RBMX通过下调PKM2抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭和糖酵解

目的探讨X连锁RNA结合基序蛋白(RBMX)对膀胱癌细胞(1376细胞和UC-3细胞)的增殖、迁移、侵袭的影响以及其在糖酵解中的作用。方法采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术,分别构建RBMX过表达和敲低的膀胱癌细胞模型(1376细胞和UC-3细胞)。采用RT-qPCR和Westernblotting分别在mRNA水平和蛋白水平上检测细胞模型是否构建成功。通过EdU增殖实验和克隆形成实验检测过表达和敲低RBMX后细胞的生长和集落形成能力,同时通过Transwell实验分析过表达和敲低RBMX后对细胞迁移、侵袭能力的影响;随后,采用Westernblotting检测过表达和敲低RBMX后糖酵解关键蛋白PKM1(M1型丙酮酸激酶)和PKM2(M2型丙酮酸激酶)的表达变化;最后,利用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分析过表达和敲低RBMX对膀胱癌细胞糖酵解的影响。结果RT-qPCR和Westernblotting结果显示,过表达RBMX膀胱癌细胞的mRNA和蛋白表达水平显著高于阴性对照组(P<0.05),敲低RBMX膀胱癌细胞的mRNA和蛋白表达水平显著低于阴性对照组(P<0.05)。过表达RBMX明显抑制膀胱癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭,敲低RBMX则作用相反。Westernblotting实验结果显示,过表达RBMX使PKM1表达上升,PKM2表达下降,敲低RBMX则作用相反。葡萄糖消耗及乳酸生成实验表明,过表达RBMX均能抑制膀胱癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成(P<0.05),敲低RBMX均能促进膀胱癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成(P<0.05)。结论RBMX通过下调PKM2抑制膀胱癌的发生发展和糖酵解能力,有望成为膀胱癌诊断和治疗的潜在分子靶标。

环磷酰胺不同剂量及停药周期构建小鼠卵巢早衰动物模型比较研究

目的比较环磷酰胺(CTX)不同剂量和停药周期构建的小鼠卵巢早衰(POF)动物模型,寻找最佳造模方式,为进一步研究POF提供更为适用的实验模型。方法8周龄动情周期规律的C57BL/6雌性小鼠共40只,随机分成5组:CON(对照组),CTX80(80 mg·kg^(-1)·d^(-1)),CTX100(100 mg·kg^(-1)·d^(-1)),CTX120(120 mg·kg^(-1)·d^(-1)),CTX150(150 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续腹腔注射10 d,CON组注射生理盐水,其余组注射不同剂量CTX。记录小鼠体重、动情周期和卵巢脏器系数等,比较得出CTX诱导POF模型最佳暴露剂量。使用最佳CTX暴露剂量重新造模,随机分为模型组和对照组,分别在停药后第1、2、3、4周,检测血清性激素,计数各级卵泡等,比较得出CTX诱导POF模型最佳停药周期。结果(1)研究最佳造模剂量时,CTX150死亡2只,而CTX80小鼠仍有完整的动情周期,说明这两种剂量并非最佳。CTX各组在暴露过程中体重呈进行性下降,停止暴露后体重开始回升,但至停药第7天各组体重仍显著低于CON组(P<0.05)。停药第7天各CTX组卵巢脏器系数均显著低于CON组(P<0.01),CTX100最低(P<0.001),但各CTX组间差异无统计学意义(P>0.05)。考虑到尽量缩小药物对实验动物伤害的伦理要求,得出CTX诱导卵巢早衰模型的最佳暴露剂量为100 mg·kg^(-1)·d^(-1)×10 d。(2)研究最佳停药周期时,模型组停药后第1、2、3、4周血清抗苗勒管激素(AMH)水平、雌二醇(E_(2))水平、原始卵泡、初/次级卵泡均显著低于同期对照组(P<0.05),卵泡刺激素(FSH)水平在第1、3、4周均显著高于同期对照组(P<0.05),而第1、2、4周的闭锁卵泡计数均显著高于同期对照组(P<0.05),均表现出POF典型特征。随CTX停药周期延长,模型组小鼠原始卵泡、初/次级卵泡、成熟卵泡计数呈进行性下降,闭锁卵泡计数升高(P<0.05),CTX对卵巢功能损害呈进行性加重。比较得出CTX停药1周是诱导POF模型最佳成模周期。结论CTX100 mg·kg^(-1)·d^(-1)连续暴露10 d是建立CTX诱导小鼠POF模型的最佳造模剂量,最佳成模周期为停药后1周。

拮抗剂方案与黄体期长方案在卵巢正常反应患者新鲜胚胎移植中的临床结局比较

目的 比较拮抗剂方案与黄体期长方案应用于卵巢正常反应人群新鲜胚胎移植的临床结局。方法 回顾性分析2017年1月至2021年7月我中心首次行体外受精新鲜胚胎移植的卵巢正常反应患者的病例资料,按超促排卵方案分为拮抗剂方案组(n=115例)和黄体期长方案组(n=398例),比较二组间的一般资料、超促排卵指标及妊娠结局。结果 超促排卵过程中,拮抗剂组促性腺激素(Gn)使用天数、Gn用量均低于黄体期长方案组,但拮抗剂组人绒毛膜促性腺激素(hCG)扳机日卵泡刺激素(FSH)和黄体生成素LH水平均高于黄体期长方案组,差异有统计学意义(P<0.05)。黄体期长方案组获卵数、成熟卵子数、受精率、可利用胚胎数、优质胚胎数均较拮抗剂有升高趋势,但两组间无显著性差异(P>0.05)。在临床结局方面,拮抗剂方案组和长方案组的临床妊娠率和活产率比较(57.4%vs 56%,50%vs45.7%),统计学无显著性差异(P>0.05)。两组间早期流产率和异位妊娠率分别为6%vs 7.5%和1.7%vs 2.8%,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 对于正常反应患者,两组方案的临床妊娠结局相关指标均无显著性差异,但拮抗剂方案显著减少Gn用量及刺激天数,且缩短达活产的时间,选择拮抗剂方案可能获益更高。

弱精子症患者精子中DKKL1的表达

目的探讨精子顶体相关基因(DKKL1)在弱精子症患者精子中的表达特征及临床意义。方法收集正常男性和弱精子症患者精液,各取10μL精液用全自动计算机辅助精液分析系统(CASA)对精液进行常规分析。为了避免白细胞和生精细胞对结果的影响,剩余精液采用4个梯度的Percoll法离心分离和纯化精子。Trizol法提取精子RNA,实时荧光定量PCR从基因水平检测DKKL1基因在正常人和弱精子症患者精子中的表达差异;最后采用Western blot方法从蛋白水平检测DKKL1蛋白在正常人和弱精子症患者精子中的表达差异。结果精液常规分析结果显示,弱精子症和正常人两组之间的年龄、精液体积、精子浓度和正常精子形态比例均没有统计学差异(P>0.05)。与正常对照组相比,弱精子症组PR和PR+NP精子的比例显著降低(P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示,与正常对照组相比,DKKL1 m RNA在弱精子症患者精子中的表达量降低11.1倍。此外,Western blot结果显示,弱精子症组DKKL1蛋白的表达量与正常对照组相比,降低了2.4倍,差异具有统计学意义(P<0.01),该结果与实时荧光定量PCR结果一致。结论 DKKL1在弱精子症患者精子中的表达水平明显下降,表明其与精子运动密切相关,是导致弱精子症发生的原因之一。

阶段式健康教育模式在接受体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)患者中的应用分析

目的:探讨阶段式健康教育模式在接受体外受精-胚胎移植技术(IVF-ET)患者中的应用效果。方法:分析清远市人民医院生殖医学中心2016年1月~2017年12月100例接受IVF-ET的患者临床资料,依据护理方式不同进行分组,分为对照组50例和观察组50例。结果:两组IVF-ET患者干预前焦虑情绪、抑郁情绪评分比较,差异无统计学意义(P>0.05),干预后两组患者焦虑情绪、抑郁情绪评分均低于同组干预前,观察组患者干预后焦虑情绪、抑郁情绪评分均低于对照组,观察组患者满意度、6个月内受孕率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:阶段式健康教育模式在IVF-ET患者中应用,可以改善焦虑情绪和抑郁情绪,提高患者满意度和受孕率,值得临床推广应用。

促排卵药雷洛昔芬对小鼠着床窗期子宫内膜COX-2和LPAR3表达的影响

目的通过分析新促排卵药雷洛昔芬(raloxifene,RAL)对着床窗期小鼠子宫内膜容受性标志物环氧合酶-2(cyclooxygenase 2,COX-2)和溶血磷脂酸受体3(lysophosphatidic acid receptor 3,LPAR3)表达的影响,探讨雷洛昔芬是否损害小鼠子宫内膜容受性。方法雌性昆明系小鼠60只,随机分为RAL用药促排卵组和自然受孕对照组。在雌鼠妊娠第4.5 d,采用免疫组化法检测COX-2和LPAR3在2组雌鼠子宫内膜中的表达。结果 COX-2、LPAR3 2个因子在RAL用药组和自然受孕对照组小鼠中的表达均无显著性差异,P>0.05。结论通过RAL用药来进行促排卵,对着床期小鼠子宫内膜COX-2和LPAR3表达水平的影响不明显,对子宫内膜容受性未发现产生不良损伤。

心理护理在取精困难患者中的应用

目的观察心理护理干预对取精困难患者的影响。方法 155例取精困难患者随机分为干预组和对照组,干预组再次取精前行相应的心理护理干预,对照组再次取精前行常规护理,对两组取精成功率和对护理服务满意度进行比较。结果干预组取精成功率和对护理服务满意度均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论心理护理干预可明显提高取精困难患者取精成功率和对护理服务满意度。

两种口服促排卵药物对小鼠子宫内膜容受性影响的比较

目的比较口服促排卵药物雷洛昔芬(RAL)和克罗米芬(CC)促排卵对小鼠着床窗期子宫内膜容受性的影响。方法将48只昆明雌鼠随机分为对照组(NC)、CC组、RAL 180 mg组和RAL 240 mg组,灌胃给药后诱发排卵并合笼,妊娠后4.5 d取子宫内膜组织进行苏木素伊红(HE)染色实验及免疫组化实验。结果 (1)HE染色实验结果显示CC组小鼠子宫内膜发育欠佳,而其他3组的小鼠子宫内膜发育较成熟,组织形态好。(2)免疫组化实验结果显示,子宫内膜容受性标志物环氧合酶2(COX-2)和溶血磷脂酸受体3(LPAR3)在RAL 180 mg组、RAL 240 mg组与NC组的表达水平差异无显著性(P>0.05),而在CC组的表达水平显著弱于其他3组(P<0.05),使用RAL进行治疗不影响着床窗期小鼠子宫内膜容受性标志物COX-2和LPAR3的表达。结论 RAL具有与CC相似的促排卵作用,但对子宫内膜容受性的影响较CC小。

时差成像系统对IVF/ICSI周期胚胎发育及移植结局的影响

目的比较时差成像(TLI)系统培养与常规培养胚胎的发育情况及其新鲜胚胎移植的临床结局,探讨TLI系统应用于辅助生殖技术的临床价值。方法回顾性分析2019年1月至2020年12月在我中心行体外受精(IVF)或卵胞浆内单精子注射(ICSI)并选择新鲜移植的510个周期的临床资料。按照胚胎培养方式的不同分为TLI组(n=166)和常规组(n=344);常规组通过胚胎形态学评分优选胚胎进行移植,TLI组通过胚胎发育动力学参数及形态学评分优选胚胎进行移植。比较两组的一般资料、胚胎发育情况以及卵裂期胚胎新鲜周期移植的临床妊娠结局。结果(1)两组患者的一般资料比较,TLI组的平均年龄显著小于常规组,获卵数显著高于常规组(P<0.05);其余体质量指数(BMI)、基础FSH等指标均无显著性差异(P>0.05)。两组间受精率、2PN卵裂率、D3可利用胚胎率、卵母细胞利用率、D3优质胚胎率均无显著性差异(P>0.05);TLI组的正常受精率(67.99%vs.62.11%)、囊胚形成率(69.51%vs.65.76%)、可利用囊胚率(43.41%vs.38.86%)及优质囊胚率(28.36%vs.24.36%)均显著高于常规组(P<0.05)。TLI组新鲜周期移植胚胎数显著少于常规组(P<0.05);TLI组临床妊娠率较常规组有升高趋势,双胎妊娠率有下降趋势,但尚无显著性差异(P>0.05)。(2)因两组间年龄、获卵数存在统计学差异,故对数据进行倾向性匹配分析。匹配后两组患者间基线资料比较均无显著性差异(P>0.05);相关结局与匹配前基本一致,TLI组的正常受精率、囊胚形成率、可利用囊胚率、优质囊胚率均显著优于常规组(P<0.05),移植胚胎数显著低于常规组(P<0.05),而两组间胚胎种植率、临床妊娠率、流产率均无显著性差异(P>0.05)。结论TLI系统可显著提高卵子的正常受精率,改善囊胚形成和发育,提高囊胚利用率和优质囊胚率,为优选胚胎选择提供了可靠的依据;通过TLI系统选择胚胎,在减少胚胎移植数量的基础上,保证了稳定的临床妊娠结局。因此,认为通过TLI系统可优选出发育潜能较好的胚胎,为单胚胎移植提供有力支持。

冻融囊胚体外培养时间对临床结局的影响

目的探讨冻融囊胚复苏后体外培养时间对患者临床结局的影响。方法回顾性分析2013年1月至2017年12月在该中心接受冻融囊胚移植的425例共456周期不孕症患者的临床结局,根据囊胚复苏后体外培养时间的不同分为A组(培养时间≤2h)、B组(培养时间>2～4h)、C组(培养时间>4～6h);A、B、C 3组按激素替代治疗(HRT)方案和自然周期(NC)方案再分为6个亚组,A1组(培养时间≤2h,HRT),A2组(培养时间≤2h,NC);B1组(培养时间>2～4h,HRT),B2组(培养时间>2～4h,NC);C1组(培养时间>4～6h,HRT),C2组(培养时间>4～6h,NC),比较各组的基本资料及临床结局。结果 A组、B组与C组及6个亚组患者各项临床结局指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论冻融囊胚在移植当天复苏,体外培养时长并不影响临床结局。

促排卵药物对小鼠子宫内膜容受性标志物表达的影响

目的 比较应用促排卵药物雷洛昔芬(RAL)和克罗米芬(CC)对小鼠子宫内膜容受性(ER)的影响。方法 将48只健康昆明雌鼠,随机分为CC组、对照组(NC组)、RAL 180 mg组和RAL 240 mg组,用药后取子宫内膜采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测ER因子环氧合酶2(COX-2)和溶血磷脂酸受体3(LPAR3)蛋白的表达情况。结果 COX-2和LPAR3蛋白在CC组的表达水平显著低于其他3组( P <0.05),而NC组、RAL 180 mg组和RAL 240 mg组的COX-2和LPAR3表达水平比较,差异无统计学意义( P >0.05)。结论 使用CC进行促排卵显著降低COX-2和LPAR3在小鼠子宫内膜的表达,而使用RAL则无显著影响。

精浆抗苗勒管激素水平与体外受精周期中受精率的相关性研究

目的分析常规体外受精(IVF)周期中精浆抗苗勒管激素(AMH)水平与受精率之间的相关性,探讨其对IVF受精率的预测价值。方法选取2018-2020年在该院生殖医学中心行IVF治疗的不孕不育夫妇170对进行前瞻性研究,按男方精液参数将纳入研究的夫妇分为3组:正常精子组、高精子总数组和弱精子组。在取卵日取精液检测精浆AMH水平并进行IVF受精,计算精浆AMH、精液参数与受精率之间的相关系数,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评估其对受精率的预测能力。结果在整体研究人群中,男方总精子数、精子浓度、前向运动精子比例(PR)、总活力、精浆AMH均与受精率呈正相关(r=0.460、0.566、0.308、0.346、0.478,P<0.05),用于受精率预测的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.539、0.595、0.599、0.606和0.647;在弱精子组中,精浆AMH和PR与受精率呈正相关(r=0.299、0.266,P<0.05),用于受精率预测的AUC分别为0.665和0.511;正常精子组、高精子总数组精浆AMH及精液参数与受精率则没有显著相关性(P>0.05)。结论在整体研究人群和弱精子症患者中,精浆AMH与IVF受精率有显著相关性,可作为预测不孕不育患者IVF受精率的实验室指标。

囊胚的发育天数及质量对冻融周期单囊胚移植的临床结局影响

目的探讨囊胚的发育天数及质量对冻融周期单囊胚移植的临床结局影响,为冻融周期单囊胚移植的选择策略提供依据。方法回顾性队列研究分析2013年1月至2021年6月期间在清远市人民医院生殖医学中心进行单囊胚解冻移植治疗的患者资料,共893个周期。根据囊胚发育天数分为第5天(day 5,D5)组和第6天(day 6,D6)组,再根据囊胚质量分为四个亚组,分别为D5优质胚胎亚组(n=423)、D5非优质胚胎亚组(n=129)、D6优质胚胎亚组(n=196)、D6非优质胚胎亚组(n=145),比较各组的一般资料、临床结局和新生儿结局。结果①D5组的临床妊娠率[60.14%(332/552)]、着床率[60.14%(332/552)]和活产率[47.64%(263/552)]均显著高于D6组[45.75%(156/341)、45.75%(156/341)、36.36%(124/341),均P<0.001],但两组的女方体质量指数、不孕年限、移植日内膜厚度和流产率差异均无统计学意义(均P>0.05),此外,两组的新生儿出生体质量、低出生体质量发生率、巨大儿发生率和男女性别比等新生儿出生结局差异均无统计学意义(均P>0.05)。②D5优质胚胎亚组、D5非优质胚胎亚组、D6优质胚胎亚组、D6非优质胚胎亚组的临床妊娠率分别为61.00%(294/482)、54.29%(38/70)、51.00%(127/249)、31.52%(29/92),活产率分别为48.96%(236/482)、38.57%(27/70)、41.37%(103/249)、22.83%(21/92),组间差异均有统计学意义(均P<0.001),D5优质胚胎亚组的临床妊娠率和活产率最高,D6非优质胚胎组的临床妊娠率和活产率最低。四个亚组的新生儿出生体质量、巨大儿发生率和男女性别比等新生儿出生结局差异均无统计学意义(均P>0.05),而低出生体质量发生率分别为5.08%(12/236)、0(0/27)、4.85%(5/103)、23.81%(5/21),差异有统计学意义(P=0.014)。③D5非优质胚胎亚组的临床妊娠率和活产率与D6优质胚胎亚组比较差异均无统计学意义(均P>0.05),进一步比较两亚组中不同级别的囊胚,D5非优质胚胎亚组的4BC临床妊娠率和活产率均略低于D6优质胚胎亚组的4AA、4AB、4BA,流产率均略高于D6优质胚胎亚组的4AA、4AB、4BA,但差异均无统计学意义(均P>0.05);D5非优质胚胎亚组的4BC临床妊娠率和活产率均比D6优质胚胎亚组的4BB略高,但差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论冻融周期单囊胚移植时,建议优先选择D5优质囊胚,当面临D5非优质囊胚和D6优质囊胚时,最优的囊胚移植顺序可能是D64AA>D64BA>D64AB>D54BC>D64BB。

PACAP及其衍生物治疗糖尿病及其并发症的研究进展

垂体腺苷酸环化酶激活肽（PACAP）是近年新发现的神经多肽,属于促胰液素/胰高血糖素/血管活性肽（VIP）家族中的新成员,广泛分布于脑和外周组织器官,尤其在内分泌胰腺、性腺、呼吸和生殖系统,在能量代谢、神经保护、免疫系统等发挥重要生理学功能。糖尿病是一种常见的主要以高血糖为特征的慢性代谢性疾病,糖尿病并发症日益严重威胁着人们的身体健康,已成为导致糖尿病患者致死、致残的主要原因。主要对PACAP治疗糖尿病及其并发症国内外研究的最新进展进行论述。

睾丸体积、卵泡刺激素和精浆中性α-糖苷酶在无精子症分型诊断中的应用

世界范围内不孕不育人口约占育龄夫妇的15%,无精子症是男性不育症中较为严重的一种类型,占男性不育的10%-20%。无精子症分为梗阻性无精子症（obstructive azoospermia,OA）和非梗阻性无精子症（non-obstructive azoospermia,NOA）两种。以往鉴别无精子症类型主要通过睾丸活检、阴囊探查和输精管造影等有创方法,其临床应用受到制约。因此,寻找无创、简便、准确的无精子症分型的诊断方法实属必要。睾丸体积、血清生殖激素,

第5日与第6日高质量冻融囊胚移植临床结局的比较研究

目的比较研究冻融囊胚移植(frozen-thawed blastocyst transfer,FBT)周期移植第5日(D5)与第6日(D6)高质量囊胚的临床结局差异。方法回顾性分析2013年1月—2017年8月期间在本中心接受FBT的365例共387个周期不孕症患者的临床结局,根据形成扩张囊胚的天数及移植胚胎的个数分4组,分别为第5日双囊胚移植组(double D5 blastocysts transfer group,DET5组)88个周期、第5日单囊胚移植组(single D5 blastocyst transfer group,SET5组)69个周期、第6日双囊胚移植组(double D6 blastocysts transfer group,DET6组)129个周期及第6日单囊胚移植组(single D6 blastocyst transfer group,SET6组)101个周期。结果四组患者的平均年龄、不孕年限、内膜厚度、基础卵泡刺激素(FSH)及冻融胚胎的复苏率比较,组间差异无统计学意义(P>0.05);SET5组的临床妊娠率(62.3%)和种植率(62.3%)显著高于SET6组(46.5%,46.5%)(P均为0.04),与DET5组和DET6组比较差异无统计学意义(P>0.05);DET5组及DET6组的多胎率均为42.6%,分别与SET5组及SET6组(均为0.0%)比较,差异有统计学意义(P均为0.00)。结论 FBT周期选择高质量的D5囊胚进行单胚胎移植,可以确保临床妊娠率和种植率,并显著降低多胎率。

子宫内膜息肉术后患者冻融胚胎移植子宫内膜准备方案的选择分析

探讨降调节后激素替代(GnRH-a+HRT)和促排卵2种子宫内膜准备方法对子宫内膜息肉术后不孕患者冻融胚胎移植(FET)妊娠结局的影响,为子宫内膜息肉术后不孕患者冻融胚胎移植的子宫内膜准备方案提供选择依据。方法:选择子宫内膜息肉术后3个月内行FET不孕患者98例,按子宫内膜准备方案分为GnRH-a+HRT组(n=54)和促排卵组(n=44)。回顾性分析两组患者一般情况,胚胎移植情况及妊娠结局。结果:两组患者年龄、不孕年限、体重指数、移植胚胎数、移植优质胚胎数、移植优质胚胎率和流产率、异位妊娠率比较差异无统计学意义(P>0.05)。GnRH-a+HRT组比促排卵组的种植率及临床妊娠率有升高趋势,其中囊胚的种植率有统计学差异(P<0.05)。结论:GnRH-a-HRT周期和促排卵周期在子宫内膜息肉术后不孕患者作为冻融胚胎移植的子宫内膜准备方案均能获得较好的妊娠结局,但GnRH-a-HRT周期相对于促排卵周期能够提高囊胚的种植率。