KIR2DL分子的研究进展

KIR2DL分子是NK细胞受体(NKR)的一种,属免疫球蛋白样受体家族成员,分布在NK细胞和部分细胞毒性T淋巴细胞上。KIR2DL与相应的配体HLA-C结合后传递抑制信号,使NK细胞对靶细胞的杀伤作用被抑制。本文对此受体的结构及其识别与信号转导机制的研究进展作一综述。

树突状细胞来源的趋化因子的免疫调节作用研究进展

树突状细胞是一类重要的免疫调控细胞 ,它所产生的趋化因子有重要的免疫调节作用 ;趋化吸引免疫细胞参与Th1或Th2类免疫反应 ,促进免疫细胞的成熟 ;介导其他细胞与树突状细胞的交互反应以及优化炎症反应 ,使其向有利于机体的方向发展等。树突状细胞可能还有更多的免疫学作用由趋化因子实现 。

牛膝多糖体外诱导人T细胞表达IFN-γ和IL-4蛋白的机制探讨

目的 :探讨牛膝多糖免疫调节作用的机制。方法 :使用牛膝多糖在不同浓度或在不同时间内对人T细胞进行体外诱导培养 ,用ELISA方法测定培养上清液的IFN γ及IL 4的蛋白表达情况。结果 :①人T细胞受不同浓度ABPS刺激时 ,IFN γ分泌水平随ABPS浓度递增 ,在 4 0 0 μg ml时 ,IFN γ表达量最高 (P <0 0 5 ) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。②人T细胞在ABPS刺激不同时间后 ,IFN γ分泌水平逐步增高 ,在 4 8小时时与其他各时间点比较 ,有非常显著的差异 (P <0 0 0 1) ,而IL 4的分泌始终处于低水平 (P >0 0 5 )。结论 :①ABPS能诱导人T细胞分泌IFN γ ,该作用呈时间、剂量依赖性变化 ,而抑制IL 4的分泌。②在蛋白表达水平上证实ABPS能够促进Th1类细胞因子的分泌 ,而抑制Th2类细胞因子的分泌。

细脚拟青霉总多糖对人外周血单核细胞TNF-α水平及增殖活性的影响

目的提取分离细脚拟青霉总多糖 (PtPs) ,探讨其对人外周血单核细胞 (PBMC)的调节作用。方法采用水提醇沉淀法提取PtPs成分 ;用不同浓度的PtPs单独或协同脂多糖 (LPS)在体外刺激PBMC ,酶联免疫法测定TNF α的水平 ,溴化四唑蓝法测定增殖活性。结果所得PtPs制品的纯度为 76 .1% ;适当剂量的PtPs (10 0～ 5 0 0 μg/ml)能够单独或协同LPS提高PBMC对TNF α的分泌 ;还可剂量依赖性地促进PBMC的增殖活性。结论PtPs对体外培养的PBMC具有激活作用 ,可能是发挥免疫药理作用的主要活性成分。

细脚拟青霉多糖抗乙型肝炎病毒的体外实验研究

目的:探讨细脚拟青霉多糖(PtPs)体外抗乙型肝炎病毒(HBV)的活性。方法:通过CCK-8试剂盒检测PtPs对HepG2.2.15的细胞毒性。以无或低毒浓度的PtPs作用于HepG2.2.15细胞,采用ELISA法检测细胞内和培养上清的HBsAg,HBeAg水平;采用荧光定量PCR法检测细胞内和培养上清中HBV DNA的水平。结果:随着PtPs浓度的增加细胞内的HBeAg和上清中的HBeAg、HBV DNA的水平显著下降。PtPs对细胞内和上清中HBeAg的抑制率高度相关,r=0.994,P<0.01。PtPs作用24 h后细胞内和上清中的HBeAg的治疗指数分别为5.63和3.30。结论:PtPs在体外对HBeAg和HBV DNA的合成与分泌有抑制作用。

突变型人白细胞介素18cDNA的克隆

目的 :获得人白细胞介素 18cDNA。方法 :从 1名健康献血者的外周血单个核细胞 (PBMC)中提取总RNA ,通过PT -PCR扩增出人白介素 18(hIL - 18)的cDNA ,与PUCmT载体连接 ,构成重组质粒 ,进行测序及同源性分析。结果 :已获得hIL - 18的编码序列 ,且与Ushio等报道的序列相比存在 3处有意义突变。结论 :克隆了突变型hIL - 18cDNA。

脂多糖对人单个核细胞白细胞介素-6基因表达的影响

目的 :探讨脂多糖 (LPS)对人单个核细胞表达白细胞介素 6 (IL 6 )mRNA的影响。方法 :抽取人外周静脉血 ,经EDTA抗凝 ,LPS刺激培养 ,分离单个核细胞并提取总RNA ,将总RNA逆转录为cDNA ,然后用IL 6引物进行热启动PCR扩增。扩增产物热变性后与IL 6检测探针、捕获探针进行夹心杂交 ,最后加入亲和素 辣根过氧化物酶及其底物 ,显色检测杂交信号。IL 6引物及探针用PrimerPremier 5 .0软件设计。结果 :LPS可在转录水平上诱导IL 6mRNA表达 ,其作用强度与LPS剂量呈正相关 ;IL 6mRNA表达丰度有时间效应 ,刺激 4h后 ,IL 6mRNA的表达最高。结论 :LPS能显著增强人单个核细胞表达IL 6mRNA。

大肠埃希菌氨基糖苷类耐药株aac(3)-Ⅱ基因保守区分析

常规方法分离鉴定47株大肠埃希菌,以标准纸片扩散法(K B法)对其进行常用氨基糖苷类药物敏感性测定,耐药株经PCR检测aac(3) Ⅱ基因保守区,扩增产物进行DNA测序分析。初步探讨大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株与aac(3) Ⅱ基因保守区之间的关系,结果显示本地区大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株的aac(3) Ⅱ基因保守区具65位G、84位T和65位A、84位C两种基因型,且高度耐药菌株皆为65位G、84位T基因型。

人EGF受体干扰序列-IL18融合基因构建及其表达产物结构预测

目的:构建带有EGF受体干扰序列的人IL-18融合基因并预测其表达产物的二级结构。方法:利用分子生物学技术,将人IL-18的成熟肽序列cDNA与EGF受体干扰序列cDNA融合,构建重组体EGF-IL18。应用蛋白质分析软件对融合基因翻译后在二级结构水平上的一些生物学特性加以预测。结果:测序表明融合基因序列与设计一致。其相应的氨基酸序列经软件分析,并与人IL-18的成熟肽单独的分析结果相比较,发现在二级结构水平几乎没有变化,融合过程未影响IL-18的活性。结论:该融合基因可进一步用于导向多肽EGF-IL8的基因工程。

微板酶联夹心杂交法定量检测人IL-18 mRNA

目的 :建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术 ,定量检测人IL 18mRNA。方法 :针对人IL 18mRNART PCR产物一条链的不同区域序列设计一对特异探针 ,其中一条为捕获探针 ,5’端为氨基修饰 ,可以与微量DNA结合板表面的NOS基团共价结合 ,“竖直”地包被在微孔板内 ;另一条为检测探针 ,3’端标记生物素。提取人外周血单个核细胞中总RNA ,进行RT PCR扩增IL 18mRNA ,产物热变性后加入已包被捕获探针的微孔板内进行杂交 ,再加入检测探针与已杂交的产物结合 ,最后经亲和素 辣根过氧化物酶 (SAV HRP)系统检测杂交信号。结果 :该法检测IL 18mRNART PCR产物的灵敏度明显高于琼脂糖凝胶电泳 ,重复性良好 ,且结果数据化。结论 :该方法具有操作简单、灵敏度高、特异性强等优点 ,适合于PCR扩增产物的定量检测。

大肠埃希菌氨基糖苷类耐药株aac(3)—Ⅱ基因保守区分析

常规分离鉴定47株大肠埃希菌,以标准纸片扩散法(K—B法)对其进行常用氨基糖苷类药物敏感性测定,耐药株经PCR检测aac(3)—Ⅱ基因保守区,扩增产物进行DNA测序分析。初步探讨大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株与aac(3)—Ⅱ基因保守区之间的关系,结果显示本地区大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株的aac(3)—Ⅱ基因保守区具65位G、84位T和65位A、84位C两种基因型,且高度耐药菌株皆为65位G、84位T。

微量酶标夹心杂交法定量检测人iNOS-mRNA

目的:建立一种高灵敏度、高特异性、精确、简便的微孔板酶联夹心杂交技术,对人iNOS—mRNA进行定量检测。方法:设计两条特异探针,其中一条为用捕获探针,5’端连接氨基,能与微孔板表面的NOS基团共价结合,"竖直"地包被在微孔中,另一个为检测探针,3’端带有生物素标记。用脂多糖(LPS)刺激人外周血单个核细胞24h后,提取巨噬细胞总RNA,进行RT—PCR扩增,PCR产物热变性后加入到已包被捕获探针的微孔板内,并加入检测探针进行夹心杂交,最后加入链亲和素—辣根过氧化物酶(SAV—HRP)及底物,在450nm波长检测杂交信号。结果:该方法检测iNOS—mRNA的灵敏度明显高于RT—PCR—琼脂糖凝胶电泳;特异性高,RT—PCR和酶联夹心杂交均无非特异阳性信号出现;重复性良好。结论:本方法操作简单、灵敏度高、特异性强、结果数据化,适合于iNOS—mRNA的定量检测。