD评分2~4分,第15天3只小鼠死亡,第26天2只小鼠GVHD评分6分,其它7只小鼠GVHD评分0~3分,第28天死亡1只,存活的8只小鼠GVHD临床评分1~6分。B组小鼠第6天开始出现死亡,至第17天死亡11只,第30天时仅存活1只。C组第18天时全部死亡。(2)4组小鼠移植后第7天时,A、B、C组小鼠白细胞数量明显增高,组间比较有明显差异(P<0.05),与D组比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。移植后第14天时,4组小鼠白细胞数均明显下降,A组分别与B、C、D组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。(3)移植后第28天,A、D组白细胞数均回升,组间比较无明显差异(P>0.05)。A组小鼠的肝脏可见炎性细胞浸润,汇管区肝细胞萎缩、坏死,中央静脉区少量白血病细胞浸润。B组可见肝细胞数量减少,肝窦内白血病细胞弥散性浸润。结论:非清髓allo-HSCT MHC单倍体相合脾脏可以提高抗白血病的疗效。

慢性髓性白血病患者酪氨酸激酶抑制剂自动停药的多中心回顾性研究

目的回顾性分析中国慢性髓性白血病(CML)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)自动停药患者的临床特征及转归情况。方法回顾性分析2005年6月1日至2018年3月1日国内7家单位109例自动停用TKI的慢性期CML患者临床资料,将其中具有明确停药结局及相对完整临床资料的91例患者进行统计分析,观察患者自动停药后获得无治疗缓解(TFR)情况及其影响因素。结果91例患者累积服用TKI中位时间为65(7~138)个月,其中21例患者有减停药史;患者达到主要分子学缓解(MMR)中位时间为开始服用TKI后6(3~57)个月;全部患者停药前达MR^4.0。停药后中位随访9(1~72)个月,53例(58.2%)患者继续维持MMR,获得TFR;38例(41.8%)失去MMR。12个月和25个月的TFR率分别为61.4%和52.6%。31例停药后复发的患者再启动药物治疗,用药后再获得MMR的中位时间为3(1~12)个月。对比分析发现,Sokal评分(P=0.294)、累积服用TKI时间(P=0.827)、获得MMR所需时间(P=0.553),是否减停TKI(P=0.125)等因素对复发无明显影响。而停药前MMR维持时间越长(324个月)患者后期复发率越低(P=0.027)。结论达停药标准的中国CML患者能够安全停用TKI,停药后TFR率与国外报道相当。停药前MMR时间维持越长,停药后复发率越低。

阿扎胞苷联合低剂量HAG方案治疗新诊断不适合强化疗老年急性髓系白血病患者的效果及安全性

目的:探讨阿扎胞苷联合低剂量HAG方案治疗新诊断不适合强化疗老年急性髓系白血病(AML)患者的效果及安全性。方法:前瞻性纳入深圳市第二人民医院2019年7月至2021年9月收治的18例新诊断不适合强化疗的老年AML患者,非随机分为阿扎胞苷联合HAG方案(AZA-HAG)组9例和地西他滨联合HAG方案(DEC-HAG)组9例。研究主要终点为总体有效[完全缓解(CR)+部分缓解],次要终点包括CR+伴血细胞计数不完全恢复的完全缓解(CRi)、总生存(OS)和药物安全性。采用Kaplan-Meier法分析OS。结果:18例患者中位年龄为67岁(60~77岁),其中8例为预后高危组。AZA-HAG组治疗1个疗程后总体有效及CR+CRi均7例,DEC-HAG组均8例,两组差异均无统计学意义(均P=1.000)。两组CR+CRi中位持续时间均为7个月,中位OS时间均为12个月;两组OS差异无统计学意义(χ^(2)=0.02,P=0.895)。AZA-HAG组1例TP53突变和1例ASXL1+RUNX1突变患者均获得CR,1例NPM1野生型合并FLT3-ITD、ASXL1突变患者未缓解。两组3~4级血液学不良反应发生率差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:阿扎胞苷联合低剂量HAG方案治疗新诊断不适合强化疗老年AML患者的效果及远期生存较理想,不良反应可耐受。