Pdx1激活Ngn3和Pax6诱导iPS细胞向胰岛β细胞分化的实验研究

目的:探讨胰十二指肠同源盒基因-1(Pdx1)在诱导多潜能干细胞(i PSCs)分化为胰岛β细胞中的作用及其机制。方法:体外培养人皮肤成纤维细胞来源的i PSCs,将该i PSCs定向诱导分化20 d;RT-PCR检测胰岛素相关基因的表达情况;比较诱导前后几个重要转录因子的表达情况;Ch IP检测胰岛β细胞发育过程中最重要的转录因子Pdx1结合启动子区域的具体位点。结果:体外成功培养人皮肤来源的i PSCs;胰岛素相关基因Maf A、insulin、Glut2、Nkx6.1、Glucokinase和Tcf1均呈现不同程度的表达增强,并在第20 d时表达基本达到高峰;实验组转录因子Pdx1、Ngn3与Pax6表达较对照组明显增强;Pdx1通过结合Insulin-P、Ngn3-P、Pax6-P区域激活下游基因Ngn3和Pax6。结论:Pdx1激活下游基因Ngn3和Pax6可能是其促进i PSCs定向诱导分化为胰岛β细胞的机制之一。

adiponectin对脂肪组织创面愈合作用的体外实验研究

目的:探讨脂肪组织创面愈合(ATWH)的发生机制。方法:体外培养小鼠3T3-L1前脂肪细胞系,应用免疫组化及RT-PCR法检测3T3-L1前脂肪细胞脂联素受体(AdipoR1/2)的表达,用Elisa法测定3T3-L1前脂肪细胞自身分泌脂联素(adiponectin)的浓度,应用MTT和体外伤口愈合模型研究不同浓度adiponectin对前脂肪细胞增殖和迁徙的作用。结果:AdipoR1/2可在3T3-L1前脂肪细胞中表达,不同密度的3T3-L1前脂肪细胞分泌的adiponectin浓度差异无统计学意义(P>0.05),adiponectin能够促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖和迁徙。结论:adiponectin可能通过促进前脂肪细胞的增殖和迁徙促进ATWH,全身或局部应用adiponectin可能是促进外科切口愈合的有效治疗方法。

脂联素在皮下缝合促进脂肪组织切口愈合中的抗凋亡作用及机制

目的 观察脂联素在皮下缝合的脂肪组织中的表达水平与脂肪细胞凋亡的关系,探讨脂联素在皮下缝合促进脂肪组织切口愈合中的作用及机制.方法 建立猪脂肪组织切口愈合模型,应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测局部脂肪组织脂联素表达水平,应用荧光标记法观察切口局部脂肪细胞凋亡的变化.培养3T3-L1细胞株,应用膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）凋亡检测法测定不同浓度的脂联素对细胞凋亡的影响.结果 皮下缝合的局部脂肪组织脂联素水平均显著高于对照组（P＜0.05）;术后第3天及第5天皮下缝合组脂肪细胞凋亡数为（29±13）和（15±8）个,分别低于对照组细胞凋亡数[（69±25）、（23±16）个],差异有统计学意义（P＜0.05）.随着脂联素浓度升高,细胞凋亡率分别为（26.42±1.58）％、（15.14±1.91）％、（7.04±1.16）％、（5.05±0.83）％,均显著低于空白对照组细胞凋亡率[（33.18±1.86）％],差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 脂联素抑制脂肪细胞凋亡是皮下缝合促进脂肪组织切口愈合的作用机制之一.