吸烟介导的COPD呼吸道微生态失调对Treg/Th17失衡的影响

目的探究吸烟介导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者呼吸道微生态失调对调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)免疫失衡的影响。方法选取本院30例COPD患者、30例肺功能正常者作为研究对象,根据吸烟、肺功能情况分为吸烟COPD组(15例)、吸烟肺功能正常组(15例)、不吸烟COPD组(15例)、不吸烟肺功能正常组(15例)。比较4组一般资料包括(性别、年龄、BMI)、外周血、BAL中Treg/Th17、中性粒细胞、单核细胞、血清与BAL上清中白介素-10(IL-10)、IL-35、IL-17、IL-6、IL-8水平,评价吸烟、肺微生态菌群、Treg/Th17免疫失衡之间相关性。结果 4组ACE指数、Chao指数、Shannon指数、外周血、BAL中Treg细胞、Treg/Th17比例及血清、BAL上清IL-35比较:吸烟COPD组<不吸烟COPD组<吸烟肺功能正常组<不吸烟肺功能正常组(P<0.05),Simpson指数、Th17细胞、中性粒细胞、单核细胞及血清、BAL上清IL-17、IL-6、IL-8、IL-10比较:吸烟COPD组>不吸烟COPD组>吸烟肺功能正常组>不吸烟肺功能正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);吸烟与肺部菌群ACE指数、Chao指数、Shannon指数、外周血、肺泡灌洗液(BAL)中Treg细胞、Treg/Th17比例呈负相关,与Simpson指数、外周血、BAL中Th17细胞呈正相关(P<0.05);肺部菌群ACE指数、Chao指数、Shannon指数与外周血、BAL中Treg细胞、Treg/Th17比例呈正相关,与Th17细胞呈负相关,Simpson指数与外周血、BAL中Treg细胞、Treg/Th17比例呈负相关,与Th17细胞呈正相关(P<0.05)。结论吸烟介导的COPD患者呼吸道微生态失调与Treg/Th17免疫失衡密切相关,吸烟-肺微生态失调-肺免疫紊乱-炎症浸润可能是COPD的发病机制。

吸烟相关COPD肺微生态菌群、Treg/Th17、炎症在发病中的作用机制

目的探讨吸烟相关慢性阻塞性肺疾病(COPD)肺微生态菌群、调节性T淋巴细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)、炎症之间关系及在发病中的作用机制。方法选取本院COPD稳定期患者68例、肺功能正常者68例,根据是否吸烟将COPD稳定期患者分为吸烟COPD组(n=20)、戒烟COPD组(n=29)、不吸烟COPD组(n=19);肺功能正常者分为吸烟肺功能正常组(n=16)、戒烟肺功能正常组(n=18)、不吸烟肺功能正常组(n=14)。比较6组基线资料、外周血和肺泡灌洗液(BAL)中Treg/Th17、炎性因子、BAL中肺微生态菌群多样性,分析肺微生态菌群、Treg/Th17、炎症因子之间关系及与吸烟的相关性。结果Chao指数、外周血和BAL中Treg/Th17、IL-10、IL-35指标在各组间比较,吸烟COPD组<戒烟COPD组<非吸烟COPD组<吸烟肺功能正常组<戒烟肺功能正常组<非吸烟肺功能正常组,Simpson指数在各组间比较,吸烟COPD组>戒烟COPD组>非吸烟COPD组>吸烟肺功能正常组>戒烟肺功能正常组>非吸烟肺功能正常组,差异有统计学意义(P<0.05);吸烟与Chao指数、外周血和BAL中Treg/Th17、IL-10、IL-35呈负相关,与Simpson指数、外周血和BAL中IL-17、IL-6、IL-8呈正相关(P<0.05);肺微生态菌群多样性、Treg/Th17、炎性之间存在良好线性相关性(P<0.05)。结论肺微生态菌群失衡、Treg/Th17紊乱、炎症之间相互影响可能在吸烟相关COPD发病机制中起着重要作用。

结核杆菌分泌蛋白MPT64多克隆抗体的制备及初步应用

目的鼠抗重组结核杆菌分泌蛋白MPT64多克隆抗体的制备及其在结核淋巴结组织中特性的鉴定及初步应用。方法通过PCR法从结核患者淋巴结组织中扩增MPT64基因,并构建到pET28a表达载体中。使用IPTG诱导重组蛋白的表达,通过镍柱亲和层析纯化获得MPT64蛋白。以纯化的MPT64蛋白混合福氏完全佐剂免疫Balb/C小鼠制备抗体,用ELISA法和免疫组化分别检测抗体的效价和特异性。结果成功的表达、纯化了MPT64重组蛋白,通过检测MPT64蛋白免疫的小鼠血清效价为1∶32000,Western blot显示该多克隆抗体能够与MPT64蛋白特异性的结合,同时还能够和天然的MPT64结合。通过结核病浸润期或进展期,溶解播散期,吸收好转期,硬结钙化期不同分期MPT64的表达情况分析,提示MPT64蛋白表达与临床病理因素之间有较好的相关性,对45例结核患者的血清进行MPT64检测,检测阳性率高达77.8%。结论以重组人MPT64为免疫原,成功地制备高效价、高特异性的鼠抗MPT64抗体,此研究提示MPT64能够作为活动性结核诊断的有效靶标,为进一步进行MPT64的检测及其临床初步应用奠定了基础。

海藻多糖对结核患者的免疫调节作用

目的:探讨海藻多糖(PSS)对结核患者外周血单个核细胞免疫调节作用及抗氧化作用。方法:将不同浓度的海藻多糖加入体外培养的单个核细胞,采用单个核细胞增殖试验、超氧离子自由基清除试验、ELISA检测经PSS诱导后的PBMC培养上清中IFN-γ、IL-2和IL-4表达水平,进一步分析海藻多糖的免疫调节作用及抗氧化作用。结果:PSS具有一定的还原能力,能提供电子并将自由基转变为稳定的产物而终止自由基反应,且对O_(2)^(-)具有很强的清除作用,PSS诱导后的PBMC培养上清中IFN-γ和IL-4表达水平明显升高,增强机体对结核杆菌的杀伤能力。结论:海藻多糖对结核患者外周血单个核细胞有显著的免疫调节作用及抗氧化作用,可为PSS的药理研究与开发奠定基础。

长双歧杆菌分泌型表达载体的构建及Tum-5基因的表达

目的构建能在双歧杆菌内稳定存在并高效分泌表达外源基因的长双歧杆菌质粒表达载体。方法以质粒p BAD/glll为基础,以双歧杆菌内源性阿拉伯糖苷酶的分泌性信号肽取代质粒原有的分泌性信号肽,并将双歧杆菌天然质粒的聚合酶基因克隆入载体中,构建表达载体p BBADs。将人Tum-5基因克隆入载体中,构建质粒p BBADs-Tum-5,电转化长双歧杆菌NCC2705,L-阿拉伯糖诱导表达后,Western Blot鉴定基因表达。结果成功地构建了长双歧杆菌分泌型质粒表达载体,Tum-5基因在双歧杆菌内可以表达。结论构建的表达载体为双歧杆菌用于肿瘤靶向基因治疗奠定了基础。

携带hIL-12基因的长双歧杆菌的构建及对血管生成的影响

目的构建携带人白细胞介素12(h IL-12)基因的长双歧杆菌(Bifidobacterium longum,B.longum),观察其表达产物对鸡胚尿囊膜(Chick embryo chorioallantoic membrane,CAM)血管生成的影响。方法以前期构建的表达载体p BBADs为基础,将h IL-12基因克隆入载体中,构建质粒p BBADs-h IL-12,电转化长双歧杆菌NCC2705,L-阿拉伯糖诱导表达后,ELISA法鉴定基因表达。原位摄影后分析照片,田氏法计数血管条数,运用IPP软件计算所选区域血管面积。各组数值经检验服从正态分布,采用单因素方差分析(Bonferroni法)检验。结果成功构建携带h IL-12基因的长双歧杆菌(BL-h IL-12),经过诱导后检测到目的蛋白的表达,诱导24h h IL-12表达水平最高(P<0.05),为最佳诱导时间。BL-h IL-12诱导组与其它组比较,血管数量及面积均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。BL-h IL-12未诱导组、普通双歧杆菌组、生理盐水组两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论携带h IL-12的转基因双歧杆菌其诱导表达产物对鸡胚尿囊膜新生血管数目有一定抑制作用。