玻璃表面cDNA微阵列的制备与优化

对DNA进行荧光标记,确定简单、实用和有效的固定化方法和筛选出合适的杂交条件 ,是制备DNA阵列的几个关键步骤。在PCR的过程对cDNA进行标记 ,不同的掺入比例可以得到不同的标记效率,Cyedye -dCTP/dCTP的比例在1:3～1:4较好。将DNA固定到玻璃表面 ,poly -l-lysine方法是一种不需要对DNA进行修饰的有效方法。其中UV照射的能量以600mJ效果最好 ;水合(rehydrate)温浴过程的温度以65°C最佳。在固化过程中所用探针的浓度0.2 -0.5mg/ml对杂交信号影响不多 ,也就是芯片表面固定的探针DNA应选在此范围内。杂交信号与所用的靶DNA的浓度成正相关 ,且在一定的范围内呈正比例关系。