透明质酸酶对慢性压迫性神经损伤模型中神经源性疼痛的作用研究

目的:研究透明质酸酶对坐骨神经的疏松结扎(CCI)模型神经源性疼痛的作用,初步探讨临床通过相关穴位点注射透明质酸酶治疗慢性疼痛的机制。方法:采用CCI模型,记录损伤神经异位自发放电和热痛刺激的敏感程度。结果:用透明质酸酶作用于术后7d大鼠的损伤处并进行坐骨神经自发放电的测量,发现在测量的12只模型中,有8只模型的自发放电得到了有效的抑制,这8只的平均抑制率为50.9%±12.4%。在热刺激行为学实验中,损伤局部持续注射透明质酸酶溶液的CCI大鼠在术后3d、6d和14d的热刺激敏感度明显低于局部注射生理盐水的对照组CCI大鼠。通过CCI大鼠损伤坐骨神经组织切片观察,发现神经纤维排列混乱,纤维间存在空泡状间隙,并且在间隙周围分布着染成深色的多糖链;而经过透明质酸酶作用后CCI损伤坐骨神经切片观察,空泡状空隙与深色多糖链沉淀消失,神经排布较处理前更加规则。结论:细胞外基质与神经生理功能密切相关,透明质酸酶能够有效降低CCI模型的异位自发放电;临床穴位注射透明质酸酶改变穴位点聚集的细胞外基质,从而起到镇痛作用。

长柄七叶树的化学成分

目的:研究长柄七叶树的皂苷类成分,寻找新的七叶树皂苷资源.方法:对长柄七叶树乙醇提取物的乙酸乙酯和正丁醇两部分进行化学成分研究,并利用各种化学、光谱技术鉴定结构.结果:从长柄七叶树得到3个三萜类化合物和1个香豆素类化合物,经鉴定为原七叶树皂苷元(1)、21-当归酰基-原七叶树皂苷元(2)、21β-当归酰基-原七叶皂苷配基-3β-O-[β-D-吡喃葡萄糖基(1-2)][β-D-吡喃葡萄糖基(1-4)] β-D-吡喃葡萄糖醛酸(3)和异秦皮苷(4).结论:化合物1～4均为该植物首次分离得到.

菠萝叶中1,3-二氧咖啡酰甘油酯HPLC测定方法的建立

目的:建立新化合物1,3-二氧咖啡酰甘油酯HPLC测定方法,测定菠萝叶中1,3-二氧咖啡酰甘油酯的含量。方法:采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm)进行分离,流动相磷酸溶液(0.1%)-乙腈(75∶25),流速1.0 mL.min-1,柱温30℃。结果:1,3-二氧咖啡酰甘油酯与其他组分分离效果较好,在0.051 6μg^0.516μg具有良好的线性(r=0.999 9),平均回收率为97.1%(RSD 1.3%)。经测定3批菠萝叶中1,3-二氧咖啡酰甘油酯的平均质量分数分别为0.033%,0.034%,0.031%。结论:该分析方法具有较好的分离效果以及很高的回收率和重复性,可以用于菠萝叶中1,3-二氧咖啡酰甘油酯的含量分析及质量控制。

运用血清药理学方法探讨滋肾降糖丸对小鼠MSC成骨分化的影响及其机制

目的:运用血清药理学方法研究滋肾降糖丸对小鼠骨髓基质干细胞(MSC)模型成骨分化的作用及其机制。方法:首先空腹6h后的小鼠口服滋肾降糖溶液,剂量为1.5g·kg-1,随后在0、0.5、1、2和4h不同时间段收集含药血清;随后用茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测的方法调查上述含药血清对MSC成骨诱导分化的影响;最后用实时荧光定量PCR的方法进一步调查含药血清对MSC成骨诱导过程中相关关键基因骨形态发生蛋白(BMP2)及成骨特异性转录因子(RunX2)的表达。结果:含药血清可显著促进MSC的成骨分化,以2h后收集的血清效果最强。Q-RT-PCR实验结果显示,2h含药血清显著促进诱导后第3、6dMSC细胞BMP2及RunX2基因的表达。结论:滋肾降糖丸抗骨质疏松的作用可能与上调MSC上BMP2及RunX2的基因表达,从而促进MSC的成骨分化有关。

人致肺纤维化相关因子的克隆和生物信息学分析

几丁质酶是自然界广泛存在的一类降解几丁质的水解酶类,但是直至近些年才在哺乳动物体内发现存在有几丁质酶样蛋白.早年曾于矽肺大鼠中纯化出矽诱导的支气管肺泡灌洗蛋白iSBLP58,体外具有促进人胚肺成纤维细胞2BS增殖的作用,N端测序显示与哺乳动物几丁质酶蛋白家族成员具有高度同源性.生物信息学分析表明,来源于人的结肠、肾和胃的几个表达序列标签(EST)克隆和大鼠的这一蛋白质序列匹配.随后成功地从人肾RNA样品中克隆到一组cDNA,其序列及相应的氨基酸序列彼此高度相似,并与GenBank中的几个人几丁质酶蛋白高度相似.和人基因组序列比较,揭示这些分子可能来自于同一基因,为可变剪切的产物.

滋肾降糖丸对小鼠骨髓基质干细胞成脂分化的影响

目的:研究滋肾降糖丸对小鼠骨髓基质干细胞(MSC)模型成脂分化的影响。方法:小鼠灌胃滋肾降糖丸(1.5g·kg-1),每天1次,连续7d,最后一天在灌胃2h后收集含药血清。随后用油红O染色法检测上述含药血清对MSC成脂诱导分化的影响。最后用实时荧光定量聚合酶链式反应(Q-RT-PCR)方法进一步测定含药血清对MSC成脂诱导过程中相关关键基因过氧化物酶体增殖物激活γ2受体(PPARγ2)与人脂肪酸结合蛋白4(FABP4)表达的影响。结果:含药血清可显著抑制MSC的成脂分化,显著抑制MSC成脂诱导分化第3、6天后关键基因PPARγ与FABP4的表达。结论:滋肾降糖丸具有抑制MSC成脂分化的作用,其作用机制可能与抑制MSC上PPARγ2与FABP4的表达有关。

在PDMS-玻璃微流控芯片上的细胞培养

微流控芯片上的细胞培养技术是构建一个整体化的片上细胞分析实验室的基础。针对芯片上细胞培养存活率低、容易污染等问题,该文提出了一套polydimethylsiloxane(PDMS)-玻璃微流控芯片的制备、处理方法及片上细胞培养的操作流程,并讨论了影响微管道细胞培养的因素,包括准备细胞悬液、避免气泡、芯片表面处理和培养液中的血清浓度等。应用这套方法,在微流控芯片上成功培养了多种哺乳动物细胞。