应用定向进化获取受体高亲和性hEGF突变株E40V及其特性的评价

人表皮生长因子(human epidermal growth factor,hEGF)是一种由53个氨基酸构成的单体多肽。该蛋白作为有效的促有丝分裂因子,通过和细胞表面受体EGFR特异性结合来影响细胞的生长,增殖和分化。hEGF基因的失调与某些癌症的生长和发育有关,其蛋白本身对于表皮损伤和溃疡具有良好的修复功能。但是由于其半衰期较短且会造成受体表达下调,因此有必要对其进行改良。通过StEP法对人源和猪源EGF因子进行定向化改造,通过构建噬菌体展示文库和ELISA筛选方式获得一株对于受体具有较高亲和力的突变株E40V,并使用MTT、圆二色谱和细胞划痕对该突变株的促细胞增殖,迁移能力以及温度,pH耐受性进行了探究。结果显示,E40V相较于野生型EGF,其受体亲和性显著提高,对于正常细胞的促增殖能力也有所强化,而对于温度,pH耐受情况则与野生型相差不大。本研究不仅为短肽的定向进化提供了一个范例,也为EGF的实际应用打下基础。