蛋白质、蛋白酶以及短肽类的分离提纯技术及应用

介绍了蛋白质、蛋白酶以及短肽类研究的一些传统方法和新兴方法。主要对分离、提纯、鉴定及分析方法的使用条件、适用范围、操作步骤、各自特点和应用价值作了简要阐述,并对有关方法进行了比较与评价。

HPLC指纹图谱应用于炙甘草的炮制研究

目的:应用HPLC指纹图谱规范炙甘草的炮制。方法:采用反相高效液相色谱法,DENALI C18色谱柱(VYDAC238DE5415,120A,5μm,4.6mm×150mm),以3%(v/v)HAc溶液和甲醇为流动相,梯度洗脱,柱温40℃,检测波长252nm。结果:炙甘草的HPLC指纹图谱有20个共有峰。传统炒制法炮制的炙甘草样品有一部分峰的重现性RSD值>3%;烘制法炮制的样品重现性有2个共有峰相对峰面积比的RSD>3%;微波法炮制的样品重现性符合指纹图谱的要求,20个共有峰相对峰面积比的RSD值均小于3%。结论:烘制和微波加热的炮制方法,可控性强,样品的指纹图谱重现性高,可以作为替代传统炒制工艺的新工艺。

美国食品安全教育体系及其特点

美国食品安全教育体系强调全民教育,重点是对从业人员及食源性疾病易感人群的教育,具有以研究为基础、教育面广、层次分明、针对性强、教育资源丰富、形式多样,政府牵头、教育组织和机构密切合作等特点,可为我国食品安全教育体系的建立提供借鉴。

玉米活性多肽降血压作用及其机制的研究

目的研究玉米多肽的降血压作用,并探讨其作用机制。方法选择18w龄雄性SHR,随机分为阴性对照、0.5、1.0、2.0mg/kgbw多肽组和阳性对照组。观察单次灌胃4、24h内以及每天灌胃每周各组血压变化,12w后,测定体内各器官血管紧张素转化酶(ACE)活性及血浆AngⅡ浓度和左心室肥厚指数(LVHI)。结果单次灌胃后4h血压降至最低,并持续12h。每日灌胃12w后,各剂量玉米多肽组血压水平均显著低于阴性对照。血清、主动脉、肺中ACE活性和血桨AngⅡ显著低于阴性对照。结论玉米活性多肽通过抑制体内ACE活性、降低AngⅡ浓度明显降低SHR血压水平,并能部分逆转心肌肥厚作用。

玉米降血压肽的分离纯化研究

以玉米蛋白为原料酶解得到的酶解液具有降血压活性,为了得到高活性的降血压肽单体,本文采用了离子交换层析法、凝胶层析和RP-HPLC对酶解液进行了的分离纯化,得到了五个降血压多肽单体。

螺旋藻脱腥工艺研究

螺旋藻营养丰富,具有全面的保健功能,但是由于螺旋藻具有较重的腥味,因此目前市场上的产品难以被消费者所接受,文中研究了活性炭、酶解、β-环糊精掩盖、加热、发酵等方法对螺旋藻的脱腥效果。结果表明,发酵法的脱腥效果最佳。酵母发酵脱腥最佳工艺条件为:添加0.1%的活性干酵母在30℃下发酵30 min。

高效液相色谱法同时测定甘草中甘草酸和甘草苷的含量

目的测定甘草中甘草酸和甘草苷的含量。方法采用反相高效液相色谱法，DENALI C18色谱柱（VYDAC 238DE5415，120A，5μm，4．6mm×150mm），梯度洗脱，流动相A：H2O，流动相B：1．5％HAc—MeOH．流速1．0ml·min^-1，检测波长在32．2min从330nm换为252nm，从35min换为330nm，柱温40℃。结果甘草苷的浓度在10—50μg·ml^-1之间与峰面积线性关系良好，平均回收率为99．97％，方法精密度RSD=0．12％（n=5），甘草酸的浓度在50-90μg·ml^-1。之间与峰面积线性关系良好，平均回收率为100．25％，方法精密度RSD=0．13％（n=5）。结论该方法可用于甘草中甘草酸和甘草苷的同时含量测定。

D-101大孔树脂富集橄榄叶中橄榄苦苷的研究

目的:研究大孔树脂富集橄榄苦苷的条件及参数。方法:微波水提取所得橄榄苦苷水提液直接用D-101大孔吸附脂静态吸附,水洗脱糖类等杂质,以70%乙醇洗脱;采用HPLC法检测橄榄苦苷的含量。结果:D-101大孔树脂可以将固体中橄榄苦苷的质量分数从5%提高至21.6%,回收率为88.6%。结论:D-101型大孔树脂适合分离纯化水溶性的橄榄苦苷。本法操作简便,适用于工业化生产。

橄榄叶中橄榄苦苷不同提取方法的研究

研究超临界CO2萃取、微波和索氏提取法提取橄榄苦苷的最佳工艺。以HPLC检测橄榄苦苷的含量,采用正交实验,对橄榄叶粒度、提取剂用量、提取时间、超临界萃取压力和萃取温度5个因素进行了考察。结果显示,超临界CO2萃取最佳条件为A1B1C3,微波提取最佳条件为A2B2C1,索氏提取最佳条件为A1B3C1。微波提取3min与超临界CO2萃取2 h、索氏提取6h提取的效果相当,微波提取时间短,操作简便,适用于工业化生产。

大孔树脂分离纯化羟基酪醇工艺研究

目的研究大孔吸附树脂法纯化羟基酪醇的工艺条件及参数。方法以羟基酪醇的量为考察指标,筛选适用的大孔吸附树脂型号,研究树脂吸附与解吸工艺。结果羟基酪醇适用树脂型号为AMBERLITE-XAD4,其吸附率为91.1%,解析率为91.6%,经乙酸乙酯萃取、真空浓缩干燥后,总固形物中羟基酪醇纯度可达44.1%。结论采用此法能初步纯化羟基酪醇。

Sephadex LH-20纯化橄榄苦苷

目的:利用葡聚糖凝胶(Sephadex)LH-20层析柱料对橄榄苦苷粗提物进行精制纯化。方法:瑞典安玛西亚公司蛋白质快速层析系统(AKTA FPLC),层析柱为蛋白纯化仪所配(20mm×300mm),装柱物为葡聚糖凝胶Sephadex LH-20,流速1mL/m in,以50%乙醇为流动相,检测波长254nm;橄榄苦苷的含量检测采用HPLC法。结果:橄榄苦苷在进样量为2mL时,经过二次过柱,其纯度可达到82.9%。结论:葡聚糖凝胶LH-20可重复利用,再生简便,为指导橄榄苦苷的生产提供参考。

玉米降血压肽对体内外血管紧张素转化酶活性的抑制作用

目的研究玉米降血压肽在体内外对血管紧张素转化酶(ACE)的活性抑制作用及机制,为探讨降血压肽的降压机制提供实验依据。方法用反相高效液相色谱法测定玉米降血压肽在体外对ACE的抑制动力学,同时测定多次给药12周后SHR大鼠体内不同组织的ACE活性和血浆AngⅡ浓度。结果玉米降血压肽竞争性抑制ACE活性,IC50为15.0μmol/L,玉米降血压肽能显著降低血清、主动脉和肺ACE活性(P<0.01),而对心、脑、肾的ACE活性抑制作用不显著(P>0.05),同时玉米降血压肽能显著降低血浆中血浆AngⅡ浓度(P<0.01)。结论玉米降血压肽对体内外ACE都有竞争性抑制作用,但在体内不同部位其抑制效果不同,同时其降压作用是通过抑制ACE活性、降低AngⅡ浓度来实现的。

盐酸水解橄榄苦苷粗提物制备羟基酪醇

目的:建立测定羟基酪醇含量的高效液相色谱法,考察盐酸水解橄榄苦苷粗提物制备羟基酪醇。方法:采用正交实验,对橄榄苦苷粗提物的水解工艺条件进行考察;以HPLC检测羟基酪醇的含量。结果:最佳水解工艺为:盐酸浓度0.5 mol/L,水解时间15 min,水解温度105℃,料液比1/30,水解后相对于橄榄苦苷的转化率为56.3%,大样经粗提取后羟基酪醇纯度4.6%。结论:该法工艺简单,经济实用,为进一步提高羟基酪醇纯度奠定基础,并为工业化生产羟基酪醇开辟了一条新途径。

降血压肽对人脐静脉内皮细胞增殖及内皮素表达的影响(英文)

背景:降血压肽是一类能够降低人体血压的多肽,可通过抑制人体血管紧张素Ⅱ的生成而达到降低血压的作用。目的:在细胞分子水平探讨降血压肽对人脐静脉内皮细胞生长及内皮素表达的影响,为进一步将降血压肽开发为降压保健食品提供实验依据。设计:重复测量设计。单位:华南理工大学生命科学与工程学院,深圳职业技术学院应用生物技术系。材料:实验于2004-09/2005-03在深圳职业技术学院应用生物技术研究所完成。降血压肽由深圳职业技术学院应用生物技术研究所制备,在一定条件下抑制血管紧张素转移酶活性一半时所需要的抑制剂浓度为15μmol/L。传至4代的人脐静脉内皮细胞用于实验,随机分为7组:空白对照组、降血压肽150mg/L组、降血压肽300mg/L组、降血压肽600mg/L组、卡托普利阳性对照组、去甲肾上腺素阴性对照组、降血压肽+去甲肾上腺素组。方法:①脐静脉内皮细胞按一般细胞培养方法进行,培养液为M199+体积分数为0.15的小牛血清+青霉素10000U/mL+链霉素100mg/L。细胞长满致融合状态后,按1∶2比例传代,传至第4代的细胞用于实验。②空白对照组含体积分数为0.15小牛血清的M199;降血压肽150,300,600mg/L组在此基础上加入降血压肽至终浓度分别为150,300,600mg/L;卡托普利阳性对照组在此基础上加入卡托普利至终浓度为10-5mol/L;去甲肾上腺素阴性对照组在此基础上加入去甲肾上腺素终浓度为100μg/L;降血压肽+去甲肾上腺素组在此基础上加入降血压肽至终浓度300mg/L,去甲肾上腺素至终浓度100μg/L。③采用细胞计数法测定各组细胞生长状况,放免法测定不同培养时间各组细胞培养液中内皮素含量,反转录聚合酶链式反应法测定内皮素mRNA的表达,免疫组化测定细胞内皮素蛋白的表达。主要观察指标:①降血压肽对内皮细胞增殖、分泌内皮素的影响。②降血压肽对内皮细胞内皮素mRNA、内皮素蛋白表达的影响。结果:①降血压肽对内皮细胞增殖、分泌内皮素影响:随着培养时间的延长,与空白对照组比较,卡托普利阳性对照组及降血压肽各剂量组均有抑制内皮细胞生长、降低培养液中内皮素含量的作用(P<0.01或0.05);去甲肾上腺素可促进内皮细胞的生长和分泌内皮素,但加入降血压肽后细胞密度和内皮素含量均接近空白对照组(P>0.05)。②降血压肽对内皮细胞内皮素mRNA、内皮素蛋白表达的影响:与空白对照组比较,阳性对照卡托普利组及降血压肽各剂量组均可下调内皮素mRNA和内皮素蛋白的表达(P<0.01或0.05);去甲肾上腺素可上调内皮素mRNA和内皮素蛋白的表达,加入降血压肽后各基因表达接近空白对照组(P>0.05)。结论:不同剂量的降血压肽对内皮细胞均有抑制生长作用,可降低细胞释放内皮素的含量,下调内皮素基因的表达,且能够有效对抗去甲肾上腺素的促脐静脉内皮细胞生长及分泌作用。

百里香不定芽的增殖研究

以腋芽诱导的百里香(Thymus vulgaris L.)不定芽进行增殖培养条件筛选,结果表明,不定芽增殖最适宜的培养基为MS+NAA0.25mg/L+6-BA0.25mg/L,增殖系数高达5.97。同时,为建立最佳扩繁体系,比较了不定芽在固体培养、液体光照培养、液体无光照培养等条件下的增殖效果,并监测了液体培养基的电导率和pH值,结果液体光照培养最适合不定芽的扩繁,其周期短,在培养21d时增殖系数达最大。在21～28d时,电导率和pH值不再适合不定芽的生长,须更换培养基或添加一些营养物质。

橄榄苦苷盐酸水解液中羟基酪醇的纯化

以ZTC1+1-Ⅱ澄清剂及乙酸乙酯纯化羟基酪醇的工艺条件建立羟基酪醇纯化方法,以羟基酪醇含量(采用高效液相色谱法测定)为指标,采用L9(34)正交试验考察澄清工艺条件;选择最佳萃取剂萃取羟基酪醇;通过旋转蒸发得到干物质并测定其中羟基酪醇的纯度。结果显示,ZTC1+1-Ⅱ澄清剂加入次序是先加B组分再加入A组分;澄清剂B和A的最佳用量分别为0.2、0.1 g/L,水浴温度为100℃,水浴时间为2 h,pH值为5;最佳的萃取剂为乙酸乙酯,萃取4次可达到最佳的萃取效果;大样经澄清和萃取后,羟基酪醇的纯度达34.3%。该法工艺简单,纯化后羟基酪醇纯度较高,为从天然植物中提取羟基酪醇开辟了一条新途径。

PVPP吸附余甘果汁中多酚物质的研究

余甘果汁饮料由于在贮存期严重沉淀和褐变而阻碍了产业化生产。采用聚乙烯聚吡咯烷酮(PVPP)处理余甘果汁有效地解决了这一难题。结果表明,用5%(m/m)的PVPP在30℃处理余甘原果汁1h,对多酚的去除率达到89.2%。处理后的原果汁风味达到最佳,维生素C损失3.4%,贮存期超过12个月未见沉淀产生且褐变轻微。该技术为余甘果汁饮料的产业化生产提供了新途径。

余甘子清汁饮料加工工艺研究

对余甘果汁清汁饮料生产中存在的出汁率低、贮藏期易产生沉淀和褐变等关键技术及配方进行研究,为余甘子果汁饮料的产业化生产提供科学依据。

碱性成纤维细胞生长因子基因在骨膜成骨细胞中的表达

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子基因在骨膜.成骨细胞中的表达情况,以为其基因转移在骨组织工程中的应用奠定基础。方法:实验于2003-09在广州军区总医院医学实验科完成。采用聚乙烯亚胺介导重组真核表达载体pcDNA3.1-碱性成纤维细胞生长因子经转染至原代培养的成骨细胞中,培养36h后,采用细胞免疫组化、免疫印迹杂交、酶联免疫吸附法、四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色等方法检测碱性成纤维细胞生长因子在成骨细胞中的表达情况以及其生物学活性。结果:①pcDNA3.1-碱性成纤维细胞生长因子转染的成骨细胞能分泌表达碱性成纤维细胞生长因子至细胞培养液中,表达量约为(1.56±0.08)ng/mL,高于未经转染的细胞培养液[(0.53±0.048)ng/ml,(P<0.01)]。②经转染的成骨细胞的培养上清可以明显促进3T3细胞的增殖,表明成骨细胞所分泌表达的碱性成纤维细胞生长因子具有一定的生物学活性。结论:碱性成纤维细胞生长因子基因能够转移至骨膜成骨细胞中,经转染的细胞能够超表达碱性成纤维细胞生长因子。