双自杀基因系统对胰腺癌细胞Capan-2的特异性杀伤作用

目的:研究腺病毒介导的VEGF启动子驱动CD/TK融合基因系统(Ad-VEGFP-CDTK)对胰腺癌细胞Capan-2的特异性杀伤作用。方法:重组腺病毒载体体外感染表达VEGF的Capan-2细胞株,观察其感染效率,并以RT-PCR方法检测转基因细胞内CDTK的表达;然后给予不同浓度的前药更昔洛韦(ganciclovir,GCV)和5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC),MTT法观察该体系对Capan-2细胞增殖的影响及其旁观者效应;电镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞周期和DNA含量的变化;建立小鼠Capan-2细胞动物模型,计算抑瘤率。结果:两种腺病毒对Capan-2的感染率相似,其感染率随腺病毒效价的增高而递增。RT-PCR方法检测发现转染Ad-VEGFP-CDTK的细胞有目的基因表达。MTT法检测显示前药呈剂量依赖性抑制Capan-2细胞生长,且观察到该体系明显的旁观者效应。电镜下可见Capan-2细胞有凋亡改变;流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰,细胞周期分析显示治疗后细胞G0/G1期比率增多,G2/M及S期细胞减少。体内裸鼠移植瘤模型的建立成功,实验组肿瘤体积缩小。结论:VEGF启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤胰腺癌细胞Capan-2,并诱导细胞凋亡,可显著抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长。

AdKDR-CDglyTK融合基因系统治疗胰腺癌的实验研究

目的 观察腺病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK融合双自杀基因系统（以下简称为AdKDR-CDglyTK）对胰腺癌的治疗作用.方法 采用培养细胞移植法,将人胰腺癌细胞系Capan-2接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法：Ⅰ组：注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC与GCV;Ⅱ组：仅注射前药5-FC与GCV;Ⅲ组：仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTKⅣ组：空白对照,不施加任何处理.重组腺病毒AdKDR-CDglyTK采用瘤体内多点注射,5-FC与GCV给药方法采用腹腔内注射的方法,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理等指标;应用透射电镜观察细胞超微结构,用TUNEL法检测细胞凋亡率,比较观察各治疗组的治疗效果;并对各组的肿瘤组织行RTPCR的检测,以了解有无双自杀基因CDglyTK的表达.结果 第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差别.第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为（34.20±4.60）%,较对照组显著增加（P=0.00）.结论 AdKDR-CDglyTK联合前药5-FC及GCV对人胰腺癌Capan-2细胞具明显的抑制作用,并且诱导裸鼠体内人胰腺癌Capan-2细胞的凋亡.其可能的机制是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达.

双自杀基因重组腺病毒对胰腺癌细胞特异性杀伤作用

目的 研究腺病毒介导的KDR启动子驱动CD／TK融合基因系统（AdKDRCDTK）对胰腺癌细胞Capan-2特异性的杀伤作用。方法 重组腺病毒体外感染表达KDR的Capan-2细胞株，用不表达KDR的肝癌细胞HepG2做对照，观察其感染效率并以RT-PCR方法检测转基因细胞CDTK的表达，然后给予不同浓度的前药更昔洛韦（ganciclovir，GCV）和5-氟胞嘧啶（5-fluorocytosine，5-FC），MTT法观察该体系对Capan-2和HepG2细胞生长增殖的影响及其旁观者效应；电镜观察细胞的病变；流式细胞仪检测细胞周期的变化和DNA含量的变化。建立Capatv-2裸鼠皮下移植瘤模型，瘤内注射Ad-KDR-CD／TK，腹腔注射前药GCV（50mg·kg^-1·d^-1）和5-FC（500mg·kg^-1·d^-1）14d，观察肿瘤生长抑制效应。结果 腺病毒对两种细胞株的感染率相似，其感染率随腺病毒滴度的增高而递增。RT-PCR方法检测发现转染Ad-KDR-CDTK的Capan-2细胞有目的基因表达。MTT法检测显示前药呈剂量依赖性抑制Capan-2生长，而不表达KDR的肝癌细胞HepG2对前药不敏感，且观察到该体系对Capan-2明显的旁观者效应。电镜下可见Capan-2有凋亡改变。用流式细胞仪测定用药组出现典型的凋亡峰；细胞周期分析显示治疗后细胞G0-G1，期比率增多，G2-M及S期细胞减少。在Capan-2裸鼠移植瘤模型中，该双自杀基因系统能够显著抑制肿瘤的生长。结论 KDR启动子可调控双自杀基因体系选择性杀伤胰腺癌细胞Capan-2，诱导胰腺癌细胞凋亡，并可显著抑制人胰腺癌裸鼠移植瘤的生长。