结核杆菌分泌蛋白MPT64多克隆抗体的制备及初步应用

目的鼠抗重组结核杆菌分泌蛋白MPT64多克隆抗体的制备及其在结核淋巴结组织中特性的鉴定及初步应用。方法通过PCR法从结核患者淋巴结组织中扩增MPT64基因,并构建到pET28a表达载体中。使用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过镍柱亲和层析纯化获得MPT64蛋白。以纯化的MPT64蛋白混合福氏完全佐剂免疫Balb/C小鼠制备抗体,用ELISA法和免疫组化分别检测抗体的效价和特异性。结果成功的表达、纯化了MPT64重组蛋白,通过检测MPT64蛋白免疫的小鼠血清效价为1∶32000,Western blot显示该多克隆抗体能够与MPT64蛋白特异性的结合,同时还能够和天然的MPT64结合。通过结核病浸润期或进展期,溶解播散期,吸收好转期,硬结钙化期不同分期MPT64的表达情况分析,提示MPT64蛋白表达与临床病理因素之间有较好的相关性,对45例结核患者的血清进行MPT64检测,检测阳性率高达77.8%。结论以重组人MPT64为免疫原,成功地制备高效价、高特异性的鼠抗MPT64抗体,此研究提示MPT64能够作为活动性结核诊断的有效靶标,为进一步进行MPT64的检测及其临床初步应用奠定了基础。

海藻多糖对结核患者的免疫调节作用

目的:探讨海藻多糖(PSS)对结核患者外周血单个核细胞免疫调节作用及抗氧化作用。方法:将不同浓度的海藻多糖加入体外培养的单个核细胞,采用单个核细胞增殖试验、超氧离子自由基清除试验、ELISA检测经PSS诱导后的PBMC培养上清中IFN-γ、IL-2和IL-4表达水平,进一步分析海藻多糖的免疫调节作用及抗氧化作用。结果:PSS具有一定的还原能力,能提供电子并将自由基转变为稳定的产物而终止自由基反应,且对O_(2)^(-)具有很强的清除作用,PSS诱导后的PBMC培养上清中IFN-γ和IL-4表达水平明显升高,增强机体对结核杆菌的杀伤能力。结论:海藻多糖对结核患者外周血单个核细胞有显著的免疫调节作用及抗氧化作用,可为PSS的药理研究与开发奠定基础。