人源CDC50基因的分子克隆及在E.coli中的表达

糖皮质激素受体 (GR)为一种特异性配体诱导的转录因子在机体发育、生理及行为等过程中发挥重要作用 .这一过程往往受到转录协同调节因子的控制 ,包括协同抑制因子或协同激活因子的作用 .克隆了人源双跨膜受体分子 ,并命名为hCDC5 0 .该分子编码区有 10 5 6bp ,与鼠源基因mCDC5 0在核苷酸水平有 90 %一致性 .将hCDC5 0蛋白的 16 4～ 317编码序列与GST融合构建原核表达质粒进行重组蛋白的表达与纯化并制备多抗 .用二维双向扩散检测抗体为阳性 ,抗原的滴度为12 5 μg/ml.体外翻译研究显示该基因编码蛋白约为 4 0kD ,与Western检测在动物细胞中的表达一致 .用hCDC5 0真核表达质粒与GR萤光报告系统共转染COS 7细胞显示 ,hCDC5 0对GR信号转导有明显的抑制作用 ,其对GR信号通路的抑制作用达 3～ 4倍以上 .hCDC5 0可能为一个新的协同抑制因子 。

受四环素调控的人IL-17受体样分子基因重组质粒的构建及表达

目的 :构建受四环素调控的hIL 17RLM基因的重组表达质粒 ,实现IL 17RLM基因在真核细胞NIH3T3中的可调控性表达。方法 :将hIL 17RLM LDNA片段从pcDNA3 .0 /hIL 17RLM L中酶切回收 ,插入受四环素调控的载体pTRE2 ,以重组质粒转染NIH3T3细胞 ,表达产物用Westernblot进行检测。结果 :成功地构建受四环素调控的pTRE2 /hIL 17RLM L重组质粒 ,并可在NIH3T3细胞中表达。结论 :构建了真核表达质粒pTRE2 /hIL 17RLM L ,并使其可调控性表达 ,为进一步研究IL

人白介素17受体样分子的克隆及表达

目的 构建带有 6×myc的人白介素 17受体样分子的重组表达质粒 ,以便检测hIL 17RLM L基因在真核细胞中的特异性表达。方法 设计带有酶切位点 (EcoRⅠ和XhoⅠ )的特异性引物 ,用PCR方法扩增hIL 17RLM L片段回收后插入带有 6×myc标签的 pcDNA3.0真核表达载体 ,转染COS7细胞后作Westernblot检测其表达。结果 成功地构建了带有 6×myc标签的 pcDNA3.0 6×myc /hIL 17RLM L重组质粒 ,Westernblot检测到该质粒可在真核细胞中表达。结论 用分子生物学的方法成功地构建了真核表达质粒pcDNA3.0 6×myc /hIL 17RLM L ,使该基因的特异性检测成为可能 ,为进一步研究hIL 17RLM L的生物学功能奠定了基础。

T淋巴细胞的信号转导

T淋巴细胞是构成机体细胞免疫反应的中心环节 ,而 T细胞的激活、增殖、分化及凋亡均与细胞内引发的一系列信号通路直接相关。本文就信号转导在 T细胞激活、增殖和凋亡中的作用及其研究进展作一述评。